摘要：目的:构建NOD小鼠CD8α+抗原基因重组慢病毒载体,探讨其在树突状细胞(DCs)中的表达,阐明1型糖尿病(T1DM)的发病机理。方法:设计CD8α+基因特异性引物,从NOD小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增CD8α+基因,与质粒载体pCDF1-MCS2-EF1-COPGFP进行连接重组,经过转化、筛选、鉴定和序列测定后,应用Western blotting法检测CD8α+基因的表达。应用Nanofectin脂质体转染试剂将含有目的基因的质粒转染HEK293细胞,进行重组慢病毒载体包装,将包装后的重组慢病毒颗粒感染DCs,采用Western blotting法检测CD8α+蛋白的表达。结果:成功构建了NOD小鼠CD8α+抗原基因的重组质粒载体,重组表达载体经转染HEK293细胞获得了重组病毒的原液,重组病毒扩增后感染DCs,免疫荧光下可见DCs内含有绿色荧光蛋白(GFP)表达。结论:NOD小鼠CD8α+抗原基因重组病毒载体构建成功,且有相关蛋白表达。

摘要：该文介绍了解决设计性实验教学中的常见问题,如:如何指导设计性实验的选题、实验方案的设计、实验操作和实验报告的写作以及进行实验评价等经验,提出了教师教学观念的转变是设计性实验成功开设的前提,学校提供良好的实验环境是设计性实验开设的重要保证及教材建设是生物化学设计性实验开设的基础等看法。

摘要：本文总结研制“动物实验”计算机多媒体教学软件(CAI)的设计思路和制作过程,介绍使用本软件辅助教学的初步体会,并希望在改革传统教学手段、提高教学质量的探索中起到抛砖引玉的作用。

摘要：目的 设计并构建靶向Tsc1和Tsc2基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,并在细胞水平验证基因编辑效力。方法针对小鼠Tsc1和Tsc2基因分别设计3个sgRNA导向序列,构建sgRNA表达载体,与Cas9表达质粒共转染小鼠N2a细胞,经药物筛选获得阳性细胞后,PCR扩增打靶位点的DNA片段,利用TA克隆测序验证打靶效率。结果 Tsc1基因Tsc1-M-sgRNA2、Tsc1-M-sgRNA3及Tsc2基因Tsc2-M-sgRNA1、Tsc2-M-sgRNA2、Tsc2-M-sgRNA3这5个靶点均发生基因编辑,编辑效率分别为40%、80%、30%、30%和20%。结论 成功构建了有编辑效力的靶向小鼠Tsc1和Tsc2基因的CRISPR-Cas9基因编辑系统。

摘要：以罗汉果雌雄单株各30份为试材,采用随机引物筛选法,筛选与罗汉果性别相关的RAPD标记,并根据特异片段的测序结果,将RAPD标记转化为特异性和稳定性更好的SCAR标记,以期为罗汉果的性别早期鉴定和分子辅助育种研究提供参考依据。结果表明:在330条随机引物中获得了分别与罗汉果雌性和雄性相关的RAPD引物S2124和S343。根据特异序列测序结果,对雌性特异带S2124-1K和雄性特异带S343-1.4K各自设计并合成了2对SCAR引物,经验证,SCAR引物SC2124-1K-14在62℃和SC2124-1K-8在56℃均可扩增出1 019bp的雌性特异带,SC343-1.4K-12在64℃和SC343-1.4K-4在56℃均可扩增出1 373bp的雄性特异带。这些特异的SCAR标记具有较好的应用价值,可为罗汉果的性别早期鉴定提供分子依据。

摘要：目的:建立一种高效扩增人T细胞受体(TCR)β链可变区(Vβ)基因的方法。方法:根据TCRVβ26个亚家族基因序列特点设计扩增Vβ基因的上游内引物34条、上游外引物37条,并将内、外上游引物各分为8个简并组。在恒定区(C区)设计下游内、外和测序引物各1条以及扩增Cβ基因的上游引物1条。提取细胞RNA,用PolyA介导反转录后,采用巢式PCR扩增正常人CD8T细胞TCRVβ26个亚家族基因,并用JurkatT淋巴瘤细胞作为对照。用T-easy载体克隆RT-PCR产物,对克隆基因进行测序。结果:从正常人的CD8T细胞中扩增到所有TCRVβ亚家族基因,克隆后测序与相应的参考序列同源。从Jurkat细胞扩增出TCRVβ8基因,经测序验证与文献报道一致,且最少可从10个细胞提取的RNA模板中扩增成功。结论:建立的巢式RT-PCR方法可以高效、广谱地扩增人TCRVβ基因,为进一步进行抗原特异性细胞毒T淋巴细胞的TCR克隆和功能研究打下了良好基础。

摘要：为了提高构建深度卷积神经网络(CNN)的自动化程度并进一步提高目标检测精度,提出了一种改进的基于DenseNAS的神经网络架构搜索方法以自动构建铭牌检测CNN。首先,基于改进DenseNAS的Head层,设计了可搜索的、融合深浅层特征的子网模块(CSP-Block1和CSP-Block2)。然后,基于CSP-Block1和CSP-Block2构建的搜索空间,搜索铭牌检测CNN的Backbone和Head。实验结果表明,该方法在一个铭牌5分类的数据集上,耗时约9.35 GPU hours搜索出了最佳神经网络,在测试集上检测精度mAP≈97.3%,比YOLOv5等SOTA方法更高。

摘要：目的研究bs-5-YHEDA铁螯合肽联合索马鲁肽对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠认知能力和病理特征的影响。方法将40只8周龄昆明小鼠随机分为5组,分别为健康对照组、PBS组、bs-5-YHEDA铁螯合肽组、联合治疗组和阳性对照组,每组8只,雌雄各半。除健康对照组外,其他各组注射D-半乳糖连续6周诱导构建AD小鼠模型。从第4周开始连续3周,bs-5-YHEDA铁螯合肽组每隔1 d尾静脉注射200μL bs-5-YHEDA(1 mg·mL^(–1))1次;联合治疗组每天交替给予200μL bs-5-YHEDA铁螯合肽(1 mg·mL^(–1))和索马鲁肽(25 nmol·kg^(–1)·d^(–1))1次;阳性对照组,每隔1 d灌胃给药美金刚(3.3 mg·kg^(–1)·d^(–1))1次;健康对照组和PBS组注射同等剂量PBS。治疗结束后通过Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力,解剖取全脑和全血,HE染色观察海马区病理改变,免疫组织化学、酶联免疫吸附、免疫印迹检测Aβ表达和Tau蛋白磷酸化水平。结果在Morris水迷宫空间探索试验结果显示,与健康对照组比较,PBS组小鼠穿越平台次数、目标象限游泳路程比和时间比的差异均具有统计学意义(P<0.05);与PBS组相比较,联合治疗组目标象限游泳路程比增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,与健康对照组小鼠相比,PBS组海马区锥体细胞层次减少,排列紊乱,细胞水肿,细胞核固缩深染,药物治疗后各治疗组海马区细胞排列紊乱、胞核固缩深染及细胞凋亡情况明显改善。免疫组织化学染色和Western blotting结果显示,与健康对照组小鼠相比,PBS组小鼠Aβ表达水平和Tau蛋白磷酸化水平明显升高,药物治疗后各组小鼠Aβ表达水平和Tau蛋白磷酸化水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.001)。结论bs-5-YHEDA铁螯合肽联合索马鲁肽能够有效改善AD小鼠学习记忆能力和病理特征,但从免疫组织化学和免疫印迹实验结果来看,相较于单一bs-5-YHEDA铁螯合肽组,联合治疗组对AD模型小鼠病理特征的改善并不明显,提示设计的双靶点联合治疗对AD模型鼠认知改善可能存在阈值效应,多靶点组合治疗效果的优化及验证有待进一步的研究。

摘要：为保障特殊车辆在复杂且易拥堵的城市交通环境下执行紧急任务的时效性与畅通性,提出一种基于路径搜索式深度Q网络(P-DQN)的特殊车辆路线优化策略。采用回溯法协助深度Q网络(DQN)解决路径搜索过程中的死路、回路问题,利用人工势场机制引导DQN搜索路径,避免路径结果过长。结合轮盘赌选择法与贪婪值自适应调整机制进一步提升DQN选取路段和建议行驶速度时的准确性。实验在InTAS数据集上对真实城市交通进行模拟,与RERoute、CH等SOTA方法相比,P-DQN获得的总价值提高约16%。

摘要：目的使用CRISPR/Cas9系统靶向小鼠ATP7B基因,建立高效的ATP7B基因CRISPR/Cas9编辑系统,模拟人ATP7B基因突变,为更深入地开展威尔逊病(WD)分子机制研究和疾病干预奠定基础。方法选择我国WD的热点突变,对应小鼠ATP7B基因上的突变区域,设计单向导RNA(sgRNA),构建表达质粒,并与Cas9表达质粒共转染到小鼠N2a细胞,采用药物(嘌呤霉素和杀稻瘟菌素)筛选阳性细胞并提取gDNA,将目标位点的DNA片段进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,然后通过TA克隆序列结果分析对目标基因的打靶效率。结果成功设计sgRNAs序列,并使用CRISPR/Cas9系统编辑了小鼠ATP7B基因,编辑效率为53.85%,创建了ATP7B基因突变细胞模型。结论通过靶向小鼠ATP7B基因,成功构建CRISPR/Cas9系统,这对深入研究WD的致病机制、探讨WD的治疗具有重要意义。