摘要：目的:构建细胞分裂周期蛋白(Cdc42)的结构域突变质粒,即鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)结构域突变质粒。方法:根据NCBI中小鼠Cdc42全长cDNA序列找到结构域GEF,将GEF的氨基酸突变成丙氨酸,根据突变后的序列设计引物,PCR扩增得到目的片段588bp,限制性内切酶EcoRI和HindⅢ双酶切后插入到编码红色荧光蛋白(RFP)和his标签的真核表达载体PM-his-RFP中,构建PM-his-Cdc42(GEF)-RFP重组质粒,进行酶切电泳及DNA测序验证。用脂质体介导方法将重组质粒瞬时转染HT22细胞,通过荧光显微镜观察转染效率。结果:经酶切及测序结果显示突变后结构域插入的位置和序列正确,成功构建Cdc42蛋白GEF结构域突变质粒;荧光结果表明,重组质粒顺利转染HT22细胞。结论:成功构建的Cdc42结构域突变质粒为Cdc42蛋白的功能研究提供有效的操作工具。

摘要：秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是生物学中一种重要的模式生物,被广泛应用于生物学研究。因其具有高度保守的基因、生命周期短、繁殖快、易于培养及对吸入麻醉药较敏感等特点,逐渐成为在吸入麻醉药作用机制研究中得到应用的优良动物。文章构建了一套以秀丽隐杆线虫为实验对象的用于探究吸入麻醉药作用机制的实验内容和方案,可用于本科生及研究生基础性、综合性实验教学。笔者从秀丽隐杆线虫的生物学特性和基本操作方法入手,以行为学观察和生理学测试为主,也可扩展为包括吸入麻醉药物分子机制在内的其他深入性探究型的创新实验。此外,授课教师还可以此方案为基础,对实验内容酌情增减或联合使用,以满足不同层次学生的吸入麻醉药实验需求,丰富吸入麻醉药的实验课程体系。