摘要：目的探讨保存不同时间的大鼠部分肝脏移植后的肝细胞再生及其可能机制。方法采用近交系雄性Lewis大鼠为供、受者，按照实验设计分别将供肝于4℃UW液中保存1h（冷缺血1h组）、8h（冷缺血8h组）和16h（冷缺血16h组）．然后进行原位肝移植，移植肝恢复血流前，用3-0丝线结扎供肝左侧巾央叶、左外叶及尾状叶，保留右侧的肝叶，即可制成大鼠50％体积肝脏（以下简称“半肝”）原位移植模型。术后观察各组移植肝的存活情况和肝细胞再生情况；采用逆转录聚合酶链反应测定肝组织中白细胞介素-6（1L-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达情况；采用Western印迹法检测肝组织中信号传导与转录因子-3（STAT-3）表达情况；采用免疫组织化学染色检测移植肝组织中细胞周期素D1（Cyclin D1）的表达和肝细胞摄取溴脱氧尿核苷（BrdU）情况。结果各组手术成功率均为100％。与冷缺血1h组相比，冷缺血8h组和冷缺血16h组移植肝组织中TNF-α（F=67．45，P〈0．05）和IL-6（F=287．73．P〈0．05）的表达明显增加。STAT-3的表达也明显增强。肝移植后24h．冷缺血8h组在胞浆和细胞核内均有Cyclin D1的表达，而冷缺血16h组移植肝组织中未见明显的Cyclin D1表达。移植后24h，冷缺血16h组的BrdU染色阳性的肝细胞数无明显增多，而在冷缺血8h组可见BrdU染色阳性的肝细胞明显增多（t=19．40，P〈0．05）。结论冷保存一定时限的大鼠部分肝脏在移植后可获得肝细胞再生，此过程可能通过TNF-α／IL-6／STAT-3／Cyclin D1／DNA合成的途径进行调节；当冷保存时间达16h后，肝细胞不能对肝脏再生早期信号起反应。

摘要：目的探讨大鼠异体胰腺移植模型的手术操作方法,并对大鼠颈部胰段移植和腹部胰十二指肠移植模型的术式和特点进行比较。方法施行颈部胰段移植60次和腹部胰十二指肠移植模型60次,均采用显微外科缝合法进行动、静脉吻合。结果颈部和腹部异体胰腺移植的供体手术时间分别为(31．0±6．0)min和(37．6±3．8)min；受体手术时间分别为(49．2±5．6)min和(60．6±7．8)min。两组供体平均手术时间差异无统计学意义(P＞0．05)；腹部模型受体手术时间明显长于颈部模型(P＜0．05)。无干预同系移植组中,颈部和腹部异体胰腺移植术后1周存活率分别为93．6%和86．2%,两种术式的手术成功率差异无统计学意义(P＞0．05)。结论两种异体胰腺移植术式均可以满足胰腺移植免疫和生理研究的需要。两种术式分别有其各自的优缺点,术式选择主要根据实验者的设计进行。

摘要：目的针对HLA-EmRNA靶序列不同位点,设计合成多个siRNA链,定量分析其对HLA-E(+)肝癌BEL-7402细胞的基因沉默效率,筛选最佳抑制效果的siRNA。方法用IFN-γ(5×105IU·L-1)诱导BEL-7402细胞表达HLA-E基因,经流式细胞技术纯化后作为靶细胞。设计并合成3条HLA-E siRNA链(A、B、C),将各siRNA(0.1mmol·L-1)经脂质体Lipofectamin 2000转染至靶细胞。采用细胞免疫荧光、流式细胞技术、Western杂交、实时PCR等定量方法,比较48h后各siRNA的基因沉默效果,并观察HLA-E基因沉默对NK肿瘤细胞杀伤的影响。结果与空白对照、非特异组相比,3组(A、B、C组)HLA-E siRNA均明显抑制细胞HLA-E抗原、蛋白产物、mRNA、细胞表面HLA-E分子的表达(P<0.01),B、C组抑制效果接近90%,高于A组(P<0.01)。A、B、C组NK肿瘤杀伤率升高(P<0.01),而B、C组肿瘤杀伤效果高于A组(P<0.01)。结论经筛选的HLA-EsiRNA能特异、高效沉默肝癌细胞HLA-E基因表达,可能抑制其非经典HLA-Ⅰ途径免疫逃避,为肝癌"基因-免疫"治疗提供新的治疗策略。

摘要：目的构建表达人类白细胞抗原-G（HLA—G）基凶shRNA载体，探讨其对自然杀伤细胞（NK）细胞杀伤效应的影响。方法构建4个HLA—G—shRNA真核表达质粒，转染至Huh7细胞。检测HLA—GmRNA及蛋白质水平的表达。将NK-92MI细胞与靶细胞共同培养，以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果经酶切及测序鉴定证实，插入序列与设计的序列相符。RealTime—PCR和Western-blot结果均表明重组载体抑制了Huh7细胞HLA-G基因的表达。NK-92MI细胞对转染HLA—G的shRNA的Huh7细胞杀伤作用明显升高（P〈0．01）。封闭NK-92MI细胞ILT2受体后，杀伤作用降低（P〈0．01）。结论HLA—GshRNA可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应。

摘要：背景：人类白细胞抗原（HLA）配型是影响肾移植效果的重要因素,其抗体检测有助于筛查术前致敏者。目的：探讨人类白细胞抗原配型联合抗人类白细胞抗原抗体监测在亲属活体供肾移植中的应用价值。设计、时间及地点：单一样本观察,病例回顾性分析,于2004-02/2007-09在中山大学附属第一医院完成。对象：选择同期中山大学附属第一医院行亲属活体供肾者、首次肾移植者66例,供者男27例,女39例,年龄19-66岁;受者男50例,女16例。方法：采用序列特异性引物聚合酶链反应法测定拟行亲属活体肾移植的供、受者人类白细胞抗原A,B,DR抗原分型,采用补体依赖微量细胞毒性试验于术前行交叉配型。采用甲泼尼龙联合抗CD25单克隆抗体或抗胸腺细胞球蛋白于术中和术后早期作免疫诱导治疗,采用以环孢素A或他克莫司为主联合吗替麦考酚酯和泼尼松的三联方案作维持性免疫抑制治疗。主要观察指标：采用酶联免疫吸附法筛查和监测受体的群体反应性抗体;检测肾移植效果及不同免疫抑制方案患者急性排斥情况。结果：66例亲属活体供肾移植中,供受者人类白细胞抗原A,B,DR配型错配数分别为0-3个60例,4-6个6例。在0-3错配数受体中,术后3例（5%）发生移植肾功能延迟恢复,4例（7%）发生急性排斥。在4-6错配数受体中,术后1例（17%）移植肾功能延迟恢复、2例（33%）急性排斥。人类白细胞抗原0-3错配数和4-6错配数两组比较,其移植肾功能延迟恢复和急性排斥发生率差异均有显著性意义（P〈0.05）。不同免疫抑制治疗方案对移植肾功能延迟恢复和急性排斥发生率无显著影响（P〉0.05）。所有急性排斥患者经甲泼尼龙和/或抗胸腺细胞球蛋白等治疗后逆转。对3例术前预致敏受者术后定期监测群体反应性抗体变化：1例群体反应性抗体水平无明显变化,移植肾功能顺利恢复;2例术前经血浆置换后转阴或自然转阴,术后发生急性排斥,经甲泼尼龙、抗胸腺细胞球蛋白等治疗后逆转。结论：亲属活体供肾组织配型中,人类白细胞抗原配型与肾移植术后急性排斥、移植肾功能延迟恢复等相关。术前组织配型及抗人类白细胞抗原抗体动态监测对于亲属活体供肾移植特别是预致敏受者很重要。

摘要：目的构建PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体并建立被稳定感染的HepG2单克隆细胞株。方法设计PRL-3基因特异性RNAi靶序列,合成靶序列的DNA oligo,退火形成双链DNA,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL-GFP线性化载体连接,产生重组慢病毒质粒LV-PRL3-siRNA,转化感受态细胞,PCR筛选阳性克隆,并测序鉴定。用Lipofectamine 2000将LV-PRL3-siRNA、pHelper 1.0和pHelper 2.0这3种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,经孔稀释法,测定病毒滴度。重组慢病毒感染肝癌HepG2细胞,进行RealTime-PCR和Western-Blot验证PRL-3基因的沉默效果,筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆细胞株。结果成功构建PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为6E+8 ***-1。重组慢病毒对HepG2细胞PRL-3基因表达有明显沉默作用,其中第一干扰序列效果最明显。筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆肝癌细胞株。结论成功构建人PRL-3基因特异性的慢病毒干扰载体,并筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆肝癌细胞株。

摘要：目的:探讨肝癌Hep3B细胞白细胞抗原-G(HLA-G)过表达对NK细胞体外杀伤作用的影响。方法:实验分为正常对照组(无干预措施,Hep3B组)、空载体对照组(转染空质粒,Hep3B-GFP组)和实验组(转染pEGFP-C1-HLA-G质粒,Hep3B-HLA-G组)。构建HLA-G真核表达质粒,转染至Hep3B细胞,经G418筛选,建立稳定过表达HLA-G的肝癌Hep3B细胞。Real-time PCR及Western blotting检测肝癌Hep3B细胞HLA-G mRNA及蛋白质水平的表达。分析肝癌Hep3B细胞HLA-G过表达及HLA-ABC抗体封闭靶细胞相应位点对NK细胞体外杀伤作用的影响。结果:经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符。Real-time PCR和Western blotting结果均表明,转染重组质粒的Hep3B细胞HLA-G过表达(P<0.01)。NK细胞对转染pEGFP-C1-HLA-G的Hep3B细胞杀伤作用明显降低(P<0.01),HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对Hep3B、Hep3B-GFP和Hep3B HLA-G细胞的杀伤均增加(P<0.01)。结论:pEGFP-C1-HLA-G表达载体可有效增加HLA-G表达,HLA-G过表达可以削弱NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应。HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对靶细胞的杀伤能力普遍有所提高。

摘要：制作网络课件是当前教育技术的一个热点.本文利用FrontPage制作肾移植术后外科并发症的网络型课件,对肾移植术后各种并发症作了系统介绍并给出相应处理方法,为学生和医生提供直观而形象的网络教程,也为医学网络型课件的制作提供经验.

摘要：目的：探讨肾移植受者自我效能与健康知识、健康行为之间的关系。方法：采用美国Stanford大学慢性疾病教育研究中心研制的自我效能量表中文版、自行设计的健康知识和健康行为问卷,调查了187名术后时间≥3个月肾移植受者的自我效能、健康知识掌握情况和健康行为，并分析自我效能与知识、行为之间的相关性。结果：肾移植受者的自我效能得分为(6.71±1.79)分,自我效能总分及各维度得分与健康知识、健康行为各方面得分均呈显著正相关。结论：肾移植受者的自我效能有待提高，临床护理工作中可运用自我效能理论对患者进行健康教育，提高患者的自我效能，帮助患者建立良好的健康行为，改善其健康结局。

摘要：目的了解肝脏疾病患者营养风险状况,为制订相应的护理措施提供依据。方法采用自行设计一般资料调查表和营养风险筛查量表(nutritional risk screening 2002,NRS 2002)对肝硬化、原发性肝癌和肝移植术后复诊患者各40例,共120例患者进行调查,比较3组患者营养风险发生率的差异。结果 120例肝脏疾病患者营养风险发生率为38.3%(46/120),营养不良发生率为12.5%(15/120);肝硬化患者营养风险发生率较原发性肝癌与肝移植术后复诊患者高(χ2值分别为9.899和11.429,P值分别为0.002和0.001)。结论护理人员应关注肝脏疾病患者尤其是肝硬化患者的营养风险,采取有效措施,以改善患者的营养状况,降低患者营养风险的发生。