摘要：为了制备高效价和多动物适用性的抑制素α(inhibinα,INH-α)多克隆抗体,通过生物信息学分析INH-α物种同源保守性,并以pET-32α为骨架,构建INH-α和INH-α-Ferritin表达载体,原核表达纯化后的重组蛋白用于免疫日本大耳兔,采用间接ELISA方法测定兔血清中抗体效价。结果表明,本研究成功构建了INH-α和INH-α-Ferritin原核表达载体,在0.4 mmol/L IPTG、37℃诱导6 h的条件下,分别获得了35 kDa和50 kDa包涵体形式的重组蛋白。通过免疫获得了高效价的兔抗多克隆抗体,INH-α-Ferritin抗血清效价达到1∶19531250。生物信息学分析结果显示INH-α在哺乳动物间的同源性高、保守性强。本研究成功构建INH-α和INH-α-Ferritin原核表达载体,并通过INH-α-Ferritin显著提高多克隆抗体的效价,为提高哺乳动物家畜繁殖力的研究奠定基础。

摘要：本研究旨在比较泌乳期与干乳期水牛(Bubalus bubalis)差异血清生化指标及差异血清代谢物的组成,探讨血清生化指标与代谢物的相互关联,进一步了解水牛营养代谢过程的调控机制。选取泌乳期(泌乳第100~200天)健康水牛9头和干乳期(停乳后第30~60天)健康水牛9头,每头牛采血清样本两份,一份用生化分析仪进行20项指标检测;另一份用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测分析水牛血清中内源性代谢物。在生化指标检测结果中,泌乳期的谷草转氨酶/谷丙转氨酶(P1),这些代谢产物共富集到8条显著不同的代谢途径,分别是D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,色氨酸代谢,卟啉和叶绿素代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,组氨酸代谢,不饱和脂肪酸的生物合成,以及氮代谢(P<0.05)。这些结果说明在泌乳期时,水牛吸收的营养物质主要用于参与多种氨基酸的合成及脂肪酸的合成与利用。

摘要：试验旨在探索金银花渣和茉莉花渣对隆林黑山羊生产性能和肉品质的影响。试验选择20只3月龄(断奶)、体重接近且健康的隆林黑山羊,随机分为试验组和对照组,每组10个重复,每个重复1只羊。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中添加5%的金银花渣和茉莉花渣。试验期1年。结果显示:与对照组相比,试验组黑山羊的胴体重、净肉重、骨重以及春、夏、冬季的平均日增重显著增加(P0.05),肌肉pH值、熟肉率、多不饱和脂肪酸与n3多不饱和脂肪酸含量显升高(P0.05)。研究表明,在饲料中添加金银花渣和茉莉花渣能够促进隆林黑山羊的生长发育,改善肉品质。

摘要：【目的】研究妊娠后期补饲硫酸镁钾盐(Potassium magnesium sulfate,PMS)对母猪生产性能、血浆生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响。【方法】选取3~4胎次、健康状况良好且预产期相近的妊娠后期(妊娠85 d)史记长×大二元母猪60头,采用单因子试验设计,随机分为4组(每组15个重复,每个重复1头母猪),分别对每头母猪每天饲喂PMS 0(CK)、5、10、15 g。母猪分娩后,停止补饲PMS,泌乳期各组母猪自由采食相同的商业泌乳饲料,试验期至哺乳仔猪18日龄时结束。【结果】(1)补饲PMS对母猪产仔数、健仔数、背膘厚、产程、体重、泌乳期采食量、仔猪初生个体重、断奶仔猪数、哺乳期仔猪死亡数等指标均无显著影响;与对照组相比,补饲PMS后母猪妊娠后期的粪便评分呈线性增长(P_(linear)<0.05),且10 g补饲组显著提高(P_(ANOVA)<0.05);补饲PMS的仔猪初生窝重、断奶仔猪窝重、哺乳期仔猪窝均增重和哺乳期仔猪日增重呈线性增加(P_(linear)<0.05),10 g补饲组与对照相相比分别提高了16.27%、24.42%、35.14%和31.64%;除了初生窝重外均有二次效应(P_(Quadratic)<0.05),且组间差异显著(P_(ANOVA)<0.05)。(2)补饲PMS的母猪血浆中甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白(LDL)、胰岛素(INS)含量呈线性增加效果(P_(linear)<0.05),10 g补饲组较对照组分别提高了50.00%、28.35%、25.00%和31.98%;TG和LDL有二次效应(P_(Quadratic)<0.05)。(3)补饲PMS的母猪血浆中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)含量呈线性变化(P_(linear)<0.05),10 g补饲组较对照组分别提高了17.10%、20.34%、8.00%和15.04%。(4)补饲PMS的母猪初乳中脂肪含量呈线性增加(P_(linear)<0.05),且显著提高(P_(ANOVA)<0.05),初乳中非脂乳固体、乳糖、蛋白质呈线性增加(P_(linear)<0.05)且有提高趋势(0.05<P_(ANOVA)<0.1),其中10 g补饲组的母猪初乳中脂肪较对照组提高了51.42%。【结论】妊娠后期补饲PMS可显著改善母猪粪便评分,缓解母猪便秘,提高母猪的生产性能和机体健康,其中以10 g补饲效果最佳。

摘要：转录因子Tbx3(T-box3)在调控动物个体的正常发育中扮演重要角色。本研究克隆水牛(Bubalus bubalis)Tbx3基因,对其进行生物信息学分析,并检测其在水牛不同发育阶段早期胚胎、不同类型细胞以及不同组织的表达情况,初步探讨Tbx3在水牛胚胎发育过程中的作用。根据GenBank上已登录的牛(Bos taurus)、山羊(Capra hircus)等物种的Tbx3基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术和T-A克隆技术克隆水牛Tbx3基因,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测、分析水牛Tbx3基因的表达谱。结果显示,克隆获得的水牛Tbx3基因长度为3291 bp,包含了编码728个氨基酸的编码区及其5′端1 kb非编码区片段。水牛Tbx3基因与牛、绵羊(Ovis aries)、猪(Susscrofa domestica)、黑猩猩(Pan troglodytes)、小鼠(Mus musculu)Tbx3基因的相似性分别为97%、98%、90%、88%和85%,且在不同物种间高度保守,符合生物进化规律。蛋白质结构预测分析软件提示,Tbx3蛋白包含59.48%无规则卷曲、32.28%α-螺旋、8.24%伸展串,为亲水不稳定的碱性蛋白。RT-qPCR结果显示Tbx3在水牛早期胚胎的四细胞、八细胞期不表达,在二细胞期、桑椹胚期少量表达,在囊胚期表达量最高;在水牛颗粒细胞中不表达,在胎儿成纤维细胞、骨髓间充质干细胞中有少量表达,在类胚胎干细胞中表达量最高;Tbx3在水牛卵巢、心脏、睾丸、脑、胚胎生殖嵴中少量表达,脾脏、肝脏表达更高,肾脏、肌肉中表达量最高。本研究发现水牛Tbx3基因的表达具有时空特异性,提示其在水牛早期胚胎细胞谱系分化中起重要作用,但具体作用机制尚需进一步研究阐明。

摘要：甘蔗镰孢菌(Fusarium sacchari)是引起毁灭性病害甘蔗梢腐病(sugarcane pokkah boeng disease, PBD)的主要病原菌之一。病原菌分泌的效应蛋白在病原与植物互作中发挥至关重要的作用。本研究基于课题组前期甘蔗镰孢菌全基因测序数据,设计基因特异性引物,通过RT-PCR扩增得到一个新的含CBM4;结构域的效应蛋白基因,并对其功能进行了初步探索。序列分析表明Fs11724基因开放阅读框822 bp,编码273个氨基酸,分子量为28.24 kDa,理论pI值为4.29,亲水性平均系数–0.072,属于亲水性分泌蛋白;通过农杆菌介导的烟草瞬时表达系统证实Fs11724抑制由BAX诱导的细胞程序性死亡,表明Fs11724具有潜在抑制寄主防御反应的毒性功能;同时,利用酵母分泌系统对其编码蛋白信号肽的分泌功能进行验证,确定该基因编码蛋白为典型分泌蛋白;qRT-PCR结果分析表明Fs11724在甘蔗镰孢菌侵染前、后期上调表达,表达量在168 hpi达到峰值。该研究表明Fs11724编码蛋白为甘蔗镰孢菌F. sacchari的一个效应蛋白,其信号肽具有分泌功能,并且可以在非寄主植物烟草上抑制BAX诱导的细胞坏死,在真菌侵染植物过程中显著表达,可能在调控植物免疫反应中发挥作用。研究结果为进一步研究病原–甘蔗互作,揭示甘蔗镰孢菌发病机制奠定基础。

摘要：荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是植物分子细胞遗传学研究最为重要的手段之一。近些年,基于参考基因组设计的低拷贝寡聚核苷酸探针在FISH中应用得越来越广泛。然而,由于植物基因组中分布大量的重复序列,这使得oligo-FISH的分辨率存在一定局限性。利用包含多个荧光基团的荧光PCR引物,扩增出甘蔗染色体特异oligo探针,并进一步优化甘蔗的荧光原位杂交体系,提高了甘蔗oligo探针识别近缘物种染色体的效率。通过开发多荧光标记的甘蔗oligo探针以及甘蔗荧光杂交体系的优化,有效拓宽荧光信号的最小分辨率,提高信噪比(signal-to-noise ratio,SNR),并成功基于甘蔗oligo探针对高粱1-10号染色体分型。多荧光标记引物增强oligo探针信号的新方法及FISH体系的优化为今后在其他物种中提高oligo-FISH鉴定染色体及捕捉微弱的荧光信号提供了参考。

摘要：高粱(Sorghum bicolor)是禾本科(Poaceae)一年生草本植物,也是研究C_(4)植物的模式生物。甜高粱相对于普通高粱有其独特的糖代谢积累机理,发掘其糖合成、运输和积累相关的调控基因和代谢途径,有助于糖分和碳源分配的遗传改良设计,又可为其他重要的C_(4)作物提供参考。本研究结合基因组、转录组和代谢组等多组学数据,从蔗糖转运、蔗糖合成相关基因家族以及基因共表达网络等多个角度对甜高粱及高粱的组学数据进行比较分析。结果如下:(1)构建了甜高粱及普通高粱品种的泛基因组,大小为908 Mb,比单个参考基因组增加约24.6%,进行了核心基因、非核心基因以及基因组存在/缺失变异区域相关基因的分类统计及功能富集分析,对多样本多个时期的RNA-seq数据进行差异表达分析,构建基因共表达网络,对基因集进行筛选验证,进一步筛选得到了糖分相关基因;(2)利用12份不同时期的甜高粱(Rio)、高粱(BTx406)以及两者子代(R9188)的RNA-seq数据进行差异表达分析与基因共表达分析,通过与对应时期蔗糖浓度变化数据进行相关性分析,得到与蔗糖代谢相关的基因集。研究成果有助于揭示甜高粱与高粱糖分差异原因,为高粱品种改良及育种相关研究提供借鉴。

摘要：水牛为全世界约20亿人提供乳、肉等产品,在人类生活中占据重要位置,然而水牛的遗传信息未得到充分挖掘。本文对水牛重要经济性状、水牛高质量参考基因组构建、进化历史、全基因组关联分析和重要经济性状关联基因发掘的研究进展进行综述,并对优化建立水牛全基因组选择育种和基因组设计育种为人类培育出产奶量高、个体大、性格温顺、抗热应激且耐粗饲的理想水牛新品种进行了展望,为实现水牛基因组选择育种提供参考。

摘要：SWEET蛋白通过调控植物体内糖分的运输、分配、转化和贮藏,广泛参与植物生长发育及响应病原菌胁迫的生理生化过程。为揭示SWEET基因在甘蔗生长发育及其与赤条病菌互作中的生物学功能,本研究基于甘蔗割手密种全长转录组文库和比较基因组学,根据注释SsSWEET11基因序列设计特异引物,利用RT-PCR技术从甘蔗割手密种cDNA文库中扩增该基因的全长序列,运用多种生物信息工具分析其特征,构建系统进化树;采用不同组织和抗、感赤条病的甘蔗品种分析SsSWEET11的表达模式;利用瞬时表达和亚细胞定位分析SsSWEET11的功能。结果表明,从甘蔗割手密种克隆获得SsSWEET11基因(登录号为OP554214),该基因全长927bp,编码308个氨基酸残基,具有2个MtN3_saliva结构域和7次跨膜结构域。系统进化树分析显示,SsSWEET11属于SWEET蛋白家族第Ⅲ亚家族成员,与高粱SbSWEET11相似性高达97.41%。qRT-PCR分析表明, ShSWEET11基因在不同组织中组成型表达,在蔗叶和根中表达量显著高于其他组织;赤条病菌胁迫下,ScSWEET11基因在抗病品种ROC22和感病品种MT11-610中呈现完全不同的表达趋势,与对照相比,抗病品种中该基因的表达量显著下调,而感病品种中,在胁迫48h和72h后该基因的表达量显著上调,分别为对照的5.90倍和5.43倍。亚细胞定位表明, SsSWEET11-GFP融合蛋白定位在质膜上。瞬时过表达SsSWEET11基因1 d后,二氨基联苯胺(Diaminobenzidine, DAB)对本氏烟叶片进行染色,叶片颜色没有变化,再接种烟草青枯菌、茄病镰刀菌蓝色变种7 d后,过表达植株叶片发病比对照组严重,且过敏反应相关基因、茉莉酸和水杨酸代谢途径相关基因呈现上调表达,而乙烯通路相关基因则没有响应,表明SsSWEET11基因参与茉莉酸和水杨酸信号传导通路,且病原菌侵染本氏烟草叶片能够诱发过敏反应。研究结果不仅为开发与甘蔗抗赤条病菌性状关联的分子标记提供积累,也为深入解析赤条病侵染甘蔗的分子机制奠定一定的基础。