摘要：为建立快速高效的烟草霉变微生物定量与定性的检测方法,本研究针对陈旧烟叶中分离的米曲霉的rDNAITS1基因片设计一对特异引物,制备含ITS1基因的重组质粒作为阳性对照,建立了米曲霉基因组的SYBR Green I应该定量PCR检测方法。结果显示,标准曲线的相关系数为0.998,最低可检测浓度为101copy/μL的阳性质粒,与其他的微生物的基因组不发生交叉反应,该技术可为检测烟叶霉变微生物提供快速可靠的检测手段。

摘要：【目的】以nisI作为食品级选择标记构建大肠杆菌-乳酸乳球菌穿梭载体。【方法】根据GenBank报道的乳链菌肽Nisin抗性基因nisI的序列,以pLEB590为模板,设计特异性引物,PCR扩增出nisI片段,经TA克隆、酶切鉴定及测序之后,亚克隆至大肠杆菌-乳酸乳球菌穿梭载体pMG36e中,重组子命名为pMG36e-NisI,再将pMG36e-NisI电转化至对Nisin敏感的乳酸乳球菌MG1363中。【结果】获得的重组菌MG1363/pMG36e-NisI在含有20IUNisin/mL的培养基中生长情况良好,遗传性能稳定,这表明nisI基因赋予了宿主菌MG1363对Nisin的抗性。【结论】nisI可以作为筛选标记用于食品级表达载体的构建。

摘要：探讨皮质脑电中皮层慢电位小波分析用于术中神经皮质(运动区)功能定位的方法。利用离散db5小波对皮质脑电信号数据进行8层小波分解并重构各单子频带信号,提取运动事件相关皮层慢电位在运动事件发生前后的能量比(ERP指标)为特征量,并构造特定阈值进行分类,结果与相应手指弯曲运动数据比较,进行检测正确率分析。将试验采集数据分成训练和测试组,分别用于特征提取方法和分类器的设计和性能检测,进行检出正确率分析。以皮层慢电位信号的ERP指标为特征量,以1.6为阈值进行分类,其分类定位检出正确率达到84%。通过皮质(运动区)皮层慢电位的小波分析方法可以更有效地进行术中运动功能区皮质定位的特征提取和分类。

摘要：八氢番茄红素脱氢酶(PDS)是巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)类胡萝卜素生物合成途径中的上游关键酶。本研究根据NCBI上已发布的巴氏杜氏藻mRNA序列(GenBank:Y14807),设计特异性引物,通过基因组步移法及半巢式PCR的方法,获得PDS编码区序列。在编码区序列获取过程中,发现5’端编码区有325 bp序列与NCBI上公布的cDNA序列有所不同,故采用了5’RACE技术进行验证,经过比对发现结果与本实验基因组步移所获得序列相匹配,推测NCBI公布mRNA序列的PDS与本实验获取的PDS可能为同工酶。然后根据获得的序列,再利用基因组步移PCR的方法获得其两端侧翼序列:启动子和终止子,并利用生物信息学工具对其进行分析。实验获得的完整PDS基因全长12678 bp,其中编码区序列长度为8113 bp,编码区上游序列3010 bp,编码区下游序列1555 bp,编码区序列含有12个外显子和11个内含子。通过生物信息学分,发现PDS启动子中具有多种转录因子结合位点。

摘要：杜氏盐藻是迄今为止工业化生产β-胡萝卜素最成功的经济微藻之一,番茄红素β-环化酶(LycB)是催化番茄红素合成β-胡萝卜素的关键酶。本研究根据实验室克隆得到的LycB的cDNA序列,通过分析其保守序列设计引物,通过分段克隆PCR及基因组步移的方法,克隆获得几乎完整的LycB基因组序列。测序结果表明,克隆到的该部分LycB基因组序列含有5863 bp,由11个外显子和10个内含子组成。再通过基因组步移的方法,获得LycB基因启动子和终止子序列。其中,5’端上游序列长度为2566 bp,3’端下游序列长度为818 bp。采用PlantPAN在线启动子预测工具进行分析,结果表明,该基因启动子含有一些顺式作用元件如光响应元件、盐响应元件等,表明巴氏杜氏藻LycB基因的表达可能受到光照及盐浓度等因素的调控。

摘要：【目的】革兰氏阳性菌的表面蛋白在病原菌致病性方面具有重要作用,表面蛋白锚定到细胞壁过程的关键酶—分选酶成为抗感染的新靶点。【方法】本文利用GenBank中的分选酶A基因(srtA)序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得618bp的DNA片段。按照常规分子克隆操作成功构建两种原核表达载体pet22-srtA和pTRX-srtA,转入大肠杆菌感受态BL21(DE3)中,在1mmol/LIPTG诱导下进行表达。利用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定和分析,【结果】结果显示:(1)重组载体pet22-srtA和pTRX-srtA分别表达出相对分子量为约45kDa和39kDa的外源蛋白;【结论】(2)分子伴侣硫氧还蛋白(Trx)有利于分选酶A基因的可溶性表达。该实验为后续的分选酶酶学性质研究特别是抑制剂筛选研究奠定良好基础。

摘要：同源建模技术(homology modeling)给蛋白质的研究带来了新的希望,在理论上解决了结构预测和功能分析以及蛋白质工程实施方面所面临的难题。纤维素酶(cellulase)是能水解纤维素生成纤维二糖和葡萄糖的一组酶的总称。对纤维素酶的研究目前已经发展到结构功能分析、理性设计等方面。由于实验方法不能胜任全部纤维素酶结构的测定工作,故以计算机为依托的同源建模技术便发挥着重要作用,它在纤维素酶分子改造中的应用主要有:家族同源分析、研究功能氨基酸的作用机理、基于分子结构的理性设计、预测突变体结构和新功能等。随着同源建模技术自身的不断完善,以及分子对接、分子动力学模拟等技术的发展,计算机模拟技术将在酶分子的改造过程中显示出巨大的生命力。

摘要：采用单因素及均匀实验设计确定了将环状芽孢杆菌胞壁溶解酶用于红发夫酵母破壁提取虾青素的最佳酶作用条件,即粗酶液pH值为5.0,体积为33mL(酶量1603.8U·g-1干酵母),温度37℃,100r·min-1振荡反应16.5h,虾青素的提取率可达到98%以上。通过对不同方法提取所得虾青素的光、热稳定性进行测试,发现酶法提取的虾青素不论是在光照还是在加热条件下均比机械法及酸法破壁提取所得的虾青素稳定。

摘要：该研究以公认安全(Generally Recognized as Safe,GRAS)的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)为宿主,构建高产紫色杆菌素的重组菌株。利用谷氨酸棒杆菌天然大质粒pTET3的复制与分配元件,构建了低拷贝质粒pOK12CG1,该质粒在谷氨酸棒杆菌中的拷贝数约为6拷贝/基因组,且与谷氨酸棒杆菌常用质粒pEC-XK99E和pXMJ19兼容。以低拷贝质粒pOK12CG1为骨架构建了携带紫色杆菌素合成操纵子(vioABCDE)的质粒pCGvio,并分别以谷氨酸棒杆菌标准株ATCC 13032和插入序列(Insertion Sequence,IS)元件删除株为宿主,构建了7株合成紫色杆菌素的重组菌株。通过初步筛选,发现基于低拷贝质粒的重组菌株ATCC 13032/pCGvio,其紫色杆菌素产量(508.24 mg/L)高于基于中高拷贝质粒的重组菌株ATCC 13032/pECvio(376.16 mg/L),而基于低拷贝质粒的IS元件删除重组菌株ISDM023/pCGvio紫色杆菌素产量达到了610.13 mg/L。进一步采用正交实验设计对重组菌株ISDM023/pCGvio进行培养基体积比(V_(LB):V_(BHIS))、诱导时间和IPTG诱导剂浓度这3个因素的发酵条件优化。结果表明,在VLB:VBHIS为1:2、诱导时间为18 h、IPTG浓度为0.75 mmol/L的优化条件下,紫色杆菌素的摇瓶发酵产量可达了1007.47 mg/L。该研究成功构建了紫色杆菌素的谷氨酸棒状杆菌重组菌株ISDM023/pCGvio,为谷氨酸棒状杆菌高效合成紫色杆菌素奠定了实验基础,也为其它产物的高效合成提供参考。

摘要：采用自行设计的MHC I类A型基因的引物从10只食蟹猴扩增得到11个3000bp左右MHC等位基因。通过在Blast比对之后,证实有7个Mafa-A等位基因,4个Mafa-AG等位基因,新的等位基因序列已递交GenBank。由于每个个体可以检测出多个不同的Mafa-A等位基因,这说明食蟹猴Mafa-A基因经过多次复制,并且推测Mafa-AG是Mafa-A衍生物。同时,研究了等位基因在个体中的分布和系统进化树分析。