摘要：【目的】建立能同时检测罗氏沼虾野田村病毒(MrNV)和十足目虹彩病毒1(DIV1)的二重荧光定量PCR,为罗氏沼虾白尾病(WTD)及虹彩病毒病(DIV1D)的临床诊断和疫情监测提供更简便和高效的检测方法。【方法】分别根据MrNV-CP基因和DIV1-MCP基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,将目的基因片段分别克隆至pGM-T载体上制备重组质粒(pGM-T-CP^(MrNV)和pGM-T-MCP^(DIV1)),其中,pGM-T-CP^(MrNV)用Sal I酶切后经体外转录获得MrNV标准品RNA,pGM-T-MCP^(DIV1)则直接作为DIV1标准品DNA;以标准品为模板进行反应条件优化及标准曲线制定,建立可同时检测MrNV和DIV1的二重荧光定量PCR,并对该方法进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验。【结果】制备的MrNV标准品RNA和DIV1标准品DNA均具有很好的稳定性,可作为标准品和阳性对照使用;标准品起始模板范围为1.0×10^(1)~1.0×10^(8)Copies/反应时,建立的标准曲线具有良好线性关系。优化后的二重荧光定量PCR灵敏度高,对标准品的检测灵敏度可达10 Copies/反应,对罗氏沼虾组织样品的检测灵敏度约10 Copies/mg;与其他虾类常见病原无交叉反应,且整个检测过程仅需1 h左右。二重荧光定量PCR检测MrNV的组内试验和组间试验变异系数分别为0.31%~0.93%和0.96%~1.33%,检测DIV1的组内试验和组间试验变异系数分别为0.35%~0.81%和0.78%~1.04%。应用建立的二重荧光定量PCR和国内现行有效标准的套式PCR分别对117份临床样品进行MrNV和DIV1检测,结果显示对MrNV和DIV1检测的符合率分别为99.15%和97.44%,且二重荧光定量PCR检测目标病毒拷贝数较低样品时较套式PCR具有更高的灵敏度。2020年广西罗氏沼虾样品MrNV和DIV1的阳性检出率分别为6.0%和11.0%。【结论】结合TaqMan-MGB探针技术建立的二重荧光定量PCR能同时检测MrNV和DIV1,且具有灵敏度高、特异性强、重复性好、简便快速的特点,可为WTD和DIV1D的临床诊断及实时监测提供技术保障。

摘要：近年来我国信息化技术发展迅速,在各行各业都得到广泛应用。科研项目管理的工作中采用信息技术开发、设计管理系统,不仅能提升科研项目管理的信息化水平,还能改善各项管理工作的现状,增强管理工作的效果。基于此,本文提出科研项目管理系统设计的建议和实现的措施,旨在为科研项目管理系统的建设和发展提供参考。

摘要：根据Gen Bank中细菌磺胺类耐药基因Sul1、Sul2和Sul3的保守序列设计3对特异性引物及相应Taq Man探针,以重组质粒标准品为模板对反应条件进行优化,建立一种可同时检测上述3种耐药基因的三重荧光定量PCR方法,并对该方法进行敏感性、特异性、重复性及临床菌株检测试验。结果表明:该方法定量范围为1×10~1~1×10~8拷贝/反应时,其标准曲线呈良好的线性关系;该方法灵敏度高(3个基因的最低质粒检测限均可达到10拷贝/反应)、特异性强(与其他病原菌及病毒无交叉反应)、重复性好(变异系数均小于2%);对临床菌株的检测结果与药敏试验结果的符合率达94.2%,且整个检测过程可在2 h内完成。所建立的可同时检测Sul1、Sul2和Sul3基因的三重荧光定量PCR方法可用于临床检测细菌的磺胺类耐药基因。

摘要：【目的】建立能同时检测沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR,为水产品质量安全检测工作提供技术支持。【方法】以LB肉汤培养基为共增菌培养基,根据沙门氏菌inv A基因、大肠杆菌O157∶H7 rfb E基因、志贺氏菌ipa H基因和金黄色葡萄球菌fem A基因的保守序列设计引物,对引物浓度配比、退火温度及反应体系等进行优化,并对建立的多重PCR进行特异性、敏感性及临床样品检验试验。【结果】4种目标致病菌在LB肉汤培养基中36℃培养18 h后,均表现出良好的生长趋势,增菌数量级均在108 CFU/m L以上。优化后的多重PCR能对4种目标菌的单一或混合基因组DNA进行特异性扩增,而对单增李斯特氏菌、肺炎克雷伯菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌等其他菌株的基因组DNA均未扩增出任何条带;对沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7和金黄色葡萄球菌的最低检出限为102 CFU/m L,对志贺氏菌最低检出限为10 CFU/m L。应用该多重PCR对56份水产品进行检测,其结果与按照GB/T 4789-2003、GB/T 4789-2010检测的结果一致。【结论】针对同时检测沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR具有快速、便捷、灵敏、准确等优点,可为水产品食源性致病菌检测及其安全控制行业提供一种快速、准确、高效、经济的检测手段。

摘要：本研究在黄喉拟水龟中分离的肺炎克雷伯菌基础上,根据肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛的Mrk D基因序列设计引物,通过对SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR反应条件、特异性、灵敏性实验进行调节优化,建立了肺炎克雷伯菌的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。研究结果表明,建立的肺炎克雷伯菌荧光定量PCR方法,检测时间短,用时73 min;特异性强,对非肺炎克雷伯菌无交叉反应;灵敏度高,检测肺炎克雷伯菌DNA的最低检测量为2.78 fg。该方法的建立,为肺炎克雷伯菌的辅助诊断、流行病学调查、毒力基因的分析提供科学借鉴。

摘要：渔业是广西农业和海洋经济的优势产业。近年来广西紧扣水产品稳产保供、渔业提质增效和渔民富裕富足的目标,持续推进渔业高质量发展,取得了显著成效。但在良种体系、设施装备、发展空间和产业布局等方面仍存在一定问题。文章通过对广西渔业发展现状及产业发展存在的问题进行研究分析,提出“抓好渔业顶层设计,推进有序发展;构建良种体系,加大水产良种选育和推广应用力度;提升渔业装备,切实提高渔业发展活力和质量效益;加强科研创新体系建设,提高产业支撑能力;加强水产品加工,构建现代流通网;拓展渔业功能,大力推动产业融合发展”等建议和对策,以促进广西渔业高质量发展。

摘要：【目的】建立一种检测罗氏沼虾野田村病毒（Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV）的实时荧光定量RT-PCR,为防控罗氏沼虾白尾病（White tail disease,WTD）提供技术支持。【方法】将MrNV衣壳蛋白基因片段（***287005）克隆到pGM-T载体,选取阳性重组质粒用SalⅠ酶切获得线性化转录模板DNA,经体外转录获得标准品RNA;在MrNV基因序列的保守区域设计1对扩增片段为119 bp的特异性引物,以标准品RNA为模板进行引物浓度筛选及标准曲线制定,并对建立的检测方法进行标准曲线和融解曲线分析及特异性、敏感性、重复性、临床样品检验试验。【结果】建立的一步法实时荧光定量RT-PCR定量范围宽,检测模板范围在1×10~1~1×10~8拷贝/μL时,其标准曲线呈良好的线性关系;融解曲线表现为单一波峰,Tm为81.17~81.25℃;扩增曲线呈明显的S形,以C_t值35.00为界限,灵敏度约为10个病毒粒子,是常规RT-PCR的1000倍。该方法仅对MrNV具有良好的特异性,其组内和组间试验的Ct值变异系数分别为0.15%~0.83%和0.56%~0.95%;对83份罗氏沼虾临床样品进行检测,其结果与套式RT-PCR的检测结果一致。【结论】针对MrNV检测建立的一步法实时荧光定量RT-PCR具有快速、便捷、灵敏、准确等优点,且对样品的检测范围宽,适用于MrNV隐性感染和发病诊断。

摘要：为估计全州禾花鲤(Cyprinus carpio ***)生长性状的遗传参数,采用嵌套交配设计和人工授精法构建了23个全州禾花鲤家系,利用混合线性模型估计全州禾花鲤体质量、体长、体宽、体长/体宽、日增重的遗传力、表型相关、遗传相关及育种值。结果表明:体质量(0.45,P0.05)为低遗传力。体质量、体宽、全长、日增重性状相互之间有较高的表型相关与遗传相关(0.76-0.99),体质量与体长/体宽、日增重与体长/体宽之间表型相关与遗传相关(0.55-0.67)较低。育种值分析显示日增重与体长、日增重与体宽、体长与体宽性状育种值之间极显著相关(P<0.01),采用育种值开展个体选择与表型值选择结果存在明显差异。全州禾花鲤选育应采用多性状综合选育策略,同时改良生长速度、体型和体色性状,从而获得优质高产禾花鲤新品种。

摘要：通过原核表达系统表达尼罗罗非鱼热休克蛋白Hsc70,纯化该蛋白并制备其多克隆抗体。对尼罗罗非鱼热休克蛋白进行生物信息学分析,设计特异性引物,扩增出Hsc 70基因,通过双酶切与pET-28a构建重组质粒表达载体,并转入大肠埃希菌B21中通过诱导剂IPTG进行原核诱导表达,表达产物用SDS-PAGE鉴定并用镍柱进行纯化。将纯化后的重组蛋白免疫日本大耳兔制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体效价,Western blot检测抗体特异性。结果表明,原核表达系统成功表达了尼罗罗非鱼热休克蛋白Hsc70,重组蛋白分子量约为75 ku,主要以包涵体形式表达。经镍柱纯化得到高纯度的Hsc70;该蛋白免疫日本大耳兔获得特异性多克隆抗体,效价为1∶2 048 000;Western blot检测到一条75 ku的特异性条带,表明该抗体能特异性地识别尼罗罗非鱼Hsc70蛋白。尼罗罗非鱼Hsc70蛋白在大肠埃希菌中成功表达,制备的重组蛋白和多克隆抗体为深入研究尼罗罗非鱼Hsc70的功能提供了分子工具。

摘要：采用巢式设计配对及苗种标准化培育方法,对尼罗罗非鱼家系的构建与培育技术进行研究。选取美国、泰国及广东3个不同地理种群的尼罗罗非鱼进行巢式配对,并对尼罗罗非鱼早期发育阶段苗种进行了环境标准化和一级、二级、三级数量标准化培育,成功构建尼罗罗非鱼全同胞家系30个,分别测定了各家系60日龄时的生长性状,并对其进行了相关数据分析。结果表明:30个家系平均体重达40.59 g,Ⅵ-2的体重平均值最大为60.90 g;Ⅶ-3的体重平均值最小为29.51 g;体重超过平均值的家系有14个,家系Ⅷ-2与总体均值持平,低于总体均值的家系有15个。研究结果可为大规模构建尼罗罗非鱼品系家系育种提供参考。