摘要：目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,***)致细胞空泡毒素抗原(Vacuolating cytotoxin antigen A,vacA)毒性片段与霍乱毒素(Cholerae toxin,Ctx)B亚单位(ctxB)基因的原核表达载体,为进一步表达VCTB重组蛋白,制备防治***感染的口服疫苗奠定基础。方法:通过比较国内***代表株的vacA基因毒性亚单位,找出高度同源性片段,按基因文库中提供的vacA基因和ctxB基因序列设计引物。以***基因组DNA为模板,PCR扩增vacA毒性片段基因,克隆至质粒pQE30中,获得重组质粒pQE30-vacA。以pET32(α)+-ctxB质粒为模板PCR扩增ctxB目的基因。再将纯化的ctxB基因片段插入pQE30-vacA中,构建含双基因的表达质粒pQE-vctB,构建的表达质粒pQE-vctB转化大肠杆菌Top10,培养后,提取纯化重组质粒pQE-vctB,内切酶双酶切鉴定。结果:扩增的vacA DNA片段约为723bp,ctxB基因的DNA片段约为372bp,与预计长度相符合。构建的表达质粒pQE-vctB酶切鉴定,与插入pQE30的目的基因片段相符。测序结果vctB融合基因由1092bp组成,编码364个氨基酸残基的多肽,与基因文库相符。结论:含vacA和ctxB融合基因的原核表达载体构建成功,为进一步表达VCTB重组蛋白奠定了基础。

摘要：目的查找9种细菌和1种真菌的水通道蛋白基因,为进一步探讨细菌水通道蛋白的生理功能奠定基础。方法根据细菌水通道蛋白的保守氨基酸序列,设计合成简并核苷酸引物。提取目标菌DNA,简并PCR扩增细菌水通道蛋白基因。扩增产物回收纯化,DNA测序,推导其氨基酸序列并BLAST分析。结果10种目标菌中,大肠埃希菌和痢疾志贺菌扩增出所需的DNA片段。电泳分析其分子质量约为400 bp和370 bp,其序列与细菌水通道蛋白-甘油易化蛋白基因高度同源,相似性分别为97%和94%;推导氨基酸序列与细菌水通道蛋白氨基酸高度同源,相似性为83%和87%。结论利用简并PCR在大肠埃希菌中扩增出甘油易化蛋白基因,并发现痢疾志贺菌中存在甘油易化蛋白基因。