摘要：Toll样受体5 (TLR5)是Toll-like受体家族中的重要成员,在革兰阴性菌引起的炎症反应中发挥着重要的调控作用。通过CRISPR/Cas9基因敲除技术对猪肺泡巨噬细胞(PAMS)的TLR5基因进行敲除,然后经菌落计数,检测TLR5基因敲除后对大肠埃希菌F18ab和F18ac以及沙门菌黏附能力的影响。结果表明:设计的2条sgRNAs成功插入CRISPR/Cas9载体中,序列正确,转染猪肺泡巨噬细胞后均能稳定表达,且PCR测序峰图出现套峰,表明敲除载体具有切割活性。利用有限稀释法,最终获得1株缺失15个碱基的单克隆细胞系TLR5-sg1。对TLR5敲除细胞进行qPCR和Western blot验证,结果显示TLR5基因的转录水平极显著下调,其蛋白质水平也明显降低。细菌黏附试验结果显示,TLR5敲除细胞中黏附的大肠埃希菌F18ab、F18ac和沙门菌(ATCC13312)的数量均极显著低于对照组。这一研究成功建立了猪TLR5基因敲除的3D4/21细胞系,且TLR5基因的敲除会降低大肠埃希菌和沙门菌对3D4/21细胞的黏附能力,为进一步探究TLR5基因的生物学功能建立了细胞模型,为深入探讨TLR5基因在炎症反应中的免疫调控作用提供了试验素材。

摘要：试验旨在研究苜蓿皂苷对山羊瘤胃原虫体外发酵功能的影响。选择4只体况良好、安装永久性瘤胃瘘管的徐淮白山羊,晨饲后3 h采集瘤胃液,分离出原虫,采用体外批次培养设计进行体外发酵。根据苜蓿皂苷的添加量分为4个处理组:对照组不添加(0),3个试验组分别添加1%、2%及3%的苜蓿皂苷,每组3个重复,体外厌氧培养24 h后,分别测定pH值、氨态氮(NH3-N)浓度、微生物蛋白(MCP)浓度及挥发性脂肪酸(VFA)含量。结果表明:添加1%～3%的苜蓿皂苷对瘤胃原虫培养液的pH值、NH3-N浓度均无显著影响(P>0.05),但降低了乙酸、丙酸、丁酸和TVFA浓度,且乙酸/丙酸有升高趋势(P>0.05);此外,2%和3%的苜蓿皂苷极显著降低了培养液中MCP浓度,较对照组分别降低24.5%和17.1%。提示苜蓿皂苷对瘤胃原虫有一定的抑制作用,且对原虫发酵产生丙酸的抑制效应大于乙酸。

摘要：实验旨在利用精原干细胞介导的方法体内转染融合基因EGFP-MMx,制备抗病毒性疾病转基因鸡。采用脂质体包埋法,睾丸内注射EGFP-MMx融合基因,术后采集30、40、50、60、70、80 d睾丸组织进行冰冻切片、基因组PC R、点杂交实验,转染后60 d公鸡精液人工授精于正常母鸡,对后代血液采用PC R检测技术、R T-PC R和W estern blot方法检测外源基因EGFP-MMx的整合表达情况。结果表明:睾丸基因组点杂交阳性率为72.2%。通过PC R、R T-PCR检测方法,在实验公鸡精液和F1代血液中检测到目的基因,精液阳性率为25%,F1代阳性率为10.53%,Western blot检测F1代阳性率为7.89%。结果证明外源基因通过睾丸注射法可整合到基因组上,为培育抗病转基因鸡提供参考依据。

摘要：试验旨在探讨睾酮对鸡胚胎干细胞(ESCs)向雄性生殖细胞分化过程中的诱导作用效果。首先对睾酮的适宜诱导浓度进行筛选,再联合支持细胞和维甲酸(RA)对传至2代的ESCs进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。结果表明:单独使用睾酮诱导,未出现精原干细胞(SSCs)样细胞;睾酮与支持细胞联合诱导时,在第6天有少许类胚体出现,至第12天,有少量SSCs样细胞;睾酮联合支持细胞和RA诱导过程中,诱导第2天出现类胚体,诱导第12天后出现类SSCs样细胞。实时荧光定量PCR结果显示,睾酮+支持细胞组中,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下调趋势,Dazl、integrinβ1、Stra8表达量持续上调;睾酮+支持细胞+RA共同诱导组中,各标记基因与ESCs向生殖细胞分化过程中各基因表达的趋势一致,并且Dazl的表达量明显高于对照组。睾酮单独诱导不能使ESCs向雄性生殖细胞分化,但有促进支持细胞和RA诱导效果的作用,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。

摘要：研究建立了用高效液相色谱荧光法检测鸡肉中甲砜霉素残留的方法。鸡肉经丙酮、二氯甲烷提取,饱和正己烷脱脂,氮吹仪吹干浓缩后,以乙腈？磷酸二氢钠溶液（0.01 mol/L,含0.005 mol/L十二烷基硫酸钠和0.1%三乙胺）（32∶68,V/V）为流动相,流速为1.0 mL/min,荧光检测激发波长为225 nm,发射波长为290 nm。甲砜霉素在0.01~1.75 mg/L浓度范围内,本方法线性关系良好,相关系数为0.9991。当甲砜霉素添加水平为5~500μg/kg时,该方法平均回收率为79.49%~89.71%,相对标准偏差为4.96%~9.61%;日内相对标准偏差为5.68%~7.47%;日间相对标准偏差为8.89%~11.32%。甲砜霉素检测限为1.5μg/kg（S/N=3）,定量限5μg/kg（S/N=10）。所建立的方法简便、快速、灵敏度高,适用于鸡肉中甲砜霉素残留的高灵敏度检测。

摘要：研究旨在分析家鸭IFIT-5基因外显子2的多态性,以期为进一步研究家鸭IFIT-5基因与疾病抗性的相关性提供理论依据。根据GenBank上收录的IFIT-5基因序列设计特异性引物,采用PCR-SSCP方法对苏牧麻鸭、金定鸭、樱桃谷鸭与白羽番鸭这4个家鸭群体IFIT-5基因外显子2进行多态性分析。结果表明:在IFIT-5基因外显子2上检测到2种等位基因、2种基因型,存在1个SNP位点;在4个群体中均未检测到BB基因型个体,4个群体均不处于哈代-温伯格平衡,苏牧麻鸭跟金定鸭不同基因型分布差异不显著(P>0.05),而其余群体彼此不同基因型分布存在极显著性差异(P<0.01)。提示4个家鸭群体IFIT-5基因外显子2存在遗传多态性,不同家鸭群体在遗传基础上存在着一定的差异。

摘要：为通过分子生物学手段早期检测矮小型溧阳鸡,通过设计特异性引物,以含有DW和/或dw基因的鸡血液基因组DNA为模板进行PCR扩增,通过琼脂糖凝胶电泳技术进行鉴定。结果显示:只含有DW基因鸡仅扩增出417 bp单一条带;只含有dw基因鸡仅扩增出217 bp单一条带;含有DW和dw基因鸡扩增出417 bp和217 bp两个条带。研究表明,该分子生物学方法能够准确鉴定出含有DW和/或dw基因的溧阳鸡,用于矮小型溧阳鸡的早期选择。

摘要：本试验根据GenBank中公布的原鸡肌细胞生成素(myogenin,MyoG)基因序列设计1对引物,采用RT-PCR方法,从京海黄鸡肌肉组织中克隆MyoG基因的编码区序列,并使用多种生物软件和在线工具对目的序列进行生物信息学分析,分析MyoG基因与其他物种的同源性、蛋白质的理化性质、蛋白质序列的跨膜区、亚细胞定位、亲水性、潜在的磷酸化位点、保守结构域及该基因编码蛋白的二级结构和三级结构。最终获得了包括编码区在内的长754bp的MyoG基因序列,生物信息学分析显示,京海黄鸡MyoG基因的保守性较低,与GenBank中原鸡、火鸡、鹌鹑、马、人、野猪、牛、山羊、大鼠、绵羊的同源性分别为99.7%、94.4%、92.0%、70.0%、70.0%、73.3%、69.0%、67.9%、67.8%、73.5%;氨基酸分析发现,MyoG蛋白为水溶性蛋白,分子质量为25854u,理论等电点为5.46,不属于跨膜蛋白;亚细胞定位显示,大部分蛋白位于细胞质内,不属于分泌蛋白;预测含有6个潜在的磷酸化位点,1段碱性序列,1段HLH序列,1段低复杂度序列;二级结构以无规则卷曲为主,三级结构显示MyoG蛋白的结构域呈螺旋状。

摘要：对不同日龄的幼龄兔实施超数排卵处理,并进行卵母细胞体外成熟及体外受精培养。结果表明:最早可进行超数排卵的幼龄兔为50日龄,但60日龄兔的超数排卵效果显著优于50日龄兔(P0.05);70日龄兔的卵母细胞总成熟率显著高于50日龄兔(P0.05);70日龄兔的卵母细胞总受精率高于60日龄兔,60日龄和70日龄的卵母细胞总受精率均高于50日龄,差异均不显著(P>0.05)。

摘要：建立高效液相色谱荧光法同时检测鸡血浆中阿莫西林和氨苄西林的残留量。鸡血浆经乙腈提取,饱和二氯甲烷萃取,酸性条件下水杨醛沸水浴衍生化后,以0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液（A）和乙腈溶液（B）为流动相,梯度洗脱,流速为1.0mL/min,荧光检测激发波长为354nm,发射波长为445nm。阿莫西林和氨苄西林线性范围均为5.0~5 000.0μg/L,线性关系良好（r=0.999 9,0.999 6）。当阿莫西林和氨苄西林添加水平均为5.0~125.0mg/L时,鸡血浆样品平均回收率均高于74.72%,相对标准偏差（RSD）均低于8.65%,日内相对标准偏差分别低于4.99%和10.60%,日间相对标准偏差分别低于7.98%和11.29%。测定鸡血浆样品中AMO的检测限（LODs）为2.0μg/L（S/N=3）、定量限（LOQs）为5.0μg/L（S/N=10）,AMP的检测限为1.0μg/L（S/N=3）、定量限为2.5μg/L（S/N=10）。该方法操作简便、快速,且结果精确、灵敏、可靠,可适用于鸡血浆中阿莫西林、氨苄西林同时提取和检测。