摘要：目的探讨下调甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR）基因表达对顺铂耐药的卵巢上皮性癌（卵巢癌）SKOV3／DDP细胞体内外生物学特性的影响。方法（1）MTRR基因下调的SKOV3／DDP细胞系的构建及鉴定：设计4个针对MTRR基因不同靶序列的短发夹状RNA（shRNA），分别为U6-GFP-Neo-homo-1106、U6-GFP—Neo-homo-1931、U6-GFP—Neo-homo-419、U6-GFP-Neo—homo-1460，蛋白印迹（western blot）法筛选干扰效果最好的针对MTRR基因的shRNA连接至pSicoR质粒，建立重组慢病毒干扰载体（即pSicoR-1106）并感染SKOV3／DDP细胞，流式细胞仪筛选稳定转染的细胞，逆转录（RT）-PCR技术及western blot法验证转染后细胞中MTRR mRNA和蛋白的表达。（2）体外实验：实验分为3组，重组慢病毒干扰载体pSicoR-1106、阴性对照质粒pSicoR-NC及包装质粒采用脂质体法分别转染肾上皮细胞系293T细胞，所得病毒上清液感染SKOV3／DDP细胞，所得感染后细胞即为下调MTRR基因的SKOV3／DDP-MTRRi细胞（SKOV3／DDP-MTRRi组）以及阴性对照SKOV3／DDP-NC细胞（SKOV3／DDP-NC组，作为阴性对照）和未转染的SKOV3／DDP细胞（SKOV3／DDP组，作为空白对照）。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定3组细胞的生长情况及其对顺铂的耐药性[以50％抑制浓度（IC50）表示]；不同浓度（0、1、2、4μg／m1）的顺铂作用后，克隆形成实验检测3组细胞的克隆形成情况，流式细胞仪检测3组细胞的细胞周期比例。（3）体内实验：将上述3组细胞接种于裸鼠的腹股沟皮下，建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。以2．5mg/kg顺铂腹腔注射（每2天1次，共21次）后，观察3组（每组8只）裸鼠移植瘤的生长情况，采用免疫组化SP法检测3组裸鼠移植瘤组织中MTRR、细胞增殖相关核抗原（Ki-67）蛋白的表达。结果（1western blot法筛选的干扰效果最好的针对MTRR基因的shRNA为U6-GFP-Neo-homo-1106，以此建立重组慢病毒干扰载体pSicoR-1106，转染SKOV3／DDP细胞后，其MTRRmRNA和蛋白的表达明显减弱，证实下调MTRR基因表达的SKOV3／DDP细胞系构建成功。（2）MTT比色法检测显示，第5天开始，SKOV3／DDP—MTRRi组细胞的生长速度明显慢于SKOV3/DDP-NC组和SKOV3／DDP组（P〈0．05）；SKOV3／DDP—MTRRi组、SKOV3／DDP-NC组、SKOV3/DDP组细胞对顺铂的IC50分别为4．01、7．90、8．91μg／ml，SKOV3／DDP—MTRRi组明显低于SKOV3／DDP-NC组和SKOV3／DDP组（P〈0．05）。不同浓度（0、1、2、4μg／m1）的顺铂作用后，克隆形成实验检测显示，各浓度下SKOV3／DDP-MTRRi组克隆形成个数均明显少于SKOV3／DDP-NC组、SKOV3／DDP组（P〈0．05）；流式细胞仪检测显示，当顺铂浓度为4μg／ml时，SKOV3／***组细胞的GJG。期比例为（72．8±5．0）％，明显高于SKOV3／DDP-NC组及SKOV3／DDP组[分别为（64．4±2．5）％、（64．3±3．0）％，P〈0．05]。（3）裸鼠腹腔内注射顺铂6周后，SKOV3／DDP-MTRRi组、SKOV3／DDP—NC组、SKOV3／DDP组裸鼠移植瘤的体积分别为（97±32）、（168±45）、（173±32）mm^3，移植瘤质量分别为（0．36±0．17）、（1．08±0．17）、（1．11±0．20）g，SKOV3／DDP-MTRRi组上述指标均明显低于SKOV3／DDP-NC组、SKOV3／DDP组（P〈0．05）。3组移植瘤组织中，MTRR蛋白的阳性表达率分别为2／8、5／8、7／8，Ki-67蛋白的阳性表达率分别为118、6／8、7／8，SKOV3／DDP—MTRRi组上述指标均明显低于SKOV3／DDP-NC组、SKOV3／DDP组（P〈0．05）。结论MTRR基因表达下调后在体内外均能降低顺铂耐药的卵巢癌SKOV3／DDP细胞的增殖能力，并增加其对顺铂的敏感性。