摘要：目的：设计一种弹回引物荧光PCR方法鉴定军团菌属和嗜肺军团菌。方法通过分析军团菌16S rRNA基因序列，采用生物信息学方法设计引物，优化实验条件，对方法的特异性、灵敏度进行评估，并对186株环境军团菌分离株与15份环境水样进行鉴定。结果经弹回引物检测，军团菌属菌株在85℃～86℃处有扩增子熔解峰，嗜肺军团菌在71℃处有探针结合区熔解峰，非军团菌未检测到熔解峰。弹回引物对标准菌株DNA与模拟水样灵敏度分别为1 ng／μl与（1×10^3～1×10^4）／ml。弹回引物对环境分离株验证实验中，成功鉴定了186株军团菌和44株嗜肺军团菌；对15份环境水样直接检测，检出12份军团菌属阳性水样与4份嗜肺军团菌阳性水样。结论弹回引物荧光PCR方法可用于军团菌属和嗜肺军团菌的鉴定，具有较高的特异性与灵敏度。

摘要：目的设计一条特异性的长滩军团菌荧光原位杂交探针,并验证其特异性与敏感度,初步建立长滩军团菌的荧光原位杂交检测法。方法以长滩军团菌16S rRNA特异性位点设计杂交探针。在数据库中对探针序列进行特异性检验,优化反应条件,以军团菌标准菌株和环境分离菌株验证探针的特异性,并以模拟水样验证探针灵敏度。结果生物信息学分析表明,设计的探针LEG long序列与长滩军团菌16S rRNA序列完全配对,与其他军团菌种均存在1个碱基以上的错配。菌株验证实验证明LEG long探针可与长滩军团菌的标准菌株和环境分离株特异性杂交,与其他军团菌种和非军团菌属菌株无杂交信号。探针检测灵敏度可达1.49×103 CFU/ml。结论本研究设计的探针LEG long可用于长滩军团菌的高特异性和高灵敏度检测。

摘要：目的优化建立适合本实验室针对人源福尔马林固定石蜡包埋(Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded,FFPE)样本的全基因组(Genomic DNA,gDNA)文库构建方案。方法探讨并设计了在FFPE全基因组文库构建各环节优化条件,分析比较FFPE DNA文库片段大小及文库转化率,以选择最优的文库构建流程。结果最终确定DNA起始量50 ng、20 min片段化酶切时间,采用4×稀释的接头进行20 min连接,经过2次特定比例的磁珠筛选方案进行文库构建,实现片段主峰在300 bp^400 bp左右,文库转化率达60%。结论本操作流程针对FFPE样本可以保证高质量的文库构建,同时实现较高文库转化效率。

摘要：目的设计方法评估流程并构建LIS系统中的方法评估管理程序,实现方法评估的工作流程控制。方法基于PRSD[再造策划(Plan)、流程重新设计(Redesign)、流程规范化(Systematize)、再造实施(Do)是流程再造中可遵循的一种循环模式,简称PRSD],通过现状访谈、需求评估,资源整合,制订方法评估流程,使用Java1.7、Oracles数据库构建基于B/S结构的方法评估管理程序,重点囊括设置标准操作、审批评估报告、确认传输结果、监控系统性能等需求,最终完成方法评估程序搭建。结果运行半年后,成功搭建包含42个单项试验、12个组合试验的方法评估程序,集管理试验方案、传输评估数据、检索试剂性能、监控系统性能4项功能。程序包含178条方法评估流程,审批合格率97.2%,较上线前提升19.6%,报告周转时间由7d缩减为2d;结果控制准确率100.0%,累积试剂性能参数32项,不合格检测系统状态识别延误天数为0。结论程序可缓解人员工作压力,提升工作效率,保证数据有效性,为试剂性能参数和监控系统状态的完善奠定基础。