摘要：目的:基于多酶恒温快速扩增(multienzyme isothermal rapid amplification,MIRA)与封闭式侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)联用技术,建立肉制品真实性快速检测方法,解决实验室方法不适于基层与现场快检需求的问题。方法:通过GenBank筛选猪、牛、羊、鸡、鸭线粒体基因的特异序列,使用DNAStar Megalign软件比对种内保守、种间特异的靶片段,依据MIRA引物探针设计原则设计靶基因引物探针组,通过阳性对照、阴性对照、空白对照等方式系统筛选引物探针,确定猪、牛、羊、鸡、鸭的专属性引物探针,并采用反应体系、反应温度、反应时间筛选,优化完善特异性检测方法。对方法进行系统的方法学考察,包括DNA提取、灵敏度、检出限、假阳性与假阴性考察等,验证方法的有效性。结果:使用建立的方法与实时荧光聚合酶链式反应检测进行比对分析,方法的平均假阳性率为3.49%、假阴性率为3.54%,符合现场快检方法的要求。结论:本研究建立了牛、羊、猪、鸡、鸭5种常见肉类的MIRA-LFD技术,并证实了其有效性和可行性,实现了肉制品真实性的现场快检。

摘要：目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,用于湖北麦冬的分子鉴别。方法:在ITS 2区设计湖北麦冬、短葶山麦冬和麦冬的通用引物,经PCR反应后,对PCR产物进行限制性内切酶(Nae I)的酶切反应,酶切条件为37℃孵育60 min。结果:设计的通用引物对湖北麦冬和麦冬均能扩增出377 bp的单一条带,经酶切反应后,湖北麦冬被切为231 bp和146 bp 2条条带,麦冬仍为377 bp的单一条带,以此实现湖北麦冬的分子鉴别。结论:建立的PCR-RFLP方法能够实现湖北麦冬的准确鉴别,且该方法操作简单,特异性强,稳定性好,检测结果客观易判读。

摘要：目的:建立中药材麦冬的PCR检测方法。方法:对麦冬及其混伪品的ITS序列进行比对分析,在ITS1区设计了麦冬的特异性引物,并通过对PCR反应条件的优化,建立麦冬的PCR鉴别方法。结果:建立了麦冬真伪鉴别的PCR检测方法,并利用该方法对收集的样品进行检测,实现了麦冬与混伪品的准确鉴别。结论:该方法操作简单、特异性强、重复性好,检测结果客观易判读。

摘要：蛋白质是粮食作物最重要的营养组成之一,是人类及动物等生命活动最重要的物质基础。蛋白质含量是粮食作物品质好坏的首要评价指标。传统方法在检测粮食中蛋白质含量时存在消解时间长、检测操作繁琐、检测结果波动性大等问题,难以应用于粮食交易等需要快速检测蛋白质含量的场景。为了能够快速准确测定粮食的蛋白质含量建立了微波消解-比色快速检测法。样品处理环节采用多段微波消解方案,检测环节采用新设计的全自动蛋白质速测仪进行检测。自动化程度高可节约人力避免危险,并且大幅度缩短实验时间,由国标方法的6 h缩短为1 h。对快速法检测值与国标法检测值进行了T检验,t(d)=0.503<t(0.05,30)=2.042,说明快速法和国标法无显著性差异。