摘要：目的:通过观察大鼠实验性出血性脑水肿的MRI动态变化,分析亚低温对脑水肿的干预效果。方法:实验于2004-03/2005-04在徐州医学院神经生物学教研室和徐州医学院附属医院核磁共振室完成。选用22只健康SD雄性大鼠,按完全随机设计的方法分为3组,亚低温组、对照组、假手术组分别为9,10和3只。亚低温组与对照组组大鼠苍白球注射胶原酶造成脑出血模型,假手术组不注射药物。亚低温组大鼠随即放至装有冰袋的纸箱中降温,使肛温维持在(32±1)℃;对照组及假手术组使体温维持在(37±1)℃。通过观察MRI[T1,T2,FLAIR(液体衰减反转恢复序列)]的相关指标计算各组大鼠的血肿吸收率[血肿吸收率=(出血后1d的血肿体积-出血后7d的血肿体积)/出血后1d的血肿体积×100%]、水肿吸收率(计算方法同血肿吸收率)、信号强度比(反应脑水肿的相对含水量,T2WI,FLAIR序列信号强度比越高,含水量越多)及信号强度比相对变化率(计算方法同血肿吸收率)。结果:因死亡及MRI显示血肿过小等原因,最后进入结果分析亚低温组、对照组、假手术组分别为6,6和3只。①亚低温组大鼠的血肿吸收率显著高于对照组[(68.27±6.14)%,(61.19±4.19)%(P0.05)。各个时间点亚低温组大鼠T2WI,FLAIR序列的信号强度比均明显低于对照组(P<0.01)。亚低温组大鼠T2WI,FLAIR序列的信号强度比相对变化率显著高于对照组(t=5.038,4.629,P<0.01)。结论:亚低温可促进大鼠脑出血模型脑内血肿及水肿的吸收,可减低T2WI,FLAIR序列水肿区的信号强度,提示亚低温可减少水肿区的含水量。

摘要：背景:亚低温(28～35℃)正成为一种治疗急性缺血性卒中较有前景的方法,低温可有效地减轻脑水肿是其神经保护作用之一。目的:观察亚低温对大鼠脑缺血再灌注后脑含水量和水通道蛋白4(AQP4)表达的影响,探讨亚低温脑保护的作用机制。设计:随机对照实验。单位:徐州医学院神经生物实验室。材料:选择健康雄性SD大鼠110只,体质量250～300g,由徐州医学院实验动物中心提供[***(苏)2002-0079]。应用SPSS11.0统计软件将大鼠随机分3组:①假手术组(n=10);②常温组(n=50);③亚低温组(33℃,n=50)。常温组及亚低温组又分为缺血后再灌注6h,1d,2d,3d,7d各亚组,每亚组各10只大鼠。每组中5只用于脑含水量测定,5只用于苏木精-伊红染色及免疫组织化学染色。方法:参考Pulsinelli方法对常温组及亚低温组大鼠制备四动脉结扎全脑缺血模型,缺血时间为15min。假手术组大鼠仅电凝双侧椎动脉及分离颈总动脉,不作结扎,手术后24h断头取脑。对常温组及亚低温组大鼠脑组织切片,HE染色及免疫组化染色,分别于再灌注后6h,1d,2d,3d,7d观察脑组织病理学和AQP4表达水平的动态变化;干湿重法测定各组大鼠各时间点脑含水量。主要观察指标:①常温组及亚低温组大鼠脑组织病理学变化。②所有大鼠各时间点脑含水量及AQP4表达水平。结果:①常温组大鼠在缺血再灌注后6h可见血管周围间隙增宽、细胞外间隙扩大、脑组织变疏松等脑组织水肿表现,以缺血再灌注后2d最明显;亚低温组大鼠各时间点与相应的常温组比较,脑组织水肿表现相对减轻。②常温组及亚低温组大鼠缺血再灌注后6h内即出现脑含水量增高,2d达高峰,7d时脑含水量明显减少,但仍高于假手术组。亚低温组脑含水量均较相应时间点的常温组少(6h,7d组P<0.01,余各组P<0.05)。③常温组及亚低温组大鼠AQP4表达水平在再灌注后6h增高,2d达最高水平,7d时明显降低,但仍较假手术组高。亚低温组AQP4表达水平均较相应时间点的常温组降低(P<0.01)。结论:脑缺血再灌注后AQP4表达水平的变化趋势与脑含水量变化趋势在时间上一致,表明AQP4表达上调可能是缺血性脑水肿形成的分子机制之一。亚低温可减轻缺血性脑水肿,而通过抑制AQP4表达可能是亚低温减轻缺血性脑水肿的作用机制之一。

摘要：背景:定量药物脑电图可反映大脑皮质功能,全麻药物对脑皮质功能有肯定影响,由于麻醉深度与麻醉剂量有很好的相关性,若能找出与麻醉药剂量相关性好的定量药物脑电图的脑区与频段,则此频段可能成为反映麻醉深度的指标。目的:观察异丙酚对家兔定量药物脑电图α2频段的影响。设计:随机对照动物实验。单位:徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室。材料:实验在徐州医学院动物实验室进行。取健康成年白兔36只,随机均分为异丙酚2.5,5,10mg/kg3组,每组12只,其中6只用于观察定量药物脑电图各频段功率百分比变化,另外6只用于观察兔翻正反射消失的潜伏期和持续期。方法:每日14:00～17:00进行实验。3组兔分别静脉注射异丙酚2.5,5,10mg/kg,药物均在30s内匀速注完。①将清醒兔俯卧位固定在兔台上,采用功率谱分析法,分别记录3组兔给药前和给药后20,30,40,50,60,70,80,90,100,110s,2,5,10,15,20,30min的定量药物脑电图。每时间点采样时间为5s。②记录兔翻正反射消失的潜伏期和持续期。结果:36只兔全部进入结果分析。①兔静脉注射异丙酚后,翻正反射均在1min内消失。剂量越大,潜伏期越短,持续期越长(r=0.79,P0.05);5mg/kg时,各脑区α2频段的功率百分比在给药后升高(P<0.05);10mg/kg时,除左右顶区与2.5mg/kg组差异无显著性外,各脑区α2频段的功率百分比较给药前及前两个剂量组均下降(P<0.05),以上变化以额、颞区最为明显。结论:异丙酚对兔定量药物脑电图α2频段的功率百分比的影响呈双向型,提示α2频段可能成为反映异丙酚麻醉深度的指标。

摘要：目的构建表达靶向抑制PTTG基因的表达短发夹结构(shRNA)的RNA干扰载体。方法根据PTTG基因cDNA序列,设计针对PTTG基因的3组干扰序列,并设计1组阴性对照序列,克隆到真核表达载体pGenesil-1中,进行酶切鉴定和测序鉴定。将构建好的4组重组质粒分别命名为PTTG-1组,PTTG-2组,PTTG-3组、阴性对照NC(negativecontrol)组。利用RNA干扰技术,将以上shRNA分别转染细胞中,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTGmRNA表达水平、Western blot检测PTTG蛋白表达水平。结果构建的PTTG RNA干扰序列和阴性对照序列经基因测序证明序列正确。细胞在转染PTTG干扰载体后,提取细胞的总RNA,经RT-PCR电泳发现,在转染24 h后,PTTG-2、PTTG-3即显示出抑制作用,PTTGmRNA表达水平降低,PTTG-1组对目的基因的抑制作用不明显;在转染48 h后,各组均显示出抑制作用,但PTTG-3的抑制作用更明显;转染72 h后,PTTG-1组有微弱的抑制作用,PTTG-2及PTTG-3组仍有显示明显的抑制作用,但PTTG-3抑制作用较PTTG-2更强烈。Western blot检测不同时间PTTG蛋白的变化显示,在转染24 h后,PTTG-1、PTTG-2、PTTG-3组对目的基因的抑制作用均不明显;在转染48 h后,PTTG-1、PTTG-2、PTTG-3组均显示出抑制作用,但PTTG-3的抑制作用更明显;转染h小时后,PTTG-1组没有抑制作用,PTTG-2及PTTG-3组仍有显示明显的抑制作用,但PTTG-3抑制作用较PTTG-2更强烈。结论成功构建了靶向抑制PTTG基因的表达短发夹结构(shRNA)的RNA干扰载体,并筛选了干扰效果最强的序列,为进一步实验打下了基础。

摘要：目的构建有效抑制酪氨酸激酶受体B（TrkB）基因的RNA干扰慢病毒表达载体。方法根据大鼠TrkB基因的不同部位设计4对短发卡RNA（short hairpin RNA，shRNA）寡核苷酸片段，克隆到慢病毒干扎载体pXZRNAi1．0中，构建shRNA慢病毒表达载体pXZRNAi-shTrkB-1，2，3，4。获得较高滴度的慢病毒颗粒后感染大鼠神经干细胞，应用实时荧光PCR和Westernblot方法检测对TrkB的干扰效果。结果酶切鉴定和测序结果提示慢病毒载体的寡核苷酸链插入正确。包装浓缩慢病毒颗粒的滴度为8．6×105cfu／ml，对神经干细胞感染效率可达80％。与未感染组相比，转染pXZRNAi-shTrkB-3和4的神经干细胞中TrkBmRNA表达水平分别为（66．7±5．5）％和（76．8±4．9）％，TrkB蛋白的表达水平分别为（68．5±4．3）％和（78．2±5．1）％，均差异有统计学意义（p〈0．05）。结论成功构建可高效沉默TrkB基因的pXZRNAi-shTrkB慢病毒载体，为研究TrkB在神经干细胞中的作用提供了有力工具。

摘要：目的分析多巴反应性肌张力障碍(dopa responsive dystonia,DRD)患者的GCH1基因突变。方法我们抽取21例来自医院门诊及住院的散发型多巴反应性肌张力障碍患者的肘静脉血,并提取外周血全基因组DNA。Primer3设计GCH1基因6个外显子的引物,PCR扩增GCH1基因的外显子及周边部分内含子序列,并对PCR产物进行测序。测序结果与正常序列进行比对,发现碱基变异后进行序列分析以确定是否多态。结果成功扩增21位DRD患者GCH1基因的6个外显子。经过分析,GCH1基因外显子序列未发现基因突变。仅在4个患者的1号外显子发现1个单核苷酸多态(SNP)c.68C>T,该SNP没有产生氨基酸的改变。结论本地区多巴反应性肌张力障碍患者未发现GCH1基因突变,DRD患者可能存在其他致病基因。GCH1基因突变检测目前仍不能作为早期诊断的依据。

摘要：目的:构建有效的小鼠神经粘附分子(NCAM140)基因的RNA干扰(RNAi)质粒载体,为研究NCAM140参与的细胞信号通路转导、其生物学作用以及以NCAM140为靶点的基因治疗提供稳定转染的RNAi质粒。方法:使用基因序列软件设计、筛选符合公开文献筛选参数的4条靶序列以及1条阴性对照序列,由上海吉玛技术有限公司合成。与载体质粒pGPU6/GFP/Neo重组后,分别命名为pSi-nca1、pSi-nca2、pSi-nca3、pSi-nca4和pSi-control。转染大肠杆菌感受态细胞。选择阳性克隆进行DNA测序鉴定,Western blot方法进行干扰靶点的筛选。选取干扰效率最高的质粒转染MN9D细胞,普通光学显微镜分别计数同一视野细胞总数及GFP阳性细胞数,计算转染效率。结果:酶切和DNA测序结果证实shRNA正确插入pGPU6/GFP/Neo质粒;Western blot结果显示与空质粒对照组比较,pSi-nca4组细胞NCAM140表达明显下调,细胞转染效率为62%。结论:成功构建靶向小鼠NCAM140基因的RNAi质粒,为NCAM140参与的细胞信号通路的研究以及以NCAM140为靶点的基因治疗提供了稳定转染细胞的干扰质粒,为研究其生物学作用奠定了分子生物学基础。

摘要：目的:探讨高分辨力CT(HRCT)三维重建技术在翼腭窝区的应用价值,为临床该区疾病诊断及手术方案设计提供影像解剖学资料。方法:对10例健康志愿者行HRCT扫描后,利用多平面重组(MPR)和遮盖表面显示法(SSD)三维重建技术显示翼腭窝区骨性结构。结果:HRCT扫描及MPR重建图像清晰显示翼腭窝及其通道在横断面、冠状面及矢状面上的形态特征,SSD重建图像能满意显示翼腭窝区骨性结构的立体解剖及与周围结构的空间位置关系。结论:HRCT轴位扫描与MPR、SSD相结合可直观、立体、清晰地显示翼腭窝区结构。