摘要：【目的】原核表达Bcl-x L蛋白的突变体PTD-FNK蛋白,为揭示PTD-FNK蛋白的抗凋亡机制及加快其在家畜精液冷冻保存中的应用提供参考依据。【方法】根据FNK蛋白核苷酸序列设计两对突变引物,以p ET-28a(+)-PTD-Bcl-x L质粒为模板,PCR扩增两段突变序列;回收PCR产物片段进行Dpn I消化,构建重组质粒并转化大肠杆菌DH5α,以IPTG诱导融合蛋白表达,探索IPTG诱导表达的适宜温度,最后以SDS-PAGE电泳和Western bloting对纯化蛋白进行鉴定。【结果】两个突变片段的PCR扩增产物大小分别为462和5616 bp,经Dpn I消化后进行重组反应,再转化至大肠杆菌DH5α能成功构建p ET-28a(+)-PTD-FNK质粒。在30℃下以IPTG诱导7 h可获得可溶性的PTD-FNK蛋白,以NI-NTA Argrose纯化后的融合蛋白经Western blotting鉴定为PTD-FNK蛋白。【结论】通过调控IPTG诱导温度可成功以可溶性形式表达出PTD-FNK蛋白,且诱导时间短,无须复性,有利于蛋白纯化及加快其在家畜精液冷冻保存中的应用。

摘要：试验旨在研究添加丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和复合菌[丁酸梭菌+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)]对黄鸡生长性能、肠道健康以及盲肠菌群的影响。试验采用单因子随机设计,笼养且限饲的方式进行试验,试验选用35日龄,平均体重383.52 g左右健康、精神状态良好的广西黎村黄鸡3000羽,按照试验要求随机分成3个处理组,每个处理组5个重复,每个重复200羽。第一组:基础饲粮+丁酸梭菌(500 g/t),第二组:基础饲粮+复合菌(丁酸梭菌+枯草芽孢杆菌)1000 g/t,第三组:对照组为基础饲粮,正式记录数据试验45 d。结果表明,添加丁酸梭菌和复合菌均有提高黄鸡的日增重以及降低料重比的趋势(0.05<P<0.10)。对十二指肠、空肠、回肠绒毛有提高的趋势(0.05<P<0.10)。丁酸梭菌组的第一优势菌门是厚壁菌门,复合组的第一优势菌门是拟杆菌门。丁酸梭菌组的另枝菌属(Alistipes)的相对丰度显著低于其复合组和对照组(P<0.05)。复合组的乳杆菌属(Lactoba⁃cillus)的相对丰度显著低于丁酸梭菌组和对照组(P<0.05)。对照组的梭菌属(Clostridium)的相对丰度显著低于丁酸梭菌组和复合组(P<0.05)。丁酸梭菌组的瘤胃球菌属(Ruminococcus)的相对丰度显著高于复合组和对照组(P<0.05)。本试验条件下,添加益生素对黄鸡的生长性能、肠道健康、盲肠菌群等具有改善作用,丁酸梭菌组和复合组在生长性能方面效果相似,而在盲肠菌群分布方面各异。

摘要：白尾蓝地鸲（Cinclidium leucurum）属雀形目（Passeriformes）鸫科（Turdidae）地鸲属（郑光美2011）,见于印度、东南亚和中国中部及南方（约翰·马敬能等2000）。主要栖息于海拔3 000 m以下的常绿阔叶林和混交林中,喜欢潮湿生境,性隐蔽（赵正阶2001）。

摘要：2014—2016年繁殖季,在四川老君山国家级自然保护区内对红翅噪鹛Trochalopteron formosum的繁殖生态进行了初步研究。结果显示,红翅噪鹛的繁殖期为4月下旬到9月中旬。在2016年,红翅噪鹛的繁殖种群密度为14. 733只/km2(95%置信区间:11. 727～18. 511;变异系数:0. 115),主要在八月竹Chimonobambusa szechuanensis上筑巢。在产卵期,雌鸟每天清晨产1枚卵,平均窝卵数为2. 28枚±0. 09枚(n=24;范围:2～3)。孵卵期14～15 d,孵化率约59. 6%。育雏期14 d,出飞率约50. 0%。天敌捕食是红翅噪鹛繁殖失败的首要原因。红翅噪鹛偏好乔木盖度低、竹子较高和竹子盖度较大的巢址生境。乔木盖度可能是影响红翅噪鹛巢址选择的关键生态因子。

摘要：2016年1—2月和6—8月,分别在四川省峨眉山和四川老君山国家级自然保护区,利用无线电遥测技术对灰胸薮鹛Liocichla omeiensis非繁殖季和繁殖季活动区进行了初步研究。结果表明:灰胸薮鹛非繁殖季的平均活动区面积为9 659 m2±975 m2(95%FK),平均核心区面积为2 542 m^2±263 m^2(60%FK)(n=4);繁殖季的平均活动区面积为13 040 m^2±6 003 m2(95%FK),平均核心区面积为1 581 m^2±1 362 m^2(60%FK)(n=2)。非繁殖季遥测个体间的活动区重叠百分率基本在50%以上;而配偶间的活动区重叠面积在70%以上。该现象可能与是否配对、领域行为及栖息地质量有关。此外,还发现灰胸薮鹛的日活动具有节律性,雌鸟和雄鸟分别在早、晚和早、中、晚各有1个活动高峰期。

摘要：本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%～80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μ***-1作用0.5～1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%～80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。

摘要：以3种海鱼(牙鲆、狭鳕、鲱鱼)为样本,针对海产品中主要的致病性寄生虫-异尖线虫,开展了酶消化检测技术的研究。根据鱼肉消化前后干物质的质量变化设计了胃蛋白酶消化效率的计算方法,并按照鱼肉∶消化液=1∶10(g/mL)的反应比例,分别确定了酶水解鱼肉的最佳条件为:初始pH值为1.1,温度为37℃,酶活力为8 U/mL左右;消化后所得的虫体采用多重PCR方法替代传统的形态学观察进行种属鉴定,从而初步建立了基于酶水解-多重PCR的异尖线虫的酶消化检测体系。实际样本检测表明,该技术可以较为准确、快速地用于海产鱼类中简单异尖线虫(Anisakis simplex)和伪地新线虫(Pseudoterranova decipiens)的确证性检测。

摘要：为观察蕨麻多糖(PAP)对免疫功能低下小鼠免疫器官组织内活性氧自由基和抗氧化能力的影响,用地塞米松(Dex)为免疫抑制剂建立免疫功能低下动物模型,测定了小鼠胸腺和脾脏指数、抗超氧阴离子(O2.-)能力、抑制羟自由基(.OH)能力、胸腺中还原型谷胱甘肽(GSH)含量,血浆中总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)水平。结果表明:蕨麻多糖能显著提高免疫功能低下小鼠脾脏指数、胸腺指数、GSH含量、T-AOC、抗O2.-能力、抑制.OH能力,降低免疫功能低下小鼠血浆中MDA水平。表明蕨麻多糖能拮抗地塞米松引起的免疫抑制,可通过调节自由基水平而影响机体免疫系统的功能。

摘要：目的建立RNA干扰后的日本血吸虫转移至小鼠体内发育情况的评价技术,为后组学时代功能基因研究提供工具。方法设计引物扩增日本血吸虫组织蛋白酶B1(SjCB1)基因dsRNA、绿色荧光蛋白(GFP)dsRNA。用日本血吸虫尾蚴感染小鼠,收集14 d的日本血吸虫童虫。用6 mg/L SjCB1 dsRNA体外培养浸泡法对日本血吸虫童虫的SjCB1基因进行特异性敲低(SjCB1干扰组),对照组加6 mg/L GFP dsRNA(GFP干扰组)。采用外科手术将干扰后的童虫过继转移至小鼠肠系膜静脉(SjCB1干扰组、GFP干扰组各3只小鼠,40条/鼠),待虫体发育至性成熟时收集虫体。统计分析雌雄虫回收数量、合抱率、虫体回收率以及虫体长度,观察虫体生长发育情况。采用荧光定量PCR检测干扰后的14 d雌、雄童虫以及回收的雌、雄成虫SjCB1基因的表达情况。结果SjCB1干扰组、GFP干扰组回收的雌、雄虫数量,合抱率,虫体回收率分别为(9.0±1.4)、(9.0±2.1)条,(13.0±2.9)、(11.3±2.5)条,100%、100%和58.60%、54.67%。两组雌、雄虫数量,合抱率,虫体回收率差异均无统计学意义(P>0.05)。SjCB1干扰组过继转移前雌、雄童虫SjCB1基因的相对表达量为1.022±0.019、0.643±0.105,均低于GFP干扰组的2.880±0.297、2.753±0.164(t=0.000、0.000,P<0.01);SjCB1干扰组回收的雌、雄虫SjCB1基因相对表达量分别为1.286±0.211、1.182±0.287,均低于GFP干扰组的5.506±0.326、4.986±1.230(t=0.013、0.000,P<0.01)。SjCB1干扰组、GFP干扰组雌虫长分别为(7.059±1.255)、(8.433±0.749)cm,雄虫长分别为(6.993±2.734)、(10.561±1.375)cm,两组间雌、雄虫差异有统计学意义(t=0.003、0.001,P<0.01)。SjCB1干扰组、GFP干扰组虫体外观形态及内部的生殖系统、消化系统未见差异,两组雌虫在卵模与子宫中均有成形的虫卵。结论建立了干扰特异性基因后观察虫体体内发育表型的技术,体外培养浸泡干扰后日本血吸虫童虫、成虫SjCB1基因表达水平被显著敲低,该方法可用于研究发育相关基因的表型。