摘要：【目的】建立一种新型的军团菌鉴定方法,并探讨该法在鉴定环境水源和临床标本军团菌菌株中的应用价值。【方法】根据军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物,以分离培养得到的可疑军团菌菌株作为模板,采用PCR法对模板扩增,并用限制性内切酶对PCR产物进行酶切分析,建立一种嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌的鉴定方法。对16株嗜肺军团菌、22株非嗜肺军团菌及12株其他细菌标准菌株进行检测,验证该方法的可靠性,最后用该法检测广州地区分离的169株可疑军团菌菌株并进行基因测序。【结果】该PCR方法检测嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌所有标准菌株均为阳性,非军团菌检测结果均为阴性;进一步的HinfⅠ酶切分析可准确的区分嗜肺军团菌标准菌株;广州地区分离的169株可疑军团菌菌株经该法检测发现160株为军团菌,其中79株为嗜肺军团菌,与基因测序检测结果一致。【结论】PCR-酶切技术可快速、特异地检测军团菌及嗜肺军团菌,适用于环境水源和临床标本可疑军团菌菌株的检测。

摘要：目的：设计一种弹回引物荧光PCR方法鉴定军团菌属和嗜肺军团菌。方法通过分析军团菌16S rRNA基因序列，采用生物信息学方法设计引物，优化实验条件，对方法的特异性、灵敏度进行评估，并对186株环境军团菌分离株与15份环境水样进行鉴定。结果经弹回引物检测，军团菌属菌株在85℃～86℃处有扩增子熔解峰，嗜肺军团菌在71℃处有探针结合区熔解峰，非军团菌未检测到熔解峰。弹回引物对标准菌株DNA与模拟水样灵敏度分别为1 ng／μl与（1×10^3～1×10^4）／ml。弹回引物对环境分离株验证实验中，成功鉴定了186株军团菌和44株嗜肺军团菌；对15份环境水样直接检测，检出12份军团菌属阳性水样与4份嗜肺军团菌阳性水样。结论弹回引物荧光PCR方法可用于军团菌属和嗜肺军团菌的鉴定，具有较高的特异性与灵敏度。

摘要：目的设计一条特异性的长滩军团菌荧光原位杂交探针,并验证其特异性与敏感度,初步建立长滩军团菌的荧光原位杂交检测法。方法以长滩军团菌16S rRNA特异性位点设计杂交探针。在数据库中对探针序列进行特异性检验,优化反应条件,以军团菌标准菌株和环境分离菌株验证探针的特异性,并以模拟水样验证探针灵敏度。结果生物信息学分析表明,设计的探针LEG long序列与长滩军团菌16S rRNA序列完全配对,与其他军团菌种均存在1个碱基以上的错配。菌株验证实验证明LEG long探针可与长滩军团菌的标准菌株和环境分离株特异性杂交,与其他军团菌种和非军团菌属菌株无杂交信号。探针检测灵敏度可达1.49×103 CFU/ml。结论本研究设计的探针LEG long可用于长滩军团菌的高特异性和高灵敏度检测。

摘要：军团菌是一种兼性胞内寄生菌,可入侵人体巨噬细胞,并在其中繁殖,是引起人类军团菌病的重要病原体。目前已确认军团菌有50多个种,70多个血清型,其中20多种与人类疾病相关[1]。由于军团菌种类繁多,常规的检测鉴定方法已不能满足需要。近年来,随着分子技术特别是PCR技术的发展,已有许多分子生物学方法被用于军团菌的检测。

摘要：目的建立荧光定量PCR方法,用于检测军团菌属特异性16S rRNA基因,并探讨广州地区军团菌属感染状况。方法利用军团菌属特异性16S rRNA基因保守序列设计引物和探针,优化反应条件和反应体系,对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性,对广东省中医院采集的532例肺部感染患者痰液标本进行检测。结果该方法检测军团菌属所有标准菌株均出现阳性信号,其他非军团菌属细菌检测结果均为阴性;检测灵敏度为102CFU/ml,临床检测532例肺部感染患者的痰液标本,荧光法检出军团菌阳性43例,阳性率为8.08%,16S rRNA PCR法加基因测序验证阳性率为7.71%,两者检测结果差异无统计学意义,表明其具有较好的符合性和等效性。结论 16S rRNA基因荧光定量PCR法检测患者痰液标本中军团菌属,具有快速、敏感、特异等特点,适用于临床军团菌属感染调查及快速检测。

摘要：目的建立特异、快速、敏感的实时荧光PCR熔解曲线基因分型方法,并探讨该法在鉴定嗜肺军团菌中的应用价值。方法根据嗜肺军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物和猝灭FRET探针建立实时荧光PCR熔解曲线方法,优化引物与探针浓度,用15株嗜肺军团菌、30株非嗜肺军团菌及7株其他病原菌标准菌株验证该方法的特异性、敏感性和重复性,用该法检测117例临床痰标本并进行基因测序。结果 15株不同血清型的嗜肺军团菌Tm值均为57℃;7株非嗜肺军团菌Tm值为43℃,1株Tm值为45℃;其余22株非嗜肺军团菌和7株其他病原菌均无明显Tm值。该方法最低检出限可达0.1 pg/μL。检测117例痰标本发现3株嗜肺军团菌,与PCR基因测序法检测结果一致。结论实时荧光PCR熔解曲线法可特异、快速和敏感地检测嗜肺军团菌,适用于临床痰标本的嗜肺军团菌检测。

摘要：独立医学实验室在国内的迅速发展，有效补充了我国公立医疗卫生的不足，满足了医改的部分要求。但部分独立医学实验室由于经济实力限制，对实验室安全管理认识不足，存在职业暴露和引发公共安全事件的风险。本文从实验室风险评估、实验室设计与建设、管理体系建设、危险材料管理、危险设备设施管理、医疗废物管理、职业健康管理、消防与用电安全管理、应急处置预案管理、安全检查与改进等多个方面系统性规范独立医学实验室安全要求，确保有效管控独立医学实验室的安全风险，降低事故的发生。

摘要：目的探讨运用自动片段分析的多重PCR检测IgH和(或)TCRγ基因单克隆重排作为检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)微小残留病(MRD)方法的可行性。方法采用1∶3匹配设计的病例-对照研究方法,收集2009年1月至2011年12月中山大学附属第一医院4例极早期复发的非高危儿童ALL(病例组)和危险度匹配的12例非高危儿童ALL(对照组)在初诊时、诱导化疗结束(距开始治疗5周,W5)、再诱导化疗前(距开始治疗23周,W23)及维持第3个月(距开始治疗44周,W44)的骨髓样本,治疗方案均按照广东2008ALL协作组方案进行。用多重PCR方法定性检测各时间两组骨髓样本是否存在IgH和(或)TCRγ基因单克隆重排,PCR产物采用片段分析软件进行分析。检出单克隆重排的IgH和(或)TCRγ被认为是MRD阳性。结果复发组4例和对照组12例ALL患儿在初诊时均监测到IgH单克隆重排,TCRγ单克隆重排阳性率56%。在W5时,病例组和对照组的MRD阳性率的差异无统计学意义(P<0.05)。在W23和W44这两个时间点,病例组的MRD阳性率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论多重PCR联合自动片段分析检测IgH和(或)TCRγ基因单克隆重排的方法可以用于儿童ALL治疗过程中的MRD监测。

摘要：目的应用PCR技术对解脲脲支原体(Uu)多带抗原进行分型鉴定,探讨Uu各种基因型与临床病原学之间的关系。方法根据解脲脲支原体多带抗原基因(MBA)与16S rRNA基因和尿素酶基因结构设计10对引物,采用PCR基因扩增技术,对384例非淋菌性尿道炎和其他泌尿生殖道感染患者的临床标本,进行解脲脲支原体生物变种和基因型分型鉴定,并与Uu培养法作比较。结果384例性病门诊患者临床标本中,检测Uu培养阳性218例,阳性率56.8%;PCR基因扩增检测Uu-DNA阳性208例,总阳性率为54.2%:其中生物变种1(biovar 1)143例,占37.2%,生物变种2(biovar 2)65例,占16.9%;基因分型结果:生物变种1血清变种1(serovar 1)50例,占13.0%,血清变种3/14(serovars 3/14)64例,占16.7%,血清变种6(serovar 6)29例,占7.6%;生物变种2亚型1(subtype 1)25例,占6.5%,亚型2(subtype 2)30例,占7.8%,亚型3(subtype 3)10例,占2.6%。结论Uu是性病的重要病原体,MBA多带抗原PCR基因分型鉴定具有简便、快速、敏感、特异之优点。

摘要：在医改的推动下,独立医学实验室在国内的行业规模快速增长,全国化、连锁化、规模化的独立医学实验室集团运营能有利于间接提升公立医院服务的水平,有效降低患者医疗费用,社会影响力突显。但这些集团每个下属实验室因因为不同的市场环境和管理风格,在管理重视度、安全经费投入、政策遵循、人员培训、风险管理等方面必然地存在差异,所以集团总部需要尝试采取各种方法、标准、行动计划来规范下属实验室的安全行为,这些标准化建设工作对于保证实验室安全和社会安全都具有非常重要的意义,必须引起连锁和规模化独立医学实验室集团的高度重视。本文以建设实验室生物安全标准化管理体系为重点,从标准化制度和标准化指南指导、在图纸设计上标准化实验室安全设备设施和基础功能、落实安全管理责任制、加强生物安全监管和建设监督队伍、建立总部-子公司-班组的三级人员培训体系、推进“6S”管理、安全文化建设共七个方面系统性探讨连锁和规模化独立医学实验室集团在生物安全管理方法,切实做好“全员、全方位、全过程”的闭环管理,坚持“谁主管、谁负责”,执行落实“安全第一,预防为主,岗位落实,全员参与,逐级负责,持续改进”的生物安全管理方针,确保独立医学实验室生物安全管理有序推进,降低生物安全事故发生。