摘要：目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞表型和基因表达的影响.方法应用计算机软件设计抗HPV16E6核酶,并以体外切割实验验证其效率.以脂质体法将抗HPV16 E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞.点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测细胞中E6基因的表达.测定三种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率,检测其在裸鼠体内的成瘤能力.流式细胞仪检测三种细胞的凋亡率,并测定c-myc、bcl-2、p53、fas蛋白的表达.检测三种细胞表面抗原的表达,包括HLA-1、HL A-2、B7-1、B7-2.诱导NK、LAK、CD3AK细胞,测定它们对三种宫颈癌细胞的杀伤作用. 结果体外切割实验证实抗HPV16E6核酶能特异性切割靶基因,点杂交证明核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern杂交显示CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P、CaSKi明显降低.与CaSKi细胞相比,CaSKi-R细胞生长速度、软琼脂克隆形成率明显降低,在裸鼠体内的成瘤性降低, 凋亡率明显增高.而CaSKi-P细胞无此改变.核酶的导入使CaSKi-R细胞表达HPV16E6、c- myc、bcl-2蛋白明显减少,而表达p53明显增高.CaSKi-R细胞中HLA-2、B7-1、B7-2抗原表达增高.NK、LAK、CD3AK细胞对CaSKi-R的杀伤作用明显高于对CaSKi细胞.结论抗HPV16E6核酶不但能部分逆转宫颈癌CaSKi细胞的恶性表型,而且能诱导CaSKi细胞凋亡, 提高其对免疫细胞的敏感性.

摘要：背景:越来越多的研究事实表明免疫系统不是一个仅有自主调节的孤立系统,而是与中枢神经系统之间存在双向联系。目的:探讨哮喘大鼠肺脏和大脑中c-fos表达的分布及其意义。设计:随机对照实验。单位:南方医科大学南方医院肿瘤科和珠江医院神经外科。材料:实验在2004-01/08在南方医科大学南方医院肿瘤科实验室和珠江医院神经外科完成。选择成年健康雄性大鼠14只。随机分为实验组10只和对照组4只。方法:实验组第1天用卵蛋白10mg加氢氧化铝干粉200mg与灭活百日咳菌苗5×109个配成2mL混悬液腹腔注射,于第15天开始用10g/L卵蛋白超声雾化吸入,2次/h,共3d,制作卵蛋白致敏大鼠哮喘模型,对照组第1天用生理盐水2mL腹腔注射,于第15天用生理盐水雾化吸入,30mL/d,共3d。所有大鼠在麻醉状态下灌流固定取肺和脑组织,采用免疫组织化学卵白素-生物素-过氧化物复合物法和图像分析等技术观察Fos蛋白在肺脏和大脑内的分布情况。主要观察指标:Fos蛋白在脑内不同区域和肺脏中的分布。结果:14只大鼠均进入结果分析。①哮喘组大鼠肺脏和大脑中c-fos表达明显高于对照组(P<0.05);Fos阳性产物在脑内主要集中分布在额顶皮质、边缘前脑(扣带皮质、梨状皮质和中央杏仁核等)、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、视上核、下丘脑外侧区、下丘脑室周核、孤束核、最后区和延髓腹外侧区内;小脑内无明显Fos分布密集区。②哮喘组气道壁及肺组织中可见大量的c-fos阳性细胞,阳性炎症细胞主要分布于黏膜层、黏膜下层及平滑肌周围;而对照组动物气道及肺组织中无或偶见免疫反应极弱的c-fos阳性细胞。结论:哮喘大鼠不仅肺脏中c-fos表达明显增加,而且在延髓内脏带及其上行投射神经核团(下丘脑、杏仁核等)表达也较多,说明原癌基因c-fos表达可能与哮喘神经免疫调节密切相关。

摘要：目的: 设计hTERTI540 PTD融合基因表达框并构建携带该表达框的穿梭质粒.方法: 根据hTERTI540表位、HIV 1TAT PTD和PTD4的氨基酸序列设计融合疫苗,然后根据哺乳动物偏爱密码子反翻译成基因序列.分段合成寡聚脱氧核糖核酸,磷酸化、退火后先后克隆至pSP72的BamHI EcoRI和XbaI BanHI之间.将经双酶切鉴定获得的阳性重组子进行基因测序.然后将hTERTI540 PTD融合基因表达框亚克隆至pDC315.结果: 测序结果表明hTERTI540 PTD和hTERTI540 PTD融合表达框的基因序列与设计完全一致.穿梭质粒pDC315 I540 PTD和pDC315 I540 PTD4经EcoRI酶切后均清晰可见 112bp电泳条带,与预测相符.结论: 成功获得了携带hTERTI540 PTD和hTERTI540 PTD4表达框的穿梭质粒pDC315 I540 PTD和pDC315 I540 PTD4,为制备以重组腺病毒为载体的I540 PTD基因疫苗、比较蛋白转导能力的强弱对基因疫苗免疫效能的影响奠定了基础.

摘要：目的　获得一种特异性抗人乳头瘤病毒(HPV)16型E6基因的核酶,用以在基因调控水平预防、治疗HPV相关性肿瘤。方法　以核酶(ribozyme,Rz)的锤头结构为模型,采用计算机软件针对HPV16E6基因,设计相应的Rz;体外合成其基因后,克隆于原核表达质粒中。将HPV16E6基因片段也克隆于原核表达质粒中,通过体外转录而得到核酶和病毒mRNA,进行体外切割试验以鉴定核酶的活性。结果　抗HPV16E6核酶(简称抗16HRz)被装入pRG523中而构成pRG16HRz,体外转录后能将核酶独立地释放出来。HPV16E6mRNA转录质粒pTZ16E6含有HPV16E6基因片段(+94位～+296位),体外切割实验证明抗16HRz具备切割活性,在体外能准确、有效地识别和切割HPV16E6mRNA片段,得到82nt和132nt的切割产物。结论　所获得的抗HPV16E6核酶能特异性切割HPV16E6mRNA,可作为对HPV相关性肿瘤进行基因治疗的工具。

摘要：肿瘤的细菌治疗最早可以追溯到19世纪,人们第一次利用链球菌(Streptococcus pyogenes)成功治疗了患有无法手术切除的肉瘤患者。此后,细菌在肿瘤治疗上的研究越来越多,并取得了令人期待的结果。与其他肿瘤治疗方法相比,细菌治疗肿瘤具有许多独特的优点。随着合成生物学的发展,人们对细菌进行改造后大大增强了其在肿瘤治疗中的运用。本文介绍了细菌改造策略和应用进展,特别是鼠伤寒沙门氏菌治疗肿瘤的研究。在动物模型中,工程菌可以选择性定植到肿瘤组织中并抑制肿瘤的生长。此外,介绍了工程菌治疗肿瘤的新策略——表达抗肿瘤分子来提高肿瘤治疗的效果。最后,讨论了工程菌治疗肿瘤运用于临床还有一些需要解决的问题,如何平衡细菌毒力和抗肿瘤能力是一个关键点,需要设计更精巧的基因线路来对细菌进行改造。在减弱细菌毒力的同时,还要增强细菌靶向到肿瘤组织的能力,以减少对其他正常组织的影响。细菌的遗传不稳定性也是一个潜在的问题,因为突变可能会产生无效或有害的表型。但是,随着合成生物学的发展,在不久的将来,上述问题将会得到解决,细菌治疗将会是一种具有巨大潜力的肿瘤治疗的方法。

摘要：以核酶（ribozyme）的锤头结构为模型，采用计算机软件针对HPV16R6、HPV18E6基因，设计了相应的ribozyme（简称抗16HR、抗18HR）。体外合成ribozyme基因后，克隆于带自身修剪功能的原核表达质粒pRG523中，构建成质粒pRG16HR、pGR18HR，为下一步研究抗16HR、抗18HR的体外活性和内效应，从而为探索以ribozyme治疗HPV相关性肿瘤的途经打下基础。