摘要：目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白表达对大肠癌细胞侵袭与转移的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌LoVo细胞。用蛋白质印迹法筛选出一组抑制效率最高的细胞进行细胞划痕实验和Transwell实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的LoVo细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达77%,选择该组细胞作为有效干扰组进行后续实验。细胞划痕实验显示,干扰组细胞的划痕愈合能力明显低于对照组细胞(P<0.05)。Transwell实验显示,干扰组细胞的穿膜细胞数明显少于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失可明显降低大肠癌LoVo细胞的迁移运动能力,PI3Kp85α可能成为治疗大肠癌转移的新靶点。

摘要：目的克隆肝螺杆菌(***)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCSTP)全基因,并应用生物信息学方法对其进行分析。方法以肝螺杆菌全基因组作为模板,设计肝螺杆菌MCSTPc1977特异性引物,利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pET22b(+),从而构建原核表达质粒pET22b+/MCSTP并测序鉴定。应用生物信息学方法分析MCSTP基因的序列同源性及其结构特征。结果克隆的MCSTP基因经测序可知与GenBank公布的肝螺杆菌标准株ATCC51449序列一致性达99%,仅第1160bp处由A变为T。利用生物信息学方法进行分析可发现此基因与空肠弯曲杆菌、幽门螺杆菌具有非常低的相似性,表明其在微生物界中具有一定的特异性。结论成功构建pET22b+/MCSTP重组质粒,并通过生物信息学技术进行序列及结构分析,为进一步研究其生物学功能及致病机制提供了线索和依据。

摘要：目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达对大肠癌细胞增值的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌SW480细胞。用Western Blot筛选出一组抑制效率最高的细胞进行CCK-8细胞增值实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的SW480细胞PI3K p85蛋白表达显著降低,抑制率约90%,选择该组细胞作为有效干扰组。CCK-8细胞增值实验显示,接种48h、72h及96h后,干扰组细胞生长速度明显低于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可降低大肠癌SW480细胞的增值速度,PI3K p85可能是大肠癌靶向治疗的新靶点。

摘要：目的调研小肠镜在中国的应用状况,为小肠镜技术的普及和推广提供新的线索。方法本研究是一项抽样调查研究。2017年1月1日至2017年7月31日进行调查问卷设计,并于5月1日至7月31日在广东省进行预调查,收集和反馈问题。2017年8月30日至2017年12月30日于中国大陆地区开展抽样调查研究。通过电子和纸质调查问卷的形式向各医疗单位发送并收集数据。本研究共调查医院385家,接受应答者373家,数据缺失者7家,实际分析数据366家(95.1%)。分析开展小肠镜诊治的医院情况和小肠镜医师基本情况,并采用卡方检验对东部和中西部地区的数据进行比较。结果受调研单位中拥有小肠镜的占47.0%(172/366),主要集中于三级医院89.5%(154/172)。拥有独立小肠镜操作间的占65.1%(112/172),拥有用于小肠镜检查X线设备的单位占48.8%(84/172)。共有124名专业的小肠镜医师,女性占42.7%(53/124);中高级职称者占40.3%(50/124);医师年龄集中于31-40岁(50.8%)和41-50岁(27.4%)两个年龄阶段。43.0%(74/172)的单位仅有1~2名小肠镜操作医师,各单位年操作小肠镜诊断例次W50例次者占51.2%(88/172),治疗例次少于10例次者占51.7%(89/172)。15.3%(19/124)小肠镜医师未接受正规培训。东部地区拥有小肠镜的单位数量优于中西部[111(51.6%)比61(40.4%),P=0.034]。小肠镜医师的培训方面,东部未培训者占10.5%,中西部未培训者占22.9%,地区差异有统计学意义(P=0.031)。结论中国大陆地区各单位小肠镜年诊疗例次偏低、小肠镜医师相对缺乏。开展规范化的小肠镜培训是重要的任务。

摘要：目的:构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα. 方法:据GeneBank中大鼠MCP-1和GroαcDNA序列设计并合成引物,提取急性胰腺炎模型大鼠总RNA,RT-PCR 扩增,并将扩增产物TA克隆至pGEM-T easy载体,然后分别双酶切pGEM-MCP-1和pGEM-Groα回收目的片段再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+). 结果:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Gro α真核表达质粒构建完成后,用限制性内切酶、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定,证实其构建成功. 结论:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒构建成功,为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备急性胰腺炎pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-GroαDNA疫苗奠定了基础.

摘要：目的通过基因体外拼装（PBGA）获得带有BamHI和PstI内切酶位点的重组人碱性成纤维生长因子（rhbFGF）cDNA，并利用TA克隆技术构建含rhbFGF基因片段的重组质粒。方法（1）根据己知的hbFGF氨基酸序列并结合乳酸链球菌蛋白表达密码子来设计适于乳链菌内表达的hbFGF基因序列，分别在5’和3’端设计BamHI和PstI酶切位点，通过DNASTAR6．0将上述目的基因序列设计成22个可以相互重叠的寡核苷酸片段，bFGFl-bFGF22。（2）采用基因拼装技术，通过PCR反应，拼接I～22段寡核苷酸片段，合成带有设定内切酶位点的rhbFGFcDNA。（3）构建rhbFGFTA克隆载体。纯化上步拼接rhbFGF基因片段，产物与PMD18-TVECTOR进行连接反应。连接产物转化于***10感受态细胞，涂板、筛选、培养后提质粒，酶切鉴定并测序。结果（1）体外拼装带有BamHI和PstI内切酶酶切位点的rhbFGFcDNA经2％琼脂糖电泳验证；（2）构建了载体hrbFGF—PMD18，经酶切鉴定和测序证实碱基序列完全正确。结论利用PBGA和TA克隆技术可成功构建***18重组质粒。

摘要：目的:制备Trim26/ZNF173条件性基因敲除小鼠,为研究Trim26基因在肝癌发生中的作用及其机制提供动物模型。方法:设计基因敲除策略,Trim26的外显子5~7缺失引起的移码突变会破坏蛋白结构域,进而导致Trim26蛋白功能丧失。为此,我们拟删除Trim26基因的外显子5~7,以借助Cre/lox P系统构建Trim26基因条件性敲除的小鼠。简单地说,先获得嵌合体小鼠,选择高嵌合率小鼠与B6/N小鼠交配获得F1代Trim26fl/wt基因型的杂合子小鼠。F1代杂合子小鼠自交得到F2代Trim26fl/fl基因型的纯合小鼠和对照野生型小鼠。提取鼠尾基因组DNA并行PCR鉴定基因型,在DNA水平确定小鼠的基因型。结果:成功构建了打靶载体,打靶载体经限制性内切酶线性化后,成功电转导入了B6/BLU ES 细胞中,ES克隆经过LR-PCR初筛及Southern blot进一步验证,确定得到了3株中靶ES细胞(即3D、6A和10F),将中靶ES细胞扩增后进行囊胚注射,获得了12只Trim26的嵌合体小鼠(嵌合率不小于50%)。选择性成熟后的高嵌合率小鼠与B6/N小鼠交配繁育,得到F1代小鼠,PCR鉴定基因型确认获得了Trim26fl/wt基因型的F1代杂合子小鼠。性成熟后的F1代杂合子小鼠合笼交配后得到F2代小鼠,PCR鉴定基因型确认获得了纯合的Trim26条件性基因敲除小鼠(基因型为Trim26fl/fl)。结论:成功制备了Trim26条件性基因敲除小鼠,为进一步解析Trim26在肝癌发生中的作用及机制打下了良好基础。

摘要：目的观察放射性直肠损伤患者合并焦虑、抑郁及躯体症状障碍的发生率及治疗。方法采用横断面调查研究方法。以《中华胃肠外科杂志》编委会编委收治的放射性直肠损伤患者为调查对象。调查对象纳入标准:(1)患有盆腔肿瘤,接受过盆腔放疗;(2)肠镜提示直肠有炎性反应或溃疡。排除标准:(1)放射治疗前有心身疾病史;(2)不会使用智能手机,无法阅读和理解手机展示的问卷中的问题;(3)拒绝签署知情同意书。根据主客观管理分析(SOMA)自评量表、躯体症状健康量表(PHQ-15)、广泛性焦虑障碍量表(GAD-7)和抑郁症筛查量表(PHQ-9)来设计《放射性直肠损伤心理调查》电子问卷。通过微信群将该问卷发给编委管理的放射性直肠损伤患者。本研究观察指标:(1)放射性直肠损伤症状评估:采用SOMA自评量表,放射性直肠损伤症状分级:轻度(≤3分)、中度(4~6分)和重度(≥6分);(2)焦虑和抑郁及躯体症状障碍的发生率:分别采用GAD-7、PHQ-9和PHQ-15自评量表进行评估;(3)焦虑、抑郁、躯体症状障碍与放射性直肠损伤症状分级相关性。结果共回收71份合格问卷,41份(56.9%)来自广州。71例患者中,男6例,女65例;年龄(55.7±9.3)岁,<60岁者48例(67.6%),确诊放射性直肠损伤中位病程2.0(1.0,5.0)年。放射性直肠损伤症状评估:轻度18例(25.4%)、中度27例(38.0%)、重度26例(36.6%)。焦虑和抑郁及躯体症状障碍发生率:无合并症的患者共12例(16.9%);发生焦虑、抑郁或躯体症状障碍的患者共59例(83.1%),其中2例患者只合并焦虑、1例患者只合并抑郁、9例合并躯体症状障碍、2例合并焦虑+抑郁、4例合并焦虑+躯体症状障碍、2例合并抑郁+躯体症状障碍、三者并发者40例。焦虑、抑郁、躯体症状障碍与放射性直肠损伤症状分级相关性:与放射性直肠损伤症状轻-中度组患者相比,重度患者的焦虑和躯体症状障碍的严重程度均更高,差异有统计学意义(Z=-2.143,P=0.032;Z=-2.045,P=0.041);但两组患者间抑郁程度的差异则无统计学意义(Z=-1.176,P=0.240)。Pearson相关性分析结果显示,放射性直肠损伤症状评分与患者的焦虑(r=0.300,P=0.013)、抑郁(r=0.287,P=0.015)及躯体症状障碍(r=0.344,P=0.003)程度均呈正相关,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论放射性直肠损伤患者的焦虑、抑郁、及躯体症状障碍的发病率极高。有必要加强躯体症状障碍的诊断及治疗,以减轻患者盆腔会阴疼痛等症状,提高生活质量。