摘要：运用实时荧光聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)对转基因玉米MON863进行品种特异性检测和定量分析。通过设计玉米内源基因和外源基因边界序列特异性引物和Taqman-MGB探针,验证了内源基因的物种特异性和外源基因边界序列的品种特异性。利用已知转基因百分含量的MON863玉米作为标准品,进行荧光定量反应,建立定量标准曲线,通过标准曲线对玉米样品MON863玉米成份进行含量分析。结果表明,该方法重复性好,检测特异性强,最低检测限浓度达到0.001 ng/μL,即14个拷贝。由于使用实时荧光PCR技术,检测周期短,操作简便,可广泛运用于转基因玉米MON863的进出口检测和转基因产品的含量分析。

摘要：根据梨黑斑病原菌链格孢子基因组保守序列,设计合成特异性引物和双荧光标记探针,通过对12个梨花样本、30个梨果样本和94个玻片样本检测分析,建立对香梨黑斑病菌的TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。此外,对其他4种香梨植物病害病原菌进行了荧光PCR检测比对。结果表明:只有香梨黑斑病菌产生荧光信号,与其他4种病害病原菌无交叉反应。与常规PCR相比,TaqMan实时荧光PCR检测特异性强、灵敏度高,能检测到质量浓度为1.9pg/μL的DNA样本,且不必通过病原菌的分离与纯化培养,可直接用于病变样品的检测以及植物病害的筛查与动态监测,适合植物病害的快速诊断和预防控制。

摘要：苹果蠹蛾、香梨优斑螟、梨小食心虫及地老虎是危害新疆香梨等产品的重要害虫,前3种也属于国际上检验检疫重要虫害。目前,国内主要依靠虫体的形态特征对其进行鉴定,缺少分子生物学检测手段,这限制了我国香梨等产品的生产和出口贸易发展。首先得到这4种害虫的16S r DNA COI基因片段,在差异序列设计特异性的引物和探针,利用实时荧光定量PCR技术建立快速分子检测试验体系,依据标准曲线分析检测体系的重复性和灵敏性。结果表明,苹果蠹蛾、香梨优斑螟、梨小食心虫及地老虎最低检出限分别在1.605×10-2、0.729×10-2、0.475×10-2和0.818×10-2 ng/μL,满足检验检疫日常检测需求。为克服实际检测过程中经常会出现某一虫的残片样本或者几种虫聚集在一起的混合样本,使用了单头、多头DNA样本及4种害虫的混合DNA样本进行检测分析,进一步验证了该方法的特异性,可靠性和可适用性。

摘要：根据枣褐斑病原菌链格孢子基因组保守序列,设计特异性引物和双荧光标记探针,建立了枣褐斑病菌的TaqMan实时荧光PCR检测方法。此外,还对其他2种红枣植物病害病原菌和6种链格孢菌种进行了荧光PCR检测。结果表明,只有枣褐斑病菌产生荧光信号,其他病原菌均没有荧光信号产生。与常规PCR相比,TaqMan实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,能检测到浓度为1.4pg/μL的DNA样本。该方法全程不必通过病原菌的分离与纯化培养,可直接用于病变样品的检测以及枣褐斑病的筛查与动态监测,适合枣褐斑病的快速诊断和分子监测。

摘要：为建立牛感染犬新孢子虫的Real-time PCR检测方法,根据犬新孢子虫Nc2基因保守序列设计特异性检测引物和TaqMan-MGB探针,建立新孢子虫病TaqMan-MGB Real-time PCR检测方法。PCR扩增产物约为150bp,与预期片段大小相符;Real-time PCR扩增表明,Ct值与梯度稀释的阳性质粒模板呈良好的线性关系;当检测牛源性弓形虫、牛环形泰勒和牛巴贝斯等虫种阳性DNA时均为阴性;经3D数字PCR判定,Real-time PCR方法的最低有效检测量为6.41拷贝/μL,灵敏性是常规PCR的1 000倍;重复性试验的组内平均变异系数为1.108%,组间为2.732%;本方法与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)的检测符合率为100%(46/46)。该Real-time PCR方法可用于早期诊断和日常监测家畜感染犬新孢子虫。

摘要：本试验筛选了新孢子虫病PCR检测的引物,运用《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)对根据犬新孢子虫Nc2和Nc5基因设计的PCR引物进行了评价。此外,同时运用F1/R1、F2/R2和SN/T 3499F/SN/T3499R共同对14份荷斯坦牛和19份西门塔尔牛全血DNA进行PCR检测,旨在筛选出特异性较好的引物,建立新孢子虫病PCR检测方法和了解当地不同品系牛患新孢子虫病的感染率。结果显示,3对引物分别扩增出105、128和231bp目的片段,均与预期目的片段大小相符;其中,F1/R1与SN/T 3499F/SN/T 3499R的最低检测量相同,为19.9fg/μL,F2/R2最低检测量为199fg/μL,说明F1/R1和SN/T 3499F/SN/T 3499R引物的敏感性更好;运用F1/R1、F2/R2引物分别对19.9pg/μL和199fg/μL模板重复进行4次扩增,均出现了较明亮的扩增条带,证明两对引物重复性较好。33份血液样品共检出6份阳性DNA,阳性率分别为21.43%和15.79%,检出复合率为100%。以上结果说明F1/R1和F2/R2引物均可作为新孢子虫病PCR的诊断引物,本试验初步建立了新孢子虫PCR方法,同时初步了解了当地牛群中新孢子虫感染情况,为有效预防和控制新孢子虫病提供了科学的理论依据。

摘要：【目的】害虫防治指标是害虫管理系统中进行优化决策的主要依据。本文研究了新疆棉区牧草盲蝽Lygus pratensis(Linnaeus)不同时期对棉花为害与棉花产量损失的关系,制定棉田防治指标,以期为新疆棉田牧草盲蝽防治提供理论和基础。【方法】利用二次正交旋转组合设计,建立以蕾期、花期和铃期牧草盲蝽种群数量与棉花产量损失的回归方程,并结合棉花经济允许损失率,制定棉田蕾期、花期和铃期牧草盲蝽防治指标。【结果】牧草盲蝽种群数量与棉花产量损失的回归方程:Y=12.906+5.273X1+4.780X2+2.365X3+4.588X12+3.331X22+2.910X32。蕾期牧草盲蝽成虫为害对棉花产量损失的影响最大,其次是花期和铃期。牧草盲蝽防治指标,蕾期为12头/百株、花期为20头/百株、铃期为41头/百株。【结论】本研究在棉花不同生育期的基础上,分别制定各个生育期牧草盲蝽防治指标,既简捷实用,又便于农民掌握,能更好的指导防治工作,同时可为新疆棉田牧草盲蝽防治提供理论基础。

摘要：根据新孢子虫Nc2基因保守区设计特异性引物,应用均匀设计法优化反应中Taq DNA聚合酶、引物浓度和退火温度等,建立新孢子虫二温式PCR检测方法。结果显示,扩增条带与预期目的片段大小(266bp)相符,未扩增出弓形虫等虫种的阳性DNA片段;扩增片段经克隆、测序发现与引物基因序列的同源性为100%;最低检出量为32.5fg/μL,是三步法PCR的10-1倍,但循环时间缩短了38min;重复3次对10-4、10-5、10-6和10-7稀释的阳性质粒进行二温扩增,10-7稀释均未出现扩增条带。同时对156份牛全血DNA进行检测,检出率为10.90%(17/156),与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)的检出符合率为83.33%(30/36),二者检测结果差异性不显著(P>0.05)。由此可见,建立的二温式PCR检测方法可用于临床诊断和日常监测新孢子虫,为监控"带虫宿主"提供技术支撑。