摘要：背景:胰腺干细胞具有分裂与高度分化潜能的特性,可以在体外进行成功分离和培养,但体外如何对其进行有效扩增是亟待解决的问题。目的:在胎鼠成纤维细胞饲养层条件下体外传代培养小鼠胰腺干细胞。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-07/2008-01在广西中医学院基础医学院细胞无菌培养室完成。材料:SPF级新生昆明小鼠20只,孕14d昆明小鼠多只,均购自广西中医学院实验动物中心。方法:取SPF级新生昆明小鼠的胰腺组织,Ⅴ型胶原酶消化,未消化完全的组织块自然沉降后,收集上层的含细胞离散液,离心弃上清,加入含角质细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的无血清低糖DMEM培养基,在经多聚赖氨酸溶液处理的24孔板中培养。取孕14d昆明小鼠,剖腹取胎鼠,去除头部及内脏,将躯干及四肢采用组织块胰蛋白酶消化法分离培养成纤维细胞,调整密度为5×108L-1接种于24孔板中,传至第3代经丝裂霉素适当处理制备饲养层细胞。取原代培养5d的胰腺干细胞,按30个/cm2密度种入铺有饲养层细胞的孔板中,当胰腺干细胞铺满小孔底部面积的80%时继续传代。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞形态变化,原代培养48h对细胞进行碱性磷酸酶染色,通过免疫组织化学染色鉴定胰腺干细胞特异分子标志物巢蛋白的表达。分别于传代后2,3,4,5d检测碱性磷酸酶、巢蛋白和胰十二指肠同源盒基因1的表达。结果:原代培养的来源于胰腺组织的细胞中,可见一些大、圆、单个核的细胞,胞浆折光性强,核浆比例大,呈附壁生长,碱性磷酸酶染色呈阳性,表达胰腺干细胞特异性分子标志巢蛋白,且具有活跃的分裂增殖能力。在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层条件下对胰腺干细胞进行体外传代培养,可连续传至第3代,各代胰腺干细胞仍保持大、圆、单个核、核浆比例大及增殖能力强等特性,传代后各时间点碱性磷酸酶、巢蛋白染色均呈阳性,胰十二指肠同源盒基因1蛋白染色呈阴性反应,可保持未分化状态。结论:以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,经丝裂霉素C处理后可分泌供胰腺干细胞生长所需的因子,并抑制胰腺干细胞的自主分化,体外连续传至第3代仍能够保持较好的生长特性、高度增殖能力及未分化状态。

摘要：目的:探讨特异性siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中肿瘤-睾丸抗原OY-TES-1蛋白表达的影响。方法:针对OY-TES-1基因设计、化学方法合成的siRNA通过脂质体转染体外培养的卵巢癌SKOV3细胞,在转染后24、36、48、72 h,通过免疫细胞化学检测OY-TES-1蛋白的表达水平。结果:靶向OY-TES-1基因siRNA转染SKOV3细胞后,OY-TES-1蛋白的表达明显降低,其抑制作用在转染后24 h出现,转染后36 h几乎完全被抑制,转染后72 h开始出现RNAi衰减现象。结论:OY-TES-1特异性siRNA(1 486～1 504)序列可在体外有效地干扰SKOV3细胞中OY-TES-1基因的表达。

摘要：背景： 关于消化外套膜组织获得的细胞悬液是否能在体外有效地扩增形成珍珠囊以及最终形成珍珠仍存在争议，且这方面研究不多。目的：建立一套有效的马氏珠母贝外套膜组织细胞体外分离及培养的技术和方法，同时探讨体外形成具有完整结构和分泌功能的珍珠囊并最终生成优质珍珠的最佳方法。设计、时间及地点：单一样本观察，于2008-08/12在广西中医学院基础医学院完成。材料：贝龄1.0~2.0岁马氏珠母贝由广西北海市营盘珍珠实业有限公司提供，自配改进的海水贝类平衡盐溶液（MWBSS）；自制珍珠贝血清和珍珠贝体液；角质细胞生长因子为美国Sigma公司产品。方法：使用2.5 g/L胰蛋白酶消化马氏珠母贝外套膜组织，收获的细胞使用M199（含体积分数10%胎牛血清）培养基进行培养，并在其中加入10 μg/L的角质细胞生长因子、10%自制的珍珠贝体液和贝血清，持续培养30 d。主要观察指标：细胞生长特性和生长状态。结果：体外培养的珍珠外套膜上皮细胞增殖迅速，分泌功能旺盛，肌肉细胞增殖能力强，并最终能包裹外套膜上皮细胞，形成结构较完整、分泌能力较强的珍珠囊。结论：使用改进的培养技术和培养体系中添加角质细胞生长因子在体外培养珍珠外套膜组织细胞，可获得生长状态和分泌功能均较好的珍珠囊。