摘要：目的：鉴定1例NS5B区和E1区PCR产物测序结果分型不一致的HCV病毒株为基因重组还是混合感染。方法：提取血浆的病毒总RNA,逆转录后进行巢式PCR扩增,以NS5B和E1编码区为目的基因进行PCR扩增并测序,通过构建进化树进行基因分型,发现两个编码区基因分型的结果不同,对NS5B和E1区进行克隆测序,每个编码区分别挑取50个克隆进行测序和基因分型;针对HCV全长序列分别设计7对型特异性引物并进行PCR扩增。结果：NS5B（8256-8641 bp）区PCR产物测序后的分型结果为1b,E1（697-1322 bp）区为2a;NS5B（8266-9274 bp）基因的50个克隆测序结果均为1b,C/E1（849-2152 bp）基因的50个克隆测序结果均为2a;7个片段的PCR型特异性扩增以及进化分析发现,在同一区域既存在1b亚型,也存在2a亚型。结论：该病例为1b和2a的混合感染。

摘要：目的建立Rh血型系统RHCE＊ ce（308C〉T）突变型等位基因的Taqman探针实时荧光定量PCR检测方法,筛查携带该等位基因的个体,并对其Rh CE血型抗原进行鉴定分析。方法针对RHCE基因c. 308C〉T突变位点设计特异性引物及Taqman-MGB探针,采用已知携带该突变位点的标本作为阳性对照,建立实时荧光定量PCR方法。应用该方法对800例RhD阴性标本、1 000例RhD阳性标本以及400例D放散型标本进行突变筛查,同时随机抽取200例标本进行RHCE基因外显子2直接测序。对筛查出携带该突变型等位基因的标本进行RHCE基因外显子2测序确证,同时应用多重连接依赖式探针扩增（MLPA）基因检测结合测序方法对其进行Rh血型基因型鉴定,并进行Rh血型血清学检测。此外,采用6种针对不同抗原表位的单克隆抗体对Rhc抗原的表达进行血清学鉴定,并采用4种抗-c进行Rhc抗原的流式细胞检测。结果成功建立RHCE＊ ce（308C〉T）等位基因的Taqman探针实时荧光定量PCR方法。应用该方法从800例RhD阴性标本中筛查出2例携带该突变型等位基因标本,RHCE基因外显子2测序结果证实存在杂合点突变（c. 308C〉T,p. 103Pro〉Leu）,但在RhD阳性及D放散型标本中未检出此突变。此2例标本的Rh抗原表型均为CCdee,基因型均为Cde/c^vde[c^v表示RHCE＊ ce（308C〉T）突变型等位基因]。该2例标本的Rhc抗原血清学和流式细胞检测均为阴性,而Rh C抗原表达正常。结论 Taqman探针实时定量PCR方法进行RHCE＊ ce（308C〉T）等位基因检测快速准确,该等位基因可导致c抗原不表达。

摘要：目的建立人类GPA，GPB分子相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列的DNA直接测序方法，并将此方法应用于RBC血型MNS抗原的分析。方法以整群随机抽样法选择从2011年11月至2012年5月在本中心无偿献血的175例健康成年人的全血样品为研究对象。以血清学方法与序列特异引物聚合酶链反应（PCR—SSP）方法鉴定其MNS血型。根据GenBank提供的NG-007470与NG-007483基因参照序列为依据，自行设计GPA相关基因GYPA全部外显子的7对引物与GPB相关基因GYPB全部外显子的5对引物，探索最佳反应体系与PCR扩增条件，且能同时扩增2个基因全长外显子碱基序列，使用ABl3730XLDNA测序仪进行序列分析，以Oli6installer分析软件分析碱基序列。结果所建立的测序方法可于同一反应体系、相同PCR扩增条件同时检测GPA，GPB相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列，并准确分析本组血液样本的MNS血型的特征。基因测序结果与血清学分析及PCR—SSP鉴定结果完全一致。结论首次建立了稳定、精确、简捷的基因直接测序分型方法，可用于检测MNS血型基因型，并分析GPA，GPB肽链中氨基酸序列的多态性，为MNS血型系统的研究以及人类群体遗传学及分子进化的研究等方面提供广泛的应用价值。

摘要：目的初步探究布鲁氏菌外膜蛋白16、19脂化型重组蛋白(L16、L19)对人单核细胞白血病细胞系(THP-1细胞)免疫调控因子表达的影响。方法以佛波酯(PMA)活化的THP-1细胞为体外实验细胞模型,采用成组设计,分别将L16、L19与THP-1细胞共培养(L16刺激组、L19刺激组),并以PMA活化的THP-1细胞为对照组。共培养4 h时,分别采用免疫荧光染色(IFS)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测L16、L19是否进入细胞。共培养12、24 h时,实时荧光定量PCR法测定干扰素调节因子1(IRF-1)、Ⅱ类主要组织相容性复合物反式激活蛋白(CⅡTA)mRNA表达水平;Western blot法检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)和γ干扰素受体1(IFNGR1)蛋白表达水平。结果共培养4 h时,可见L16、L19分别进入L16、L19刺激组THP-1细胞内。共培养12 h时,L16刺激组IRF-1 mRNA表达水平(0.16±0.15)明显低于对照组(1.00±0.00,P0.05)。Western blot结果显示,共培养12、24 h时,对照组、L16刺激组、L19刺激组INFGR1、Tim-3蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(F=50.92、6.80、148.73、156.57,均P<0.05)。其中,共培养12 h时,L16、L19刺激组INFGR1蛋白表达水平均明显低于对照组,且L19刺激组高于L16刺激组(均P<0.05);而L19刺激组Tim-3蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。共培养24 h时,L16、L19刺激组INFGR1蛋白表达水平均低于对照组,且L19刺激组高于L16刺激组(均P<0.05);而L16刺激组Tim-3蛋白表达水平高于对照组和L19刺激组(均P<0.05)。结论布鲁氏菌L16可以下调THP-1细胞IRF-1、CⅡTA mRNA表达水平;L16、L19均能够下调IFNGR1、上调Tim-3蛋白表达水平。

摘要：目的构建含完整人抗-D抗体重、轻链基因的表达载体,为体外表达完整的抗-D抗体分子打下基础。方法从1株分泌IgM抗-D的细胞株提取总RNA,以随机引物逆转录成cDNA,用所设计的抗体前导区引物进行扩增,克隆、测序后将抗-D抗体重、轻链可变区基因分别和带有人IgG1恒定区和к轻链恒定区的表达载体连接,转化大肠杆菌后提取质粒DNA,用PCR和酶切进行鉴定。结果序列分析发现所扩增的基因符合人Ig的特征,除引导序列外,其余序列和我们以前所发表的Fab段序列一致,PCR和酶切鉴定抗体重、轻可变区基因克隆成功。结论成功地扩增了带引导序列的抗-D抗体可变区基因,并构建了完整人抗-D抗体分子表达载体。