摘要：目的观察微小RNA-224（miR-224）对前列腺癌细胞DUl45迁移和侵袭能力的影响以及对靶基因Tribbles同源蛋白1（TRIBl）表达的影响。方法通过慢病毒转染前列腺癌细胞株DU145使其过表达miR-224，利用划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力；采用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）和Westernblot检测细胞TRIBl表达水平的变化，并通过荧光素酶实验验证miR-224与TRIBl基因的直接调控关系。设计拯救实验并重新利用划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭。结果划痕实验24h后DUl45—224和DU145-vector组细胞的迁移细胞数目分别为（103．2±20．6）、（189．8±34．7）个，miR-224过表达组细胞迁移能力明显下降（P〈0．01）；Transwell细胞侵袭实验显示，DUl45-224组和DU145-vector组细胞分别为（140．8±13．1）、（283．4±15．4）个，组间差异均有统计学意义（P〈0．01）。过表达miR-224后，DUl45细胞TRIBl的蛋白表达下调（P〈0．05）。荧光素酶报告实验结果显示实验组荧光素酶活性值为0．42±0．06，比对照组（0．97±0．09）显著降低（P〈0．01），提示miR-224能明显抑制TRIB1—3’端非编码区域（3’-UTR）的荧光素酶活性。拯救实验结果表明在miR-224过表达的DUl45细胞中进一步转入高表达TRIBl质粒后，迁移细胞数目为（203．2±31．2）个、侵袭细胞数目为（328．6±25．9）个，对比单纯miR-224过表达DUl45细胞[迁移细胞数目为（73．2-4-17．8）个；侵袭细胞数目为（101．2±13．1）个]，迁移和侵袭能力增强，组间差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论过表达miR-224可能通过靶向降低TRIBl基因的蛋白表达，抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

摘要：目的构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体,建立稳定转染的LoVo细胞系,探讨稳定转染bmi-1shRNA对大肠癌细胞LoVo靶基因表达的影响,为下一步应用RNAi技术治疗打下基础。方法设计合成靶向bmi-1基因编码短发夹RNA的两条寡核苷酸序列,另设计无义对照序列,构建重组载体pSIREN-bmi-1及pSIREN-bmi-1-C,载体经脂质体2000介导转染LoVo细胞,通过嘌呤霉素筛选,建立稳定转染的LoVo细胞系,显微镜观察、MTT检测、荧光定量PCR、Western blot检测bmi-1表达受抑后对细胞的增殖影响。结果成功构建了针对bmi-1基因的shRNA表达载体,建立了稳定转染的LoVo细胞系,bmi-1shRNA对LoVo细胞bmi-1mRNA表达抑制率为80%、bmi-1蛋白抑制率为82%,P<0.05。结论针对bmi-1基因的shRNA表达载体能够明显抑制结肠癌细胞LoVo的增殖能力,bmi-1mRNA与蛋白表达受抑制,但对细胞形态学无明显影响。

摘要：目的:构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体,检测它对大肠癌细胞株SW480增殖的影响。方法:利用载体介导的RNA干扰技术,设计、合成靶向bmi-1基因、编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,并设计无义对照序列,构建重组载体pSIREN-bmi-1及pSIREN-bmi-1-c,载体经脂质体2000介导转染SW480细胞,经MTT检测,观察bmi-1表达受抑后对细胞增殖的影响。结果:成功构建了针对bmi-1基因的shRNA表达载体。结论:针对bmi-1基因的shRNA表达载体能够明显抑制结肠癌细胞SW480的增殖能力。