摘要：背景:有研究发现,羌菖合剂可防治脑供血不足引起的脑损伤,并可改善血液流变学指标。目的:观察羌菖合剂对脑供血不足大鼠外周血小板的干预结果。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:解放军成都军区总医院中心实验室。材料:选用SD大白鼠60只,雌雄不拘,体质量150～170g。大鼠被随机分为3组:假手术组(n=8),对照组(n=18),羌菖合剂治疗组(n=34)。羌菖合剂:成分为羌活、石菖蒲,将药物等量分2次煎煮,每次30min微火煮沸,将两次滤液混合,过滤,浓缩至含生药1g/mL煎剂。方法:实验于2004-07/09在解放军成都军区总医院中心实验室完成。对照组和羌菖合剂治疗组:结扎大鼠右侧颈总动脉造成脑供血不足。假手术组:只分离右侧颈总动脉,未结扎。假手术组在造模同时灌胃等体积生理盐水3d;对照组在造模同时灌胃等体积生理盐水3和7d(n=10,8);羌菖合剂治疗组在造模同时灌胃羌菖合剂10g/(kg·d)连续3d(n=10),3.3,6.7,10.0g/(kg·d)连续7d(n=8,8,8)。采用Bakeman血细胞自动分析仪检测各组大鼠外周血血小板参数(血小板计数、平均血小板体积、血小板分布宽度、大血小板比率)。计量资料差异比较采用t检验。主要观察指标:羌菖合剂对脑供血不足大鼠外周血血小板参数的影响。结果:①术后3d,对照组血小板数与假手术组比较,差异不明显(P>0.05),而平均血小板体积、血小板分布宽度和大血小板比率明显高于假手术组(P<0.01);羌菖合剂10g/kg治疗后平均血小板体积、血小板分布宽度和大血小板比率明显低于对照组(P<0.01),而与假手术组相近。②术后7d,对照组平均血小板体积、血小板分布宽度和大血小板比率已恢复到接近假手术组,而大血小板比率则明显低于对照组术后3d(P<0.05),羌菖合剂3.3,6.7,10g/kg治疗后大血小板比率则明显低于对照组术后3d(P<0.01)。结论:大脑供血不足可引起实验大鼠外周血小板参数异常改变,应用羌菖合剂可改善此种改变。

摘要：目的制备一种具有黏附和成骨双重功能的仿生分子,为种子细胞在支架材料界面的高效黏附和靶向分化提供新途径。方法筛选纤维连接蛋白和钙黏附蛋白前体分子,通过分子模拟、基因克隆、蛋白表达纯化等技术设计并进行制备。通过离心促黏附实验和成骨诱导分化实验检测其体外活性。结果成功获得长1954bp的FNⅢ7-10/CAD11 EC1-2重组基因和由641个氨基酸组成的融合蛋白。体外功能研究发现聚苯乙烯表面的融合蛋白涂层可显著提高人骨髓间质干细胞的黏附和成骨分化能力。结论 rFN/CAD具有促黏附和促成骨的双重生物活性,可作为一种理想的仿生修饰分子用于生物界面的构建。

摘要：背景:雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中过氧化物酶增殖活化受体γ2-mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化有待研究。目的:观察骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇对其过氧化物酶增殖活化受体γ2mRNA及蛋白表达的影响。设计:对比观察实验。单位:成都军区总医院中心实验室,德阳市人民医院检验科,成都百奥生物技术有限公司。材料:选用1只雌性SD大鼠,3月龄,清洁级,体质量(200±20)g,由成都中医药大学实验动物研究中心提供(动物许可证号码11)。DMEM培养液购自Hyclone,1,25一双羟维生素D3、地塞米松和雌二醇购自Sigma公司,引物用Jellyfish软件设计,由大连宝生物技术有限公司合成。RT-PCR试剂盒和RNA提取试剂盒均由大连宝生物提供。兔抗山羊多抗(北京中山生物技术有限公司),山羊抗鼠PPARγ2抗体和Western Blotting增强化学发光试剂均购自Santa Cruz公司。方法:实验于2001-04/2002-07在成都军区总医院中心实验室和成都百奥生物技术有限公司完成。①无菌条件下分离大鼠骨髓基质细胞,1,25一双羟维生素D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,观察细胞生长情况。②用0,0.1,10和1000nmol/L不同浓度雌二醇对细胞分化过程进行干预3d。培养细胞用Tris-Triton X-100缓冲液加超声粉碎裂解细胞,在Beckman CX-7生化分析仪上测定碱性磷酸酶的活性,观察不同浓度雌二醇条件下细胞产生碱性磷酸酶的情况。③100g/L中性甲醛固定培养于24孔板的骨髓基质细胞,Weigert苏木素染液染色10min,自来水冲洗,5g/L盐酸乙醇分化,Van Gieson染色,体积分数为0.95乙醇分化脱水,二甲苯透明,显微镜下观察并照相,观察细胞胶原合成情况。④应用半定量RT-PCR及Northern blot、Western blot技术,观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中PPAR-γ2mRNA及蛋白表达的影响。主要观察指标:①骨髓基质细胞生长情况、细胞胶原合成情况。②不同浓度雌二醇条件下细胞产生碱性磷酸酶的情况。③不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中PPAR-γ2mRNA及蛋白表达的影响。结果:①骨髓基质细胞接种后4h开始贴壁,24～72h可见贴壁细胞明显增大且分裂增殖,细胞呈三角形,多角形或梭形。3d后首次换液,贴壁细胞体积增大,呈集落生长,10d左右融合成遍。多次传代的骨髓基质细胞呈有序的成纤维细胞样分布。②随着雌二醇浓度的增加,胞浆染色越淡,由鲜红、淡红到黄色。胞浆呈红色说明有胶原合成,红色越深,表明胶原越多。③不同浓度雌二醇条件下细胞均能产生碱性磷酸酶,其活性随雌二醇浓度增加而降低,雌二醇浓度从0nmol/L增加到1000nmol/L时,碱性磷酸酶从(710.1±41.7)nkat/g降至(60.0±11.7)nkat/g(t=29.0,P<0.01)。④雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时,PPAR-γ2mRNA的表达量均明显高于雌二醇0mol/L组(t=6.1,7.2,11.5,P<0.01),Northern blot结果显示雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时PPAR-γ2mRNA表达量分别为(4.0±0.4)%,(1.7±0.2)%,(2.8±0.2)%,明显高于雌二醇0mol/L组[(1.5±0.1)%,t=5.4,105.0,14.2,P<0.01]。⑤Western Blot检测结果显示雌二醇能明显增加骨髓基质细胞PPAR-γ2蛋白的表达。雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时,PPAR-γ2蛋白的表达量分别为(2.2±0.2)%,(2.6±0.2)%,(4.1±0.2)%,明显高于雌二醇0mol/L组[(1.2±0.10)%,t=6.6,8.5,13.2,P<0.01]。结论:雌二醇能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞碱性磷酸酶的表达,同时促进骨髓基质细胞内过氧化物酶增殖活化受体γ2mRNA和蛋白的表达。

摘要：目的评价改良多重PCR筛查男性非梗阻性无精子症和严重少精子症患者Y染色体AZF缺失类型的价值。方法在Y染色体STS常规引物序列的5′端连接一段非人类同源序列的寡核苷酸链，合成嵌合引物对。根据非人类同源序列的寡核苷酸链设计通用引物对，与嵌合引物对在同一反应体系中对人类基因组DNA进行多重PCR扩增，并用以评价筛查262例非梗阻性无精子症和严重少精子症患者中AZF a、b、c区域的微缺失状况。结果用改良多重PCR筛查262例非梗阻性无精子症和严重少精子症患者，发现AZF微缺失33例（12．60％），其中AZFC缺失27例，AZF b＋c缺失6例，与EMQN推荐方法检测的结果相比，缺失阳性符合率为100％（33／33），且未出现假阳性。改良多重PCR与EMQN推荐方法检测Y染色体多个STS的电泳结果显示，2种方法得到的sY84、sY86、sY127、sY134、sY254、sY255、SRY位点扩增产物的均一性好，扩增产物条带清晰。结论改良多重PCR能较好地筛查出男性非梗阻性无精子症和严重少精子症患者Y染色体AZF缺失类型。

摘要：目的:为了动态监测运动情况下的人体生命基本体征和周边环境信息,设计研发一套可穿戴智能装置。方法:采用系统集成方式,整合多个传感器模块,完成整机设计。以微控制器为核心部件,编写嵌入式应用程序实现外围传感器组的控制、数据获取。采用模拟串口技术,保证多个传感器协同工作。通过蓝牙实现手持机与主控模块之间的无线数据传输。结果:所设计的监测装置功耗低、体积小、质量轻,监测数据准确,满足穿戴式移动监测设备的设计要求。结论:该穿戴装置能够为使用人员提供实时监测数据,对于保证人员生命安全和健康具有积极作用。

摘要：目的探讨体外合成的小于扰RNA(siRNA)对人树突状细胞(DC)共刺激分子B7基因表达的影响。方法设计并合成了3条siPRNA(siRNA1,siRNA2和siRNAc),在脂质体的介导下转染树突状细胞,于转染后24、48、72h收集细胞,用半定量RT-PCR检测B7-1和B7-2mRNA的变化,用蛋白印迹检测B7-1、B7-2蛋白的表达。结果:转染24、48、72h后,DC B7-1 mRNA均有明显减少(P0.05)。WestemBlot结果显示转染48、72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为(67.3±4.80)%和(80.9±5.23)%;siRNA2后对B7-2蛋白表达的抑制率为(60.7±4.15)%和(74.7±4.63)%。结论siRNA可特异抑制树突细胞B7基因的转录和表达,为进一步研究siRNA诱导移植免疫耐受提供了理论和实验基础,为诱导器官移植免疫耐受提供了新思路和途径。

摘要：目的探讨体外合成的小干扰RNA(siRNA)对人树突状细胞(DC)共刺激分子CD80和CD86基因表达的影响。方法设计并合成了3条siRNA(siRNA1、siRNA2和siRNAc),在脂质体的介导下转染树突状细胞,于转染后24、48、72h收集细胞,用半定量RT-PCR检测CD80和CD86 mRNA的变化,用蛋白印迹检测CD80、CD86蛋白的表达。结果转染24、48、72h后,DC CD80 mRNA均有明显减少(P0.05)。Western Blot结果显示转染48、72h后,siRNA1对CD80蛋白表达的抑制率为(67.3±4.80)%和(80.9±5.23)%;siRNA2后对CD86蛋白表达的抑制率为(60.7±4.15)%和(74.7±4.63)%。结论 siRNA可特异抑制树突细胞B7基因的转录和表达,为进一步研究siRNA诱导移植免疫耐受提供了理论和实验基础,为诱导器官移植免疫耐受提供了新思路和途径。

摘要：目的探讨体外合成的B7特异性小干扰RNA(siRNA)对树突状细胞(DC)功能的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达,用ELISPOT检测DC与淋巴细胞共培养后T细胞分泌IFN-γ,用MTT法检测混合淋巴细胞增殖反应和CTL特异性杀伤率。结果Western Blot结果显示转染72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为(80.9±5.23)%;siR-NA2对B7-2蛋白表达的抑制率为(74.7±4.63)%。经转染B7-1、B7-2分子特异性siRNA的DC激活后,T淋巴细胞分泌IFN-γ分别为(84.6±23.1)103U/L和(76.7±19.7)10.3U/L明显低于对照组(204.5±46.2)103U/L;各组DC刺激淋巴细胞增殖指数(PI)分别为1.73±0.32和1.53±0.25,也低于对照组4.23±0.74。CTL杀伤实验结果表明:对照组的特异性杀伤率为(76.4±7.6)%,siRNA1和siRNA2组的特异性杀伤率分别为(14.4±3.6)%和(18.6±4.7)%,低于对照组。结论B7特异性siRNA可明显抑制树突细胞B7基因的表达,并可降低DC激活T淋巴细胞增殖和CTL的细胞毒性,为进一步研究siRNA诱导免疫耐受和治疗自身免疫性疾病提供了新思路和方法。

摘要：针对可穿戴设备监测数据的接收、显示问题,设计了一个智能移动终端应用程序,提出程序整体技术架构和主要功能。程序通过低功耗蓝牙技术,实时接收、显示可穿戴设备采集的人体生命体征、环境信息等;基于北斗卫星导航系统,实现携行人员地理定位信息和关键数据传输。应用结果表明,该应用程序能够和智能硬件互联互通,为用户提供动态可视化实时监测数据。

摘要：目的探讨RNA干扰技术阻断B7/CD28共刺激信号对小鼠异体皮肤移植排斥反应的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达。在小鼠异体皮肤移植前7d,经静脉将转染B7特异性siRNA的DC输入小鼠体内(DC转染组),同时设立同种异体移植对照组、同系移植对照组、环孢素A(CsA)治疗组(术后每日皮下注射CsA5 mg/kg)和未转染DC组(移植前输注未转染DC),观察各组移植皮瓣的存活时间和排斥反应情况,并用MTT法检测混合淋巴细胞增殖反应,术后1个月观察迟发性超敏反应情况。结果Western Blot结果显示转染72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为(77.2±6.26)%;siRNA2对B7-2蛋白表达的抑制率为(73.3±5.42)%。与同种异体移植对照组和未转染DC组比较,DC转染组移植皮瓣成活时间明显延长(P<0.01),组织排斥反应程度较轻,混合淋巴细胞反应和DTH反应显著降低(P<0.01)。结论B7特异性siRNA可明显抑制树突细胞B7基因的表达,以阻断B7/CD28共刺激通路,抑制小鼠皮肤移植排斥反应,为进一步研究siRNA诱导免疫耐受提供了新方法。