摘要：目的:类胡萝卜素双加氧裂解酶(CCD)是类胡萝卜素生物合成途径中的一个关键酶。旨在鉴定并克隆蛹虫草中的CCD酶,通过相关生物信息学分析和荧光定量PCR探究其结构、功能聚类以及表达调控。方法:用GenBank登录的CCD酶基因序列与蛹虫草基因组比对,在保守区域设计1对引物,以蛹虫草基因组的DNA为模板对CCD酶基因进行扩增,扩增产物命名为car-TC。car-TC基因连接载体后由生物公司测序;序列通过多种生物信息学软件和在线工具分析;表达量随生长情况的变化关系通过实时荧光定量PCR进行测定。结果:克隆了car-TC基因,该基因长1784bp,编码一个577aa的蛋白质,该蛋白质含有CCD酶活性必需的4个组氨酸残基,系统发育进化分析表明该蛋白和棒束菌、白僵菌的同源蛋白聚在同一簇,实时荧光定量PCR结果表明该蛋白的表达量随生长时间的延长而减少。结论:获得一个类胡萝卜素合成途径中的关键酶——双加氧裂解酶基因car-TC,该基因的表达主要受时序调控,随生活周期的进行有逐渐降低的趋势。

摘要：对沉香精油微胶囊的制备工艺进行了优化,并将制备的沉香精油微胶囊添加到卷烟纸中对卷烟进行加香试验。在单因素试验基础上选取试验因素与水平,根据Box-Behnken Design(BBD)设计三因素三水平的响应面分析法,依据回归分析确定工艺条件的影响因素,以沉香精油包埋率为响应值做响应面分析试验。结果表明,沉香精油微胶囊制备的最佳工艺为明胶∶阿拉伯胶=1∶1(m∶m),壁材总浓度1.07%,芯壁比例3∶2,谷氨酰胺转氨酶浓度0.19%,酶固定化时间6 h,沉香精油的包埋率可达98.18%;制备的微胶囊化沉香精油能有效地掩盖卷烟杂气,降低卷烟刺激性,使卷烟具有甜润感,且烟气柔和细腻。

摘要：为了获得单细胞核的蛹虫草材料和制备原生质体的最适酶解条件,以蛹虫草芽生孢子为试验材料,通过荧光染色观察其细胞核数,以溶壁酶质量分数、酶解温度、酶解时间为试验因子,原生质体得率为响应值,采用单因素和Box-Behnken试验设计进行优化。荧光显微镜观察结果表明蛹虫草芽生孢子为单个细胞核。响应面优化试验结果表明蛹虫草原生质体最适制备条件为:溶壁酶质量分数2.06%,酶解温度26.1℃,酶解时间2.57 h。在此条件下,原生质体得率的预测值为8.97×10^6个/mL,验证试验所得原生质体得率为(9.17±0.29)×10^6个/mL,预测值和试验值差异不显著,回归模型拟合良好。在优化条件下制备的原生质体在含有0.8 mol/L甘露醇的再生培养基上的再生率达43.33%±2.08%。

摘要：为了获得超声辅助提取蛹虫草废菌质中类胡萝卜素的最适工艺参数,在筛选出最适提取溶剂的基础上,通过单因素和响应面法进行优化。通过单因素试验确定最适单因素条件:乙醇浓度70%、料液比1∶60、超声功率400W、超声时间20 min、提取时间15 min、提取温度50℃。在单因素试验基础上,选取乙醇浓度、超声功率、提取温度为自变量,类胡萝卜素提取率为响应值,采用Box-Behnken试验设计建立回归模型。根据回归模型,在料液比1∶60、超声时间20 min、提取时间15 min的条件下,确定类胡萝卜素最高提取率的优化组合为乙醇浓度71%、超声功率418 W、提取温度51℃。在此条件下,类胡萝卜素提取率的预测值为626.80μg/g,验证试验所得类胡萝卜素提取率为637.50μg/g。回归方程的预测值和试验值差异不显著,所得回归模型拟合程度较好,具有一定的实践指导意义。