摘要：目的建立实时荧光定量PCR检测百日咳鲍特菌的方法。方法以百日咳鲍特菌的重复插入序列IS481为目的基因,设计探针和引物,以克隆的IS481基因片段为DNA模板,在荧光定量PCR仪上建立实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线,并进行灵敏度、重复性、特异性实验。结果建立的定量标准曲线阈值循环数(Ct)与模板拷贝数呈良好线性关系(r=0.998);最低检测浓度为102 copies/μl;批内及批间变异系数均小于4%;对临床其他常见呼吸道病原体不出现特异性扩增曲线。结论实时荧光定量PCR法检测IS481基因可用于百日咳鲍特菌的快速检测,具有较好的灵敏度、特异性及重复性。

摘要：目的 对凝血试验试验项目的质控方法进行评价和设计。方法（1）每项试验以“允许总误差”形式确定质量要求。（2）计算每项测定项目在稳定操作下的不精密度和不准确度。（3）计算临界系统误差（SEc）和临界随机误差（REc）。（4）由计算机模拟程序确定侯选方法的性特征。（5）选择质控规则和质控测定结果个数。结果用该质控计划进行设计，大多数分析项目采用单规则1～2．5s即可实施有效的质量控制，Ped达到90％，Pfr小于5％，符合临床质量要求。结论对所有自动化分析仪试验项目，均能采用类似方式进行质控方法的选择和设计。

摘要：目的实验室信息系统(laboratory information system,LIS)利用样本条码标识建立实验室自动化系统检测后标本的管理流程。方法自动化流水线的标本检测完成后,设计LIS,根据样本条码校验项目完成属性,记录存放位置,检索需复查样本的存放状态,核定样本销毁时限等,实现信息化监控的样本后管理流程。结果建立了实验室自动化系统中标本在线和离线的规范高效管理,实现了检测标本管理流程的各节点监控,可有效预防样本后处理流程中的失误。结论应用该LIS建立了有效的标本管理流程并规范了实验室管理。

摘要：目的建立中华菊头蝠体内扩增血管紧张素转换酶2(ACE2)基因真核表达载体,研究SARS冠状病毒感染的跨种属传播机制。方法利用基因的种属保守性分别设计用于扩增5’未端和3’端cDNA的引物,从中华菊头蝠小肠组织中提取总RNA,在通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得cDNA 5’端和3’端序列基础上,进一步PCR扩增ACE2开放阅读框并克隆到pcDNA3.1。结果成功获得了中华菊头蝠的ACE2基因全长序列,并构建了其真核表达载体pcDNA3.1/R-ACE2。结论利用RACE技术扩增并构建了中华菊头蝙蝠的ACE2的真核表达载体,为研究SARS冠状病毒感染与免疫及跨种属传播机制奠定了基础。

摘要：目的对海南地区耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌进行碳青霉烯酶基因检测,为院内感染控制和流行病学研究提供依据。方法收集海南地区四家医院2012年8月-2013年8月临床分离的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌33株,用VITEK 2 compact进行细菌鉴定和药敏试验,采用改良Hodge试验(MHT)和双纸片增效试验分别进行碳青霉烯酶表型确认,对于阳性菌株,设计通用引物行PCR检测KPC、NDM-1、IMP、VIM、SME、OXA-23和NMC 7种基因,并对扩增产物进行测序和BLAST分析。结果 33株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中MHT试验有22株阳性,双纸片增效试验有18株阳性,经PCR方法对阳性菌株进行基因检测,11株携带NDM-1基因,3株携带KPC-2基因,1株携带IMP-4基因;其中有一株产酸克雷伯菌同时携带KPC-2、NDM-1和IMP-4三种基因,携带碳青霉烯酶基因的菌株对β-内酰胺类抗菌药物呈高度耐药,仅对阿米卡星的敏感性较高。未检测出VIM、SME、NMC和OXA-23基因。结论海南地区肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类抗菌药物主要机制为产生NDM-1、KPC-2和IMP-4基因,临床上应引起重视,要严格做好预防和控制工作。

摘要：目的对OPTION 4 PLUS血液凝固分析仪在临床应用作初步评价。方法用校正血浆、质控血浆、新鲜血浆对仪器的几项主要参数进行检测。结果准确度测定结果PT、APTT、TT、FIB均在质控血浆靶值范围内;混合新鲜血浆测定PT、APTT、FIB的精密度CV％<2％;FIB有良好的线性Y=37.134-7.172X;搞干扰试验HGB 5g/L、BIL 15.18μmol/L、脂肪乳0.5％不会影响PT测定结果;肝素0.5μmol/L可使APTT延长。结论仪器具有高灵敏度、高可靠性、高实用性,各项指标均符合设计要求,适合于各种类型医院使用。

摘要：目的对阴沟肠杆菌所产CTX-M型β-内酰胺酶进行基因克隆、原核表达重组质粒的构建及其特性研究。方法以产CTX-M型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌45号基因组DNA为模板,设计两对引物PCR扩增CTX-M,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列,再将CTX-M基因克隆到pGEX-6P-3表达质粒并转入感受态BL21,选择阳性菌落进行药物敏感试验和酶动力学检测。结果PCR扩增出大小为876bp和1067bp的基因片段,与GenBank上CTX-M-9和CTX-M-3酶的基因序列同源性为100%。CTX-M-3型重组菌株药敏试验结果与原菌株相比,对青霉素类和头孢噻肟具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致。结论重组质粒pGEX-6P-3/CTX-M构建成功,CTX-M-3型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性增加,亲和力下降。

摘要：目的探讨广州从化地区诺如病毒分子流行病学特点,分析从化地区诺如病毒的基因型。方法收集2011年1—12月从化地区腹泻患者标本218份,采用荧光RT-PCR对临床标本进行检测,同时针对诺如病毒ORF2基因区段设计引物,随机选取5株病毒进行ORF2基因序列测定。用ClustalW和MEGA5.0等软件进行序列特性分析和基因型分析。结果 218份临床标本中检测到38份阳性标本,检出率为17.43%。阳性率较高的月份为9、10、11、12月,全年最低检出率的时间为6、7月份(均为0),最高检出率的时间为11月份(32%)。扩增了5株诺如病毒ORF2基因序列,序列分析发现与GenBank中GⅡ组诺如病毒的相似性为76%～98%,与GⅠ组为43%～55%,其中与GⅡ-4组Farmington Hills、Lorsdale、ShanghaiSH52009等株同源性为94%～98%,确认该5株诺如病毒属于GⅡ-4型。进一步的氨基酸序列分析发现与f亚型2006b新变株同源性为97%。结论广州从化地区诺如病毒主要流行季节是冬季,克隆的5株诺如病毒属于GⅡ-4f 2006b型。2011年从化地区以GⅡ-4f2006b新变异株为主要流行株。

摘要：目的：建立T7RNA聚合酶／T7启动子载体系统，作为观察细胞融合是否成功的报导系统。方法：设计并合成引物从BL21细菌中扩增T7RNA聚合酶序列，并将其克隆进入真核表达载体pRc／CMV2中，作为RNA聚合酶的供体。T7RNA聚合酶特异性识别的r17启动子人工合成，构建于荧光素酶的表达载体pGL3中，利用其荧光素酶基因作为报导基因。两质粒共转染A549细胞和VeroE6细胞，检测荧光素酶的表达。结果：共转染pRc／CMV2。T7RNAP和pGL3-T7的A549细胞和VeroE6细胞的荧光强度分别为57745±7747和43679±8616，转染质粒pGL3-T7的细胞空白对照荧光强度1034±201和1091±157，分别与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：成功构建了T7RNA聚合酶/T7启动子载体的细胞融合报导系统，可应用于细胞融合的相关实验研究中。

摘要：目的监测2006年10月至2007年10月我国不同地区14家教学医院分离的腹腔感染病原菌的菌种分布及其体外药物敏感性。方法按设计方案收集来自腹腔感染的病原菌。菌株经中心实验室复核后,采用琼脂稀释法测定10类共29种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),数据输入WHONET5.4软件进行耐药性分析。结果此次监测收集的腹腔感染病例数为742例,分离出的病原菌为743株,其中革兰阴性菌占76.7%(570/743),革兰阳性菌占23.3%(173/743)。病原菌中分离率位于前5位的分别为大肠埃希菌(38.8%)、肺炎克雷伯菌(10.2%)、铜绿假单胞菌(9.2%)、屎肠球菌(8.2%)和金黄色葡萄球菌(4.4%)。对于所有肠杆菌科菌,敏感率高于90%的抗菌药物包括美罗培南、亚胺培南、替加环素、阿米卡星和他唑西林-三唑巴坦。对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和克雷伯菌,敏感性大于90%的药物包括亚胺培南(100%)、美罗培南(100%)、替加环素(100%)和他唑西林-三唑巴坦(91.5%～91.7%)。铜绿假单胞菌中多重耐药菌株的检出率为14.7%,鲍曼不动杆菌为61.3%。金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林(MRSA)的发生率为69.7%,所有菌株对替加环素、万古霉素和替考拉宁均敏感。替加环素对所有粪肠球菌和屎肠球菌均保持了100%的敏感率。粪肠球菌中敏感性较高的抗菌药物还有万古霉素(100%)、替考拉宁(100%)和氨苄西林(81.5%)。屎肠球菌中敏感性较高的抗菌药物还有万古霉素和替考拉宁(96.7%)。结论引起腹腔感染的病原菌以革兰阴性菌特别是肠杆菌科菌为主。替加环素、碳青酶烯类、他唑西林-三唑巴坦和阿米卡星对腹腔感染肠杆菌科菌保持了较高的抗菌活性,非发酵的革兰阴性杆菌的耐药性令人担忧。替加环素、万古霉素和替考拉宁对院内革兰阳性球菌保持了较高的抗菌活性。