摘要：利用荧光PCR(FPCR)技术扩增DNA是现代生物学研究的重要内容。本文以FPCR的发明为起始,以其主要的发展历程为主线,介绍和阐述了实时定量式PCR(QPCR,包括染料法、水解探针法及其衍生种类、划分为分子信标和阴阳探针等类型的杂交探针法、染料熔解曲线法和探针熔解曲线法)与数字式PCR(DPCR,主要是芯片式DPCR,cdPCR和微液滴DPCR,ddPCR)这2代阶段性方法的原理、要点、设计技巧及实际运用等,总结其主要应用领域与局限性,对比不同类型各自的特点,并对未来的发展进行展望。

摘要：目的应用基因芯片对临床常见的8种致病细菌进行检测。方法选取8种临床常她的致病细菌，包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、产气肠杆菌、荧光假单胞菌、宋内志贺菌。以16SrRNA基因为目的基因，自行设计通片J引物系列扩增目的片段，针埘高变区域设计探针，建立基冈芯片检测体系，并对所选细菌进行检测。收集来自武汉大学中南医院的待检标本50份，包括血液6份、痰液32份、粪便9份、纤维支气管镜检测物3份，提取DNA后利用建立的基因芯片进行检测。结果自行设计的通用引物能很好地扩增目的片段，针对8种细菌进行多批次重复检测，结果显示所选用的探针具有很好的检测效果。对临床50份标本进行检测，其中47份得到准确的检测结果，3份朱得到结果的原因为芯片未包含菌种。通过优化检测过程，可存8h内报告检测结果。探针信引殖时间的衰减程度观察表明，60d后探针信号虽有衰减，但其衰减程度对榆测结果判断无影响。结论本研究设计的基因芯片检测体系能准确而快速地对临床常见细菌做出检测，为基因芯片技术应用于临床奠定基础。

摘要：目的 建立临床常见的病原真菌的基因芯片检测体系.方法 选取8种临床常见真菌,包括白色假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、土曲霉、黄曲霉、米根霉和烟曲霉.根据真菌ITS区设计引物和探针,进行扩增和芯片制备.通过将待检真菌的PCR产物变性后与点布探针的芯片杂交,观察并分析荧光信号强度,进行对真菌的快速检测.并选取临床真菌阳性标本和细菌阳性标本共25份进行验证.结果 25份临床阳性标本的芯片检测结果显示,10份细菌阳性的标本,经真菌基因芯片检测,全部为阴性,无荧光信号.其余15份真菌标本中,12份临床真菌阳性标本均鉴定出芯片中的某一种真菌的结果.另外采用克柔假丝酵母菌人为制备的3份待检样本,经检测,芯片中8种真菌位点无荧光信号,为阴性,仅有真菌通用探针得到荧光信号,表明该标本中有真菌存在,但无法确认是哪一种.结论 本研究建立的基因芯片可对常见病原真菌进行快速准确的鉴定,为基因芯片应用于临床奠定了基础.

摘要：以生物碱白叶藤碱为出发点,依据生物电子等排体原则,设计了5-N-甲基苯并呋喃[3,2-b]喹啉母体,并参考安吖啶结构特征,合成了一系列5-N-甲基苯并呋喃喹啉的11-位苯胺衍生物,通过波谱手段确认其结构。运用紫外-可见光谱法和分子对接测定了衍生物与DNA的结合常数K和对接分数。紫外光谱实验中,衍生物与小牛胸腺DNA结合后吸收峰出现减色效应和红移现象;离子强度实验排除了表面结合模式的可能性;结合EB置换实验和分子模拟的结果,可初步推断作用模式为嵌插作用。