摘要：目的:通过构建抑制cyclin D1基因小发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统,为肿瘤基因治疗提供实验依据。方法:利用基因重组技术构建靶向cyclin D1RNA干扰(RNAi)表达质粒,双酶切鉴定电泳及测序分析构建的质粒是否成功;Western Blot分析转染前后K562细胞cyclin D1蛋白表达的变化。结果:体外合成的64个碱基成功插入到预计位点,并且与设计序列完全一致;Western Blot分析结果显示转染所构建的质粒能明显下调K562细胞cyclin D1基因表达。结论:质粒的成功构建为研究其抑制cyclin D1基因表达,发挥抗肿瘤效应以及与放、化疗联合的协同效应打下基础。

摘要：目的cyclinD1基因在细胞周期调控中起关键性作用。研究表明其过表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关；并且与肿瘤细胞对化疗药物抗拒性有关。抑制CYClinD1蛋白表达可达到化疗增敏作用。本研究利用RNA干扰（RNAi）技术体外观测其对K562细胞cyclinD1基因的沉默效应及增强阿霉素（ADM）对K562细胞毒性作用。方法体外构建靶向cyclinD1基因的小发夹RNA（shRNA）表达质粒，通过壳聚糖介导转染K562细胞，Westernblot分析检测转染前后CyclinD1蛋白表达变化，流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率的影响以及MTT法检测K562细胞对ADM敏感性的变化。结果构建靶向cyclinD1基因的ShRNA表达质粒（pshRNA-419和PshRNA-575）经壳聚糖转染后，能显著抑制cyclinD1基因表达；影响K562细胞周期分布，诱导细胞凋亡，并降低ADM半数抑制浓度，提高了化疗敏感性。而设计一碱基突变的序列所构建的质粒并无上述生物学效应。结论沉默K562细胞cyclinD1基因表达可达到有效的化疗增敏目的。

摘要：目的利用 RNA 干扰(RNAi)技术体外观测其对 K562细胞 cyclin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法通过壳聚糖介导转染 K562细胞,Western blot 分析检测转染前后Cyclin D1蛋白表达变化;集落形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率的影响。结果构建靶向 cyclin D1基因的 shRNA 表达质粒(pshRNA-419和 pshRNA-575)经壳聚糖转染后,能显著抑制 cyclin D1基因表达;抑制 K562细胞增殖,影响其集落形成能力;影响 K562细胞周期分布,诱导细胞凋亡。而设计一碱基突变的序列所构建的质粒并无上述生物学效应。结论 cyclin D1基因表达下调可抑制 K562细胞生长,并诱导细胞凋亡。提示 cyclin D1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点的。