摘要：目的研究血清在构建角膜基质细胞体外三维培养模型中对细胞生长情况及胶原纤维生成的影响,为体外研究角膜基质细胞外基质(ECM)纤维化提供新的培养模型。设计实验研究。研究对象牛角膜基质细胞。方法分离原代牛角膜基质细胞,取第一代细胞作为种子细胞构建Pellet模型,实验分为对照组(DMEM/F12)和血清组(DMEM/F12+10%胎牛血清FBS)。Pellet模型培养3周后,肉眼观察细胞生长状态,同时进行HE染色及Calcein AM/PI染色测定细胞活性,并应用MASSON染色及透射电子显微镜(TEM)观察胶原纤维的形成、走向及排列情况。主要指标细胞生长状态、细胞活性、胶原纤维走向及排列情况。结果Pellet模型培养3周后,对照组未观察到角膜基质细胞抱团生长现象,且细胞易松散,难以进行后续实验;血清组Pellet模型中细胞明显成簇生长,呈粒状,结合牢固。Calcein AM/PI染色及HE染色可见血清组大多数细胞存活且密集生长,细胞结构完整。MASSON染色示血清组较多胶原纤维显色,并于TEM下观察到胶原纤维密集分布于细胞外且走向紊乱。结论含血清的培养环境能成功构建牛角膜基质细胞体外Pellet三维培养模型,且能生成含有胶原纤维的ECM。

摘要：目的:探讨高钙状态下衰老标记蛋白30(SMP30)低表达对人晶状体上皮细胞(LECs)系SRA01/04增殖、氧化应激的影响。方法:设计3条干扰SMP30靶向基因RGN表达的RNAi序列(KD1~3),以空载序列为阴性对照组(NCKD),构建慢病毒载体并感染SRA01/04细胞,同时以未感染的SRA01/04细胞作空白对照组(CON)。RT-PCR筛选干扰效率最高的慢病毒载体用于后续实验。采用含15mmol/L CaCl2的完全培养基处理细胞24h模拟发生白内障时人LECs的病理状态,通过BrdU-Elisa法检测细胞增殖活力,并检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及氧化型谷胱甘肽/总谷胱甘肽(GSSG/T-GSH)水平以评估细胞氧化应激水平。结果:成功构建KD1~3及NCKD慢病毒载体,感染SRA01/04细胞效率约80%。三种慢病毒载体(KD1~3)敲减效率分别为93%、60%、74%,故选择KD1慢病毒载体进行后续实验。高钙状态下,KD1组细胞相对增殖活力和SOD活力[(2.42±0.08)和(11.69±0.52U/mg)]均低于NCKD组[(2.95±0.08)和(31.10±2.24U/mg)]和CON组[(2.96±0.25)和(26.33±1.04U/mg)],GSSG/T-GSH比值(70.80±2.34)高于NCKD组(15.93±3.47)和CON组(20.05±2.45)(均P0.05)。结论:高钙状态培养下,RGN-RNAi慢病毒载体介导的SMP30低表达SRA01/04细胞增殖活力及抗氧化应激能力减弱,提示SMP30可能具有调控细胞增殖、抗氧化应激的保护作用。

摘要：背景高效、低成本分离出生物学功能活性高的角膜基质细胞是开展角膜基础研究的需要。目前的分离方法成本高、分离效率低，而通过培养达到扩增细胞数会导致细胞表型快速改变。应用成本较低的Ⅰ型胶原酶，通过改良的两步酶消化法可能达到高效、快速、低成本分离牛角膜原代基质细胞的目的。目的评价设计的Ⅰ型胶原酶两步酶消化法分离原代牛角膜基质细胞的效果，并观察体外培养原代牛角膜基质细胞的形态学变化。方法分别用基础培养液配制的0．5g／L及1．0g／L Ⅰ型胶原酶以两步酶消化法顺序消化牛角膜组织，分离角膜基质细胞，以细胞计数板进行计数，检测基质细胞收获效率；锥虫蓝染色法检测收获细胞的存活率；分离的细胞进行原代培养，倒置显微镜下观察细胞形态和生长的变化；应用Alexa488标记的鬼笔环肽检测原代培养的牛角膜基质细胞中F—actin的分布。结果牛角膜经两步酶消化法基质逐步解离和降解，绝大多数细胞得以释放和分离，分离的牛角膜基质细胞呈圆形，透亮且大小均匀。每个角膜收获（2．109±0．142）×10。个基质细胞，细胞存活率（91．693±3．551）％，贴壁率（81．195±1．214）％。原代培养的牛角膜基质细胞贴壁呈树突样，铺伸至星状，融合时树突连接呈网状，其F—aetin局限性分布于细胞皮质。结论两步酶消化法可使牛角膜基质完全消化降解，具有高细胞收获率、高细胞存活率和操作简便等特点。原代培养的牛角膜基质细胞呈树突状，F—actin分布于细胞皮质。

摘要：背景 衰老标记蛋白30（SM P30）是一种新型的钙调节蛋白,具有抗氧化、稳定钙离子、抗凋亡等保护作用,研究证实随着年龄的增长,SMP30在机体组织中的表达逐渐减少,但其与不同年龄白内障发生关系的研究少有报道. 目的 对SMP30在不同年龄组白内障患者晶状体上皮细胞（LECs）中的表达情况进行定性、定位和定量研究,探讨其与白内障发生的关系.方法 本研究经广西医科大学第一附属医院伦理委员会批准,采用非随机对照临床研究设计.收集2011年9月至2012年12月在广西医科大学第一附属医院眼科行白内障手术的患者,根据患者的年龄不同分为儿童白内障组（1 ～18岁）、青年白内障组（19～ 45岁）、中年白内障组（46 ～ 60岁）和老年白内障组（＞60岁）,均于白内障摘出术中获取晶状体前囊膜,每组各12例,并收集同期获取的19～45岁正常角膜供体的晶状体前囊膜12例作为正常对照组.采用间接免疫荧光法检测各组晶状体囊膜LECs中SMP30的表达,按单位面积吸光度（A）值计算平均荧光强度值. 结果 SMP30在各组患者晶状体囊膜LECs中均呈阳性表达,FITC染色呈绿色荧光,主要表达于细胞质,细胞核内有少量表达.儿童白内障组、青年白内障组、中年白内障组和老年白内障组患者LECs中SMP30表达的荧光强度分别为0.185±0.020、0.181±0.034、0.207±0.018和0.126±0.027,均明显高于正常对照组的0.087±0.007,差异均有统计学意义（q=3.96、3.82、4.01、3.55,P＜0.01）,儿童白内障组、青年白内障组、中年白内障组间LECs中SMP30的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）,老年白内障组患者LECs中SMP30表达的荧光强度明显低于儿童白内障组、青年白内障组和中年白内障组,差异均有统计学意义（q=3.42、3.21、3.80,P＜0.05）.结论 SMP30在白内障患者中表达增高,可能是人LECs的保护性因子,老年患者LECs中其表达量的降低可能是年龄相关性白内障发生的原因之一.

摘要：目的探讨作者自行设计的新型钩针在玻璃体切除联合晶状体切除术治疗晶状体后脱位中的应用。方法2004年9月至2005年6月收集选取晶状体核硬度为Ⅰ—Ⅱ级的晶状体后脱位7例(7眼),在新型钩针穿刺固定下用玻璃体切除器切割头对晶状体进行咬切摘出,同时进行Ⅰ期睫状沟缝线悬吊植入后房型人工晶状体。结果全部脱位的晶状体均顺利咬切摘出并植入人工晶状体,术后裸眼视力明显提高。随访1～3月,最佳矫正视力0.5～1.0者5眼,0.4以下2眼。术后眼压均得到控制,所有病例均无严重并发症。结论采用自行设计的新型钩针穿刺固定后脱位晶状体有利于切割头进行咬切摘出。

摘要：背景:研究证明,促甲状腺素受体是甲状腺和眼眶组织的共享抗原,细胞因子在Graves眼病的发生发展中起着重要的作用,但细胞因子与促甲状腺素受体在Graves眼病的发生发展中的关系仍不清楚。目的:验证细胞因子对Graves眼病患者体外培养的眼眶脂肪细胞分化过程中促甲状腺素受体表达的影响。设计、时间及地点:单一样本观察,于2003-09/2004-03在中山大学眼科中心中心实验室完成。材料:Graves眼病患者球后脂肪组织来源于行眼眶减压手术8例严重Graves眼病患者;人重组白细胞介素2,4,6,10和人重组干扰素γ购自PEOROTECHEC公司。方法:对8例患者的眼眶脂肪细胞进行分化培养和分组处理。实验组:分别加入白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素6、白细胞介素10和干扰素γ等细胞因子刺激,12d收集细胞;未处理组:不加入任何细胞因子;对照组:作原代培养。主要观察指标:通过反转录-聚合酶链反应观察促甲状腺素受体的表达;放射免疫法检测促甲状腺素刺激后细胞内cAMP的含量;油红染色提取法检测细胞内脂肪含量。结果:①白细胞介素6、白细胞介素4、白细胞介素10、白细胞介素2等细胞因子处理组的目的条带均强于未处理组和干扰素γ组。②白细胞介素6组对促甲状腺素刺激后cAMP的产量最高,是对照组的2倍,白细胞介素2、白细胞介素4和白细胞介素10处理组也均有不同程度的增高,而干扰素γ处理组对促甲状腺素刺激后cAMP的产量则明显低于对照组。结论:白细胞介素6、白细胞介素4、白细胞介素10等细胞因子可促进Graves眼病患者眼眶脂肪细胞分化过程中促甲状腺素受体的表达和增加细胞内的脂肪含量,干扰素γ可抑制促甲状腺素受体的表达和降低脂肪含量。

摘要：目的:探讨显微镜直视下裂孔定位法在巩膜扣带术中定位和封闭视网膜裂孔的疗效。方法:2000/2004年的住院孔源性视网膜脱离,随访超过2mo的患者65例65眼。通过手术显微镜巩膜顶压作裂孔定位,冷凝。根据术前设计分别行环扎+巩膜外加压,或巩膜外加压。结果:术后65例65眼视网膜裂孔均位于手术嵴上,裂孔封闭好。出院后3例视网膜脱离复发,经二次手术后视网膜复位。65例65眼术后视力均有不同程度的提高。并发症有高眼压4眼,视网膜脱离复发3眼。一次手术成功率是95%。随访2mo以上,最佳矫正视力≥1.0的8眼,≥0.8并<1.0的5眼,≥0.5并<0.8的16眼,≥0.3并<0.5的9眼,≥0.1并<0.3的20眼,≥0.05并<0.1的6眼,<0.05的1眼。结论:显微镜直视下裂孔定位法定位、封闭裂孔准确、操作简单、效果好。

摘要：目的:探讨双下转肌麻痹患者的临床表现、手术治疗方法以及治疗效果。方法:以2009-07/2011-11期间我科收治的6例双下转肌麻痹患者为研究对象。检查眼位、眼球运动、代偿头位和牵拉试验等。采用减弱患眼上直肌、下斜肌转位联合或分次行水平肌手术的治疗原则。综合分析其病例资料、手术方法及随访结果,观察手术疗效。结果:本病的临床特点为患眼上斜视,上斜度≥25△,可同时伴有内斜或外斜,患眼外下转和内下转均明显受限,常以健眼为注视眼,以患眼注视时可表现为健眼假性上睑下垂。经6～24mo随访,6例患者,1次术后眼位矫正5例,1例经第2次行水平肌手术获得外观显著改善。结论:眼球运动检查是诊断双下转肌麻痹直观而有效的方法,斜视度和牵拉试验结果是手术设计的重要依据;手术可使大多数患者获得外观上的改善;合并水平斜视者手术可同期或分期进行;手术原则是减弱患眼上直肌、下斜肌转位联合或分次行水平肌手术。

摘要：大量研究表明,青光眼对色觉的损害以短波长为早为重,因此,近年来有人设计了蓝色光标、黄色背景视野检查,即短波长自动视野检查或称蓝黄视野检查.这种检查方法采用黄色背景来中和感受中-长波长视野细胞的敏感性,从而得以单独检查感受短波长(＜475nm)视锥细胞的功能,同时,黄色背景也可中和视杆细胞的敏感性,以减少它们的参与效应.

摘要：眼球前段重建术是为挽救病变侵及全角膜和眼前段组织的眼球及视功能而设计[1].我院近年来对一些非常严重的感染性全角膜溃疡,患者实施了眼球前段重建术,取得了一定的效果.现总结如下.