摘要：目的 探究稳定敲降BCL11A对神经发育关键因子的表达影响。方法 设计并筛选靶向人源BCL11A的shRNAs,通过慢病毒构建能稳定敲降BCL11A的人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)。首先,利用逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹技术实验体外验证BCL11A的敲降效果,RT-qPCR实验探索BCL11A敲降后皮质发育关键转录因子的表达变化,进而利用转录组测序分析BCL11A敲降后差异基因的富集情况,最终通过染色质免疫共沉淀(ChIP)实验验证差异基因启动子的转录活性标志pPolⅡ以及染色质活性修饰H3K9ac的变化。结果 BCL11A敲降后神经元特异转录因子GRM7、BCL11B、CTCF、ADCYAP1R1、NeuroD1/2、PAX6、SATB1/2的表达降低;皮质神经元关键转录因子GRIN1、TCF12、MEF2D的表达升高。转录活性标志pPolⅡ以及染色质活性修饰H3K9ac在GRM7启动子的富集度降低,在GRIN1启动子的富集呈现升高趋势。结论 转录因子BCL11A表达缺失可影响智能障碍相关转录因子的转录活性与表达变化。

摘要：目的构建斑马鱼腺苷甲硫氨酸脱羧酶(amd 1)突变体,并运用聚合酶链式反应(PCR)技术对突变的碱基位点设计特异性引物,以建立快速鉴定短片段缺失的方法。方法利用CRISPR/Cas9系统构建斑马鱼amd1突变体;运用整胚原位杂交技术分析AMD1在野生型(WT)和amd1纯合子斑马鱼胚胎中的表达;根据突变体的突变位点设计鉴定引物,用PCR和琼脂糖凝胶电泳检测,并使用二代测序技术验证。结果斑马鱼amd1突变体构建成功;受精后24 h,在WT斑马鱼胚胎中AMD1主要在头部、眼睛、体节及内胚层区域表达,而在amd1纯合子斑马鱼胚胎中AMD1的表达明显降低。运用amd 1-screen-(3)-5′引物进行PCR时,在WT斑马鱼胚胎中可获正常条带;而在amd 1纯合子斑马鱼胚胎中未能获得相应条带。结论斑马鱼amd1突变体被成功构建;amd 1-screen-(3)-5′被确定为最佳鉴定引物。

摘要：目的探讨真核延伸因子-1A2(eEF1A2)基因对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法设计eEF1A2基因的siRNA干扰片段分别转染宫颈癌SiHa细胞、HeLa细胞和C33A细胞,实验组包括:转染Si-eEF1A2-1和SieEF1A2-2的细胞组,未转染的细胞和非干扰转染细胞(NC组)为对照组。采用Western blot方法检测eEF1A2和E-cadherin在宫颈癌细胞中蛋白质表达水平,通过划痕实验和基质胶包被transwell实验分析细胞迁移能力,通过CCK-8实验和平板克隆实验检测细胞增殖。结果宫颈癌细胞中,siRNA干扰的细胞与对照组相比eEF1A2蛋白质表达水平降低,E-cadherin蛋白质表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);划痕实验si-eEF1A2转染的细胞与对照组相比较,愈合间隙宽,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell迁移实验,RNA干扰的细胞与对照组相比,穿过小室基底膜的细胞明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);si-eEF1A2干扰的细胞CCK8增殖实验、细胞克隆形成实验中可以抑制宫颈癌细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。结论降低宫颈癌SiHa、HeLa和C33A细胞eEF1A2基因表达水平,可以抑制癌细胞的侵袭和迁移。

摘要：目的探究转录因子BCL11A(BCL11A/Ctip1)表达降低对胚胎神经元特异性转录因子表达的影响。方法从基因组织表达项目(GTEx)、DNA元素百科全书(ENCODE)数据库分析获取BCL11A在人类各组织中的表达情况基础上,以成年小鼠各组织器官及不同胚胎发育阶段的胎脑为研究对象,通过qPCR、免疫印迹技术、免疫荧光技术检测BCL11A的表达与分布。设计靶向人源BCL11A的siRNAs并将之转染至人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,利用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术检测皮层神经元特异转录因子Sox6、Tbr2、NeuroD2的启动子染色质活性变化。结果BCL11A在成年小鼠的大脑皮层、脾脏、肺中表达,在胚胎13.5 d小鼠胎脑皮层表达尤为明显。BCL11A siRNAs导致神经元关键因子Sox6、Tbr2、NeuroD2转录水平降低及启动子染色质活性明显改变,而胶质细胞关键因子GFAP及BLBP启动子染色质活性无明显变化。结论转录因子BCL11A可在胚胎发育关键时期通过调控神经元关键因子的表达进而影响皮层发育。