摘要：【目的】针对凡纳滨对虾白便病的危害现状,克隆其WAP基因并分析其组织表达特性及抗病功能,为凡纳滨对虾抗病药物开发提供参考依据。【方法】设计WAP基因特异性引物,用RT-PCR检测WAP基因在凡纳滨对虾血细胞、眼柄、鳃、肝胰腺、心脏、胃、肌肉、神经、肠、后盲囊和表皮等11种组织的表达分布情况;采用实时荧光定量PCR检测患白便病凡纳滨对虾鳃和肠道组织的WAP基因表达量;重组表达WAP蛋白,使用ELISA分析其与细菌多糖LPS(脂多糖)、PGN(肽聚糖)和LTA(脂磷壁酸)的结合能力。【结果】WAP基因在11个凡纳滨对虾组织均有表达,其中,以在血细胞中的表达量最高,在表皮、眼柄和肝胰腺的表达量表达较低;WAP基因在感染白便病凡纳滨对虾鳃和肠道组织的表达量显著高于健康凡纳滨对虾(PLPS>LTA。【结论】WAP基因与凡纳滨对虾抗病免疫功能密切相关,WAP融合蛋白在开发凡纳滨对虾抗白便病药物方面具有潜在应用价值。

摘要：【目的】建立快速检测罗非鱼罗湖病毒(Tilapia Lake Virus,Ti LV)的RT-PCR方法。【方法】参照GenBank中罗非鱼罗湖病毒全基因序列,依据其假定蛋白基因片段3设计合成1对特异性扩增引物,提取罗湖病毒RNA,逆转录成cDNA,进行PCR扩增,通过优化扩增条件和扩增体系,建立快速检测罗非鱼罗湖病毒的RT-PCR方法。用该方法对自然感染罗湖病毒发病的罗非鱼样品进行RT-PCR扩增。【结果】RT-PCR扩增得到与试验设计相符的499 bp的特异性目的条带,而对健康罗非鱼、野生罗非鱼及其他病毒对照组的扩增结果均为阴性。测序比对结果表明,该方法检测结果准确,最低可检测出约10fg/mL的质粒DNA,具有较好的特异性和较高的敏感性。用该方法对332份临床样品进行RT-PCR检测,其中36份样品扩增出特异性的目的条带,经测序比对,检测结果正确。【结论】建立的检测方法可用于TiLV的检测。