摘要：用已知遗传图位的BAC克隆片段 ,对水稻 (Oryzasativa)小穗cDNA文库进行筛选 ,获得一个水稻小GTP结合蛋白 (smallGTP bindingprotein ,SGP)的相关序列 ,序列测定后以该cDNA序列为基础将 4个表达序列标记 (EST)进行了电子克隆 (electroniccloning) ,根据电子克隆结果设计引物 ,利用RT PCR方法获得了一个水稻 (Oryzasati va)中尚未鉴定的cDNA克隆Osrab5B ,长 10 16bp。它与龙船海棠属 (Mesembryan themumcrystallinum)和百脉根属 (Lotusjaponicus)命名为rab5B基因 (序列登录号分别是AJ0 0 62 2 5和Z73939)有着高度同源性 (cDNA核苷酸序列ID值分别大于 74 %和76% ) ,同属rab家族的一个新的亚族。进而根据Osrab5B的cDNA序列设计引物 ,扩增得到Osrab5B的基因组克隆 ,序列分析表明它至少有 7个内含子和

摘要：背景:血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)在血管内皮细胞生长因子的信号转导中有主导效应,并在某些疾病包括白血病的病理性血管生成中起关键作用。另外,白血病细胞分泌的血管内皮细胞生长因子还诱导自身表达VEGFR2,从而维持自身存活、增殖。目的:观察表达VEGFR2短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒载体Lenti6/shVEGFR2在全身性NOD/SCID白血病模型鼠中的作用。设计:随机、平行对照、开放性实验。单位:中山大学附属第二医院儿科,中山大学生物工程研究中心。材料:实验于2004-05/2006-01在中山大学附属第二医院医学研究中心、中山大学生物工程研究中心完成。分别以HL60,EA·hy926细胞株作为实验用白血病细胞、人血管内皮细胞的来源。Block-iT Lentiviral RNAi Expression System(Invitrogen);human VEGFR2 Mcb(PE标记,R&D)。CD31组化试剂盒(武汉博士德公司),CD33-PE流式细胞荧光标记抗体(BD公司)。方法:①制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链。②构建pU6/shVEGFR2入门克隆。瞬时转染细胞,构建表达克隆Lenti6/shVEGFR2,与ViraPowerTM Packaging Mix共转染到293FTTM细胞中,产生携带表达克隆的慢病毒载体。③pU6/shVEGFR2入门克隆转染和Lenti6/shVEGFR2转导HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制率。④建立HL60白血病模型后观察注入人血管内皮细胞后小鼠骨髓微血管的分布。⑤将NOD/SCID小鼠20只随机分为4组,每组5只:白血病模型鼠组,白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒组,白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组及白血病模型鼠静脉注射内皮细胞组。检测各组小鼠的骨髓细胞CD33表达变化、骨髓微血管密度变化及外周血细胞涂片、肝、脾的肿瘤浸润情况,以了解Lenti6/shVEGFR2重组慢病毒对小鼠白血病的作用。主要观察指标:①VEGFR2siRNA鉴定结果。②pU6/shVEGFR2入门克隆转染HL60后对其VEGFR2表达的影响。③pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后细胞抑制率比较。④慢病毒介导的shRNA对HL60模型鼠VEGF/VEGFR2旁分泌和自分泌的影响。结果:①pU6/shVEGFR2入门克隆转染HL60后对其VEGFR2表达的影响:VEGFR2siRNAc抑制HL60细胞效率最高,利用其构建的pU6/shVEGFR2入门克隆并转染HL60,抑制细胞效率达84.9%;显著抑制HL60细胞VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达。②pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后细胞抑制率比较:pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后48h细胞抑制率相近,48h后入门克隆转染组细胞抑制率明显下降(P<0.01);而表达克隆转导组细胞抑制率变化缓慢,在96h达高峰,120h稍降,变化无显著差异。③慢病毒介导的shRNA对HL60模型鼠VEGF/VEGFR2旁分泌和自分泌的影响:白血病模型组、白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒组、白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组小鼠骨髓流式细胞仪HL60检测结果分别为(25.8%±4.9)%,(14.3%±5.1)%,(8.4±2.6)%,三组比较,差异有显著性意义(P<0.05);白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组微血管密度明显小于白血病模型鼠静脉注射内皮细胞组。白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组与其他组相比HL60细胞数最低。结论:①pLenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后持续高水平抑制细胞。重组慢病毒Lenti6/shVEGFR2具有抑制白血病小鼠骨髓血管生成的作用。②VEGFR2 siRNA可阻断白血病HL60细胞VEGF/VEGFR2自分泌的内环路,在体外、动物体内均得到验证。③VEGF/VEGFR2自分泌链和旁分泌链的联合阻断加强了抗白血病效果。

摘要：选用4个转抗真菌蛋白基因恢复系及2个非转化对照与5个不育系,按5×6NCⅡ交配设计对转基因杂交稻组合12个农艺和品质性状的配合力进行研究.结果表明:①株高、穗长、有效穗数、单株粒重和垩白粒率、垩白度、胶稠度等性状以加性效应占主导作用,结实率、整精米率和糊化温度等性状则以非加性效应为主.②转基因恢复系不同性状间及与非转化对照同一性状间的一般配合力都存在差异,E32的转基因后代主要农艺性状一般配合力变差,而主要品质性状一般配合力变好,七丝软占的转基因后代则表现相反.③亲本中以转基因恢复系EF38和不育系310S的一般配合力的表现为优,转基因组合中则以培矮64S/EF84、珍汕97A/EF29的多数性状特殊配合力表现最好.

摘要：系统研究了碳源、氮源、无机盐、维生素等培养基因素对灰树花深层发酵菌丝体产量的影响 ,并通过均匀设计法优化了发酵培养基配方。结果表明 :4 6 %玉米粉、3 5 %豆饼粉、0 1%葡萄糖、0 32 %KH2 PO4 、0 0 1%MgSO4 、少量VB1的培养基配方可使菌丝体产量达到最大。采用此配方试验 ,菌丝体产量平均值达 1 77± 0 0 6g/10 0mL。

摘要：目的了解萍乡地方株HPV16 L1基因结构特点,分析其结构蛋白L1基因多态性及蛋白特性变化,为基于L1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据。方法设计HPV16型L1基因特异性引物,从宫颈脱落上皮细胞中提取DNA,进行PCR扩增鉴定,将扩增的片段同T-载体连接,然后导入到大肠杆菌DH-5α中培养,提取质粒DNA进行测序。结果测定的序列与标准基因序列（NC Sbjct 496）比较,萍乡地区宫颈癌感染的HPV16型L1基因同源性为98.9%~99.6%,分别形成5种突变模式,其中3处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也相应发生变化,但有1处由于核苷酸的丢失造成翻译的氨基酸也相应发生变化。结论萍乡地方株HPV16 L1核酸有一定程度的变异,可能会造成HPV16 L1蛋白免疫原性的差异。.此株改变也可能是本地区导致宫颈癌的主要原因。实验结果为研制适应本地区的基于HPV16 L1的基因工程疫苗提供了可靠实验依据。