摘要：根据马立克氏病病毒 (MDV)强毒株GA的基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以特超强毒 6 48株基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白gI基因阅读框 (ORF)中 ,除去其N_端编码疏水区的 16 5个碱基对 (bp)以外的其余部分 ;将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体pGEX_6P_1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游 ;将重组质粒转化进大肠杆菌BL2 1株 ,在 1.0mMIPTG浓度和 30℃的条件下诱导 ,gI_GST基因融合蛋白获得了理想的表达 ;经聚丙烯酰胺凝脉电泳 ,West ern_blot试验 ,验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的 6 3kD。将表达产物回收后免疫小鼠 ,所得抗血清可与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在免疫荧光试验 (FA)中呈细胞膜阳性染色。试验结果表明 ,在大肠杆菌中表达的 6

摘要：目的设计抗H5N1亚型流感病毒的通用型mRNA疫苗,并完成候选疫苗的构建、表达及鉴定。方法设计3组候选疫苗抗原基因,分别命名为Flu、Flu-ferritin和CD5-Flu-ferritin(Flu含H1/H3/H5/B型流感病毒血凝素颈部区保守表位,并串联甲型流感病毒M2e基因中保守序列;Flu-Ferrin在Flu后串联铁蛋白,用以形成多聚体;CD5为分泌型信号肽,将多聚体外泌)。3组基因依次克隆至设计的mRNA疫苗骨架载体上,通过质粒鉴定、线性化处理、体外转录、纯化、及Cap 1加帽处理,分别制备mRNA并转染A549细胞,通过Western blot和IFA方法鉴定目的蛋白的表达。结果成功构建3组mRNA候选疫苗,并在A549细胞上表达抗原蛋白。结论证明了抗原设计的可行性,为开展动物试验奠定了基础。

摘要：建立蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)RT-PCR检测方法,用于2018年云南省库蠓的蓝舌病(BT)流行病学检测。设计2对保守引物,优化RT-PCR方法的退火温度、循环次数、退火时间和延伸时间,并进行灵敏性和特异性评价。采集了昭通市3个县及普洱市澜沧县的BT传播媒介库蠓共25万余只,进行研磨后,用建立的RT-PCR方法检测样本。筛选出1对引物BTVS10-F和BTVS10-R作为蓝舌病毒RT-PCR检测引物,敏感度达到10^(2.5) TCID_(50)/0.1 mL,通过对BTV16型的阳性病毒检测,证实该方法的可行性。

摘要：根据马立克氏病病毒 ( MDV)国际标准株 GA株的基因序列设计合成了可扩增 g I基因 ( 1 0 60 bp)的引物 .用 PCR技术 ,以 CVI988基因组为模板 ,扩增得到了预期大小的 PCR产物 .将此 PCR产物和p U C1 8经同样的限制性内切酶 Kpn 和 Bam H 处理后 ,连接、转化、鉴定 ,得到了含有 g I基因的质粒 .将此质粒进行序列分析 ,比较了它与其他强毒和超强毒株的同源性 .用 DNAstar软件对其编码的氨基酸的疏水性和抗原性进行了预测 .

摘要：目的:尝试应用RNA干扰(RNAi)沉默猪源PK-15细胞中的猪内源性反转录病毒(PERV),并通过反转录酶活性及pol基因相对荧光定量PCR检测沉默效果。方法:依据GenBank公布的PERV pol基因序列,采用Invitro-gen公司的BLOCK-iT RNAi Designer软件设计Stealth小干扰RNA(siRNA)序列;将合成的siRNA转染PK-15细胞,72 h后检测细胞上清PERV反转录酶活性及细胞内pol基因拷贝数并评价沉默效果。结果:反转录酶活性及pol基因拷贝数检测结果表明,设计的3条Stealth siRNA序列中,位于pol基因3272～3296 bp的序列能有效沉默PERV。结论:RNAi方法可有效使猪源PK-15细胞中的PERV沉默,为进一步研究天然抗病毒分子与PERV的相互作用提供了实验基础,同时也为猪源异种移植研究中去除PERV提供了一种可供尝试的方法。