摘要：化疗是卵巢癌治疗的一种有效手段，但患者的个体差异和肿瘤细胞耐药性突变使不同患者化疗效果差异很大。肿瘤细胞体外药敏筛选实验，对避免肿瘤耐药具有重要的指导意义。但目前常用的MTT法药敏实验，许多单位往往采用单一药物浓度，且各家所用的药物浓度差别很大，甚至相差几个数量级。我们以卵巢癌细胞株为研究对象，设计了不同药物的4个浓度梯度和不同药物配伍方案，以使结果更具临床参考性，现报告如下。

摘要：目的构建小干扰唾液酸黏附素（sialic acid—binding immunoglobulin—like lectin1，Siglec-1）的慢病毒载体，并体外筛选出具有干扰效果的病毒载体。方法利用软件设计3条Siglec-1siRNA片段，并克隆到慢病毒pGCSIL—GFP质粒载体，再与pHelper1．0载体和pHelper2．0载体共转染293T细胞，培养48h后，收集并浓缩富含慢病毒颗粒的细胞上清液。逐孔稀释法测定慢病毒滴度并转导原代培养的骨髓巨噬细胞（BMM），流式细胞术和实时荧光定量PCR筛选具有干扰效果的病毒载体。结果成功构建3个vshRNA质粒载体和一个阴性对照质粒载体，并经测序验证序列正确。包装的慢病毒滴度介于1×10^8-1×10^9TU／ml之间，适合体外转导及体内试验。体外转导BMM筛选出Lv-1能靶向抑制Siglec-1表达。结论成功构建并筛选出具有体外干扰效果的小干扰Siglec-1慢病毒载体，为体内应用该病毒载体进行基因敲除实验奠定了基础。

摘要：【目的】建立快速获取55型腺病毒的全长基因组序列的方法。【方法】根据55型腺病毒的基因组特点,设计覆盖55型腺病毒基因组序列的12对引物,分别以55型腺病毒DNA为模板,扩增得到12个PCR产物,通过对12个PCR产物测序及序列拼接,获得55型腺病毒的全长基因组序列。【结果】从本院急性上呼吸道感染者咽拭子标本中分离得到一株55型腺病毒毒株SF04/SC/2016,以其DNA为模板扩增成功获得12个PCR产物,对其进行测序,并对12段序列进行拼接得到55型腺病毒的全长基因组序列,与已报到的各型腺病毒序列进行比对,采用邻位相连法构建系统发育进化树,所得序列与55型腺病毒处于同一分支,进一步确认该病原体为55型腺病毒。【结论】研究公布的序列和方法,能够实现更方便对腺病毒的快速测序,为揭示55型腺病毒的进化特点及制订疾病防控策略提供了有效手段。

摘要：目的:检测筑路工人红系参数变化,旨在提醒建筑工业在设计工程时,应注重劳动环境的改善,减轻劳动负荷等下功夫。方法:两组受检者清晨抽空腹静脉血1ml,用全自动血细胞分析仪检测RBC、Hb、HCT、MCV、MCH、MO-HC。结果:男工红系参数变化较大,如RBC代偿性增多,Hb增高,MCV增大,则造成HCT增高,而MCH和MCHC降低,而导致RBC形态改变;而女工红系改变不明显。结论:在工程设计和施工时应注重改善施工条件,减轻劳动负荷,预防职业有关的疾病,提高筑路工人的健康水平。

摘要：目的 探讨利用微机监测乙肝表面抗原室内质量控制的准确程度。方法 利用已设计好的微机软件对乙肝表面抗原做分析前、分析中、分析后全程质量监测。结果 分析前标本质量控制,45份标本溶血前后s/co值变化有显著性差异P<0.01。室内温度监测,以19～25℃温度为最佳,7℃下所测偏高。分析中质量控制:年初和年尾与卫生部临检中心质控物进行对比观察,结果显示X在0.055～0.065之间,SD在0.0025～0.0035,CV％=4.65～5.3％,与工生部质控物无显著性差异。结论 通过微机监测乙肝表面抗原,坚持室内质控,绘制质控图,做好分析前、中、后质量控制,可大大减少人为的误差,给临床诊断、治疗、预防提供可靠依据。

摘要：循证医学(evidence-based medicine,EBM)是近10年来现代医学实践中迅速发展起来的一个新兴学科,带动了医学领域各个分支学科的发展.检验医学在其影响下,也将跨人一个新的境界-循证检验医学(evidence-based laboratory medicine,EBLM).'以当前最好的证据为基础'的原则,用临床流行病学的方法学规范检验医学的研究设计和文献评价;用当前最好的检验技术和质量控制体系对检验结果进行严格的质量控制和评价,其任务是向临床医师提供反映患者真实情况的证据.因此,循证医学对于现代检验医学的发展和临床工作的质量有着极其重要的作用.但是,目前检验医学人员对循证医学的认识如何,对于开展循证检验医学研究与实践的能力尚不得而知.为了解检验医学人员对循证医学的认知情况及应用能力,我们进行了本次调查,调查结果如下:

摘要：背景:雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中过氧化物酶增殖活化受体γ2-mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化有待研究。目的:观察骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇对其过氧化物酶增殖活化受体γ2mRNA及蛋白表达的影响。设计:对比观察实验。单位:成都军区总医院中心实验室,德阳市人民医院检验科,成都百奥生物技术有限公司。材料:选用1只雌性SD大鼠,3月龄,清洁级,体质量(200±20)g,由成都中医药大学实验动物研究中心提供(动物许可证号码11)。DMEM培养液购自Hyclone,1,25一双羟维生素D3、地塞米松和雌二醇购自Sigma公司,引物用Jellyfish软件设计,由大连宝生物技术有限公司合成。RT-PCR试剂盒和RNA提取试剂盒均由大连宝生物提供。兔抗山羊多抗(北京中山生物技术有限公司),山羊抗鼠PPARγ2抗体和Western Blotting增强化学发光试剂均购自Santa Cruz公司。方法:实验于2001-04/2002-07在成都军区总医院中心实验室和成都百奥生物技术有限公司完成。①无菌条件下分离大鼠骨髓基质细胞,1,25一双羟维生素D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,观察细胞生长情况。②用0,0.1,10和1000nmol/L不同浓度雌二醇对细胞分化过程进行干预3d。培养细胞用Tris-Triton X-100缓冲液加超声粉碎裂解细胞,在Beckman CX-7生化分析仪上测定碱性磷酸酶的活性,观察不同浓度雌二醇条件下细胞产生碱性磷酸酶的情况。③100g/L中性甲醛固定培养于24孔板的骨髓基质细胞,Weigert苏木素染液染色10min,自来水冲洗,5g/L盐酸乙醇分化,Van Gieson染色,体积分数为0.95乙醇分化脱水,二甲苯透明,显微镜下观察并照相,观察细胞胶原合成情况。④应用半定量RT-PCR及Northern blot、Western blot技术,观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中PPAR-γ2mRNA及蛋白表达的影响。主要观察指标:①骨髓基质细胞生长情况、细胞胶原合成情况。②不同浓度雌二醇条件下细胞产生碱性磷酸酶的情况。③不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中PPAR-γ2mRNA及蛋白表达的影响。结果:①骨髓基质细胞接种后4h开始贴壁,24～72h可见贴壁细胞明显增大且分裂增殖,细胞呈三角形,多角形或梭形。3d后首次换液,贴壁细胞体积增大,呈集落生长,10d左右融合成遍。多次传代的骨髓基质细胞呈有序的成纤维细胞样分布。②随着雌二醇浓度的增加,胞浆染色越淡,由鲜红、淡红到黄色。胞浆呈红色说明有胶原合成,红色越深,表明胶原越多。③不同浓度雌二醇条件下细胞均能产生碱性磷酸酶,其活性随雌二醇浓度增加而降低,雌二醇浓度从0nmol/L增加到1000nmol/L时,碱性磷酸酶从(710.1±41.7)nkat/g降至(60.0±11.7)nkat/g(t=29.0,P<0.01)。④雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时,PPAR-γ2mRNA的表达量均明显高于雌二醇0mol/L组(t=6.1,7.2,11.5,P<0.01),Northern blot结果显示雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时PPAR-γ2mRNA表达量分别为(4.0±0.4)%,(1.7±0.2)%,(2.8±0.2)%,明显高于雌二醇0mol/L组[(1.5±0.1)%,t=5.4,105.0,14.2,P<0.01]。⑤Western Blot检测结果显示雌二醇能明显增加骨髓基质细胞PPAR-γ2蛋白的表达。雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时,PPAR-γ2蛋白的表达量分别为(2.2±0.2)%,(2.6±0.2)%,(4.1±0.2)%,明显高于雌二醇0mol/L组[(1.2±0.10)%,t=6.6,8.5,13.2,P<0.01]。结论:雌二醇能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞碱性磷酸酶的表达,同时促进骨髓基质细胞内过氧化物酶增殖活化受体γ2mRNA和蛋白的表达。

摘要：背景绝经后骨质疏松的病理生理机制尚未完全阐明,研究表明骨丢失与雌激素缺乏相关,后者可导致多种细胞因子生成增加,继而引起成骨细胞和破骨细胞生成增多,骨吸收增强。雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1和PPAR-γ2mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化尚不清楚。目的研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇对其核结合因子α1(Cbfα1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2(PPAR-γ2)mRNA表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。设计非随机对照研究。地点和对象所有实验均在成都军区总医院检验科和成都百奥生物技术有限公司完成,分离骨髓基质细胞所需大鼠由成都中医药大学实验动物研究中心提供。干预1,25(OH)2D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,用不同浓度[(0～1)×10-6mol/L]雌二醇对细胞分化过程进行干预。主要观察指标应用半定量RT-PCR及Northernblot技术,观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1及PPAR-γ2mRNA表达的影响。结果雌二醇能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1mRNA的表达,雌二醇浓度为[(0～1)×10-6mol/L]时,Cbfα1mRNA的表达量从(25.0±3.3)%降至(19.8±2.2)%(t=2.62,P<0.05),(14.5±1.3)%(t=5.92,P<0.01)和(6.5±1.9)%(t=9.72,P<0.01);

摘要：目的探讨体外合成的小于扰RNA(siRNA)对人树突状细胞(DC)共刺激分子B7基因表达的影响。方法设计并合成了3条siPRNA(siRNA1,siRNA2和siRNAc),在脂质体的介导下转染树突状细胞,于转染后24、48、72h收集细胞,用半定量RT-PCR检测B7-1和B7-2mRNA的变化,用蛋白印迹检测B7-1、B7-2蛋白的表达。结果:转染24、48、72h后,DC B7-1 mRNA均有明显减少(P0.05)。WestemBlot结果显示转染48、72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为(67.3±4.80)%和(80.9±5.23)%;siRNA2后对B7-2蛋白表达的抑制率为(60.7±4.15)%和(74.7±4.63)%。结论siRNA可特异抑制树突细胞B7基因的转录和表达,为进一步研究siRNA诱导移植免疫耐受提供了理论和实验基础,为诱导器官移植免疫耐受提供了新思路和途径。

摘要：目的探讨体外合成的小干扰RNA(siRNA)对人树突状细胞(DC)共刺激分子CD80和CD86基因表达的影响。方法设计并合成了3条siRNA(siRNA1、siRNA2和siRNAc),在脂质体的介导下转染树突状细胞,于转染后24、48、72h收集细胞,用半定量RT-PCR检测CD80和CD86 mRNA的变化,用蛋白印迹检测CD80、CD86蛋白的表达。结果转染24、48、72h后,DC CD80 mRNA均有明显减少(P0.05)。Western Blot结果显示转染48、72h后,siRNA1对CD80蛋白表达的抑制率为(67.3±4.80)%和(80.9±5.23)%;siRNA2后对CD86蛋白表达的抑制率为(60.7±4.15)%和(74.7±4.63)%。结论 siRNA可特异抑制树突细胞B7基因的转录和表达,为进一步研究siRNA诱导移植免疫耐受提供了理论和实验基础,为诱导器官移植免疫耐受提供了新思路和途径。