摘要：比较CTAB法和SDS法提取叉叶苏铁(Cycas micholitzii)的总DNA,发现CTAB法是提取叉叶苏铁总DNA的较好方法;对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系中的4个主要因素dNTPs,TaqDNA聚合酶,引物及Mg2+进行最优条件筛选;采用单因素法探讨DNA模板量、退火温度和循环次数的最佳反应条件,建立了适合于叉叶苏铁的最佳ISSR-PCR反应体系(20μL体系):1×Buffer,75ng DNA模板,dNTPs 250μmol·L-1,Taq酶1.0U,引物0.2μmol·L-1,Mg2+2.5mmo·lL-1,反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸2min,循环40次,72℃延伸10min,4℃保存。本研究结果为苏铁纲植物的分子生物学和分子系统学研究提供理论参考。

摘要：本研究旨在建立定量分析鸡生长激素(Growth hormone,GH)基因mRNA表达水平的实时荧光定量PCR方法,为鸡GH基因mRNA表达水平的定量分析及探讨其与马立克氏病遗传抗性间关系奠定基础。根据GenBank数据库中鸡的GH基因序列,使用Oligo7软件在该基因保守区域设计合成一对引物并扩增GH基因片段,经回收纯化后连接到pGM-T载体,成功构建了含有GH基因片段的pGM-T-GH标准质粒。在此基础上,通过SYBR GreenⅠ染料法建立了pGM-T-GH重组质粒的实时荧光定量PCR标准曲线及其回归方程,成功建立了实时荧光定量PCR检测鸡GH基因的方法。

摘要：目的:优化灵芝超微粉水提液的最佳提取工艺。方法:采用L9(34)正交设计,以灵芝干浸膏得率和多糖含量为指标,优选灵芝超微粉水提液的提取方法。结果:最佳提取条件为提取温度为100℃,提取时间为2h,提取次数为4次,加水量为10倍。结论:确定的最佳工艺所得的灵芝多糖和灵芝干浸膏都较高,可为实际生产提供依据。

摘要：本实验运用超声波技术提取仙人掌中的多糖成分,采用L9(34)正交实验设计方案,研究了超声波频率、作用时间、固液比、醇沉倍数四个因素对超声波提取仙人掌多糖提取率的影响。结果表明,超声波提取仙人掌多糖最优化工艺条件是:超声波频率为60kHZ、作用时间15min、固液比1∶25、醇沉倍数2·5倍。

摘要：本实验运用超声波技术提取仙人掌中的多糖成分,采用L9（3～4）正交实验设计方案,研究了超声波频率、作用时间、固液比、醇沉倍数四个因素对超声波提取仙人掌多糖提取率的影响。结果表明,超声波提取仙人掌多糖最优化工艺条件是：超声波频率为60kHz、作用时间15min、固液比1：25、醇沉倍数2．5倍。

摘要：采用正交设计和单因素试验相结合的方法,快速建立并优化平果金花茶ISSR-PCR反应体系和程序。平果金花茶ISSR-PCR适宜的反应体系:20μL反应体系含模板DNA 50ng、引物0.75μmol/L、dNTP 0.15 mmol/L、Mg2+1.50 mmol/L、TaqDNA聚合酶1.00 U、10×buffer 2.00μL。扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52.2℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,45个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。经过8份平果金花茶种质的检测,表明该体系稳定、重复性好,可用于平果金花茶遗传多样性分析。

摘要：对仙人掌多糖提取工艺条件及其体外抗氧化性进行了研究。结果表明,仙人掌多糖最佳提取工艺为:提取温度85℃,提取时间2h,固液比1:20,提取次数4次,经过酶法脱蛋白,多糖得率可达5.95%,蛋白质脱除率达到92.5%。蛋白质仙人掌多糖提取液的清除自由基的作用较明显。

摘要：随着基础教育课程改革的推进,生物学实验教学在发展学生核心素养方面的作用和地位日益凸显。29个广西高中生物实验创新比赛案例,说明了当前广西高中生物学实验教学创新发展现状。这其中实验创新主要体现在实验方法创新、实验材料试剂仪器创新、实验教学方案创新、信息技术与实验教学相融合、实验教学理念创新5个方面,存在的不足是,缺乏课前导学、学生主体性发挥需加强、现实情况限制实验创新。对此,应加强方案设计,将实验课堂还给学生,积极寻求方法,大胆尝试。

摘要：目的对罗汉果甜苷V生物合成途径的关键酶法呢基焦磷酸合成酶(Farnesyl pyrophosphate synthase,FPPS)基因的全长cDNA序列进行克隆,为研究罗汉果甜苷V生物合成与基因调控奠定基础。方法根据植物FPPS基因保守功能域设计简并引物,通过PCR和RACE方法克隆罗汉果FPPS基因的全长cDNA。结果获得罗汉果FPPS(SgFPPS)基因的全长cDNA序列共1 354个核苷酸,包含一个1 026核苷酸的开放阅读框架(open reading frame,ORF),cDNA编码的蛋白包含342个氨基酸,推断蛋白质相对分子质量为3.92×104。NCBI Blastx结果显示,SgFPPS基因编码的蛋白与苹果树来源FPPS具有最高同源性,氨基酸一致度达85.1%。SgFPPS具有异戊烯基转移酶的5个典型保守功能域。进化树分析结果显示,SgFPPS基因与苹果树的FPPS具有较近的亲缘关系。结论首次克隆SgFPPS基因的全长cDNA序列,为分析SgFPPS基因表达特性及其在罗汉果甜苷V生物合成中的功能奠定基础。

摘要：为研究染色体分离样蛋白1(chromosomesegregation 1-like,CSE1L)在小鼠骨骼肌发育中的作用,利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建CSE1L基因敲除的C2C12细胞系。针对小鼠CSE1L的第3外显子设计3组sgRNA,构建sgRNA表达质粒(连接绿色荧光蛋白,green fluorescent protein,GFP)和Cas9质粒(连接红色荧光蛋白,red fluorescent protein,RFP)共转染C2C12细胞,筛选高切割效率的sgRNA;将转染该sgRNA和Cas9的C2C12细胞进行流式细胞分选,获取共表达红、绿双色荧光蛋白的细胞,并用DNA测序进行鉴定。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western-blot)鉴定其分子特征。最后分别利用CCK-8、细胞周期以及凋亡实验对CSE1L敲除细胞系活力和凋亡进行检测。结果显示,小鼠成肌细胞中CSE1L基因mRNA和蛋白水平表达量都显著降低(P<0.01),提示CSE1L基因敲除成功。该基因缺失导致C2C12细胞变细长、细胞活力在72 h显著下调,细胞周期停滞、凋亡增加。成功构建了CSE1L基因敲除的细胞系,并研究了小鼠骨骼肌细胞生长发育相关功能,为探索CSE1L基因功能提供细胞模型,并为后续基因编辑敲除鼠制备奠定基础。