摘要：本研究设计6对引物,采用克隆测序和PCR-SSCP技术对鸭ApoVLDL-Ⅱ基因进行克隆测序和单核苷酸多态进行检测,并分析其多态对肉质和脂肪性状的遗传效应。结果表明,首次获得鸭ApoVLDL-Ⅱ基因DNA序列3 197 bp(GQ 180104),与番鸭和鸡的同源性分别为94.44%和68.74%;在引物Exon3检测到1910位碱基后插入/缺失2个碱基CC和G2106A突变,产生3种基因型:CC、CD和DD,等位基因D为樱桃谷鸭的优势等位基因,而C则为金定鸭和苏牧麻鸭的优势等位基因,该座位的基因型分布仅苏牧麻鸭符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);在引物Exon4检测到T2723C、C2743T和A2944C突变,产生AA、AB和BB 3种基因型,3个鸭群体中的等位基因B均为优势等位基因,基因型分布均处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);2个多态座位均表现为中度多态,基因型分布仅苏牧麻鸭与金定鸭之间未达到显著差异(P>0.05)。最小二乘分析显示,AA型个体的UFA和EFA分别极显著低于和高于AB和BB(P<0.01);AA型个体的胸肌率显著高于AB(P<0.05),极显著高于BB(P<0.01),揭示鸭ApoVLDL-Ⅱ基因Exon4座位的突变可能影响鸭胸肌率以及脂肪酸的合成和代谢过程,等位基因A可能是EFA和胸肌率的有利等位基因,等位基因B可能为UFA的有利等位基因。

摘要：为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以10~12月龄的ICR雌鼠为试验材料,分别将不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol·L^(-1))添加至体外成熟培养液中,通过判断卵母细胞的成熟率、受精率及囊胚率筛选出褪黑素最适宜的添加浓度,并通过线粒体分布检测、活性氧水平检测和细胞早期凋亡水平检测,分析褪黑素在卵母细胞成熟中的作用。结果表明:10-6 mol·L^(-1)的褪黑素添加至体外成熟培养液中能有效改善高龄小鼠卵母细胞的成熟、受精和胚胎发育,可通过改善线粒体的分布和活性,降低氧化应激水平和早期细胞凋亡,从而减弱衰老所引起的卵母细胞退化。综合而言,在体外成熟培养液中添加10-6mol·L^(-1)的褪黑素可提高卵母细胞的核质成熟,改善高龄小鼠卵母细胞的质量。

摘要：以溧阳鸡为素材,设计5对特异性引物,采用PCR-SSCP和测序结合的方法,对165只溧阳鸡(母)促卵泡激素受体(FSHR)基因进行多态性检测。结果共检测到2个突变位点,第4外显子(Exon 4)第33位碱基发生T→C突变,第6外显子(Exon 6)之后第12位碱基(即内含子6第12位点碱基)发生G→A突变,其中在Exon 4区域检测到3种基因型:AA、AB和BB,基因型频率分别为0.539、0.400和0.061;在Exon 6区域检测到3种基因型:CC、CD和DD,基因型频率分别为0.248、0.558和0.194。适应性χ2检验表明各片段的基因频率在群体内分布处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。溧阳鸡FSHR基因存在多态性,为进一步研究FSHR基因对溧阳鸡繁殖性能的遗传效应积累了理论资料。

摘要：以70日龄扬州鹅(A×A)及其4个杂交配套组合(K×B、K×A、C×A和S×A)鹅群体为试验素材,测定其屠宰性能、常规肉品质和化学指标。结果表明:5个鹅群体中,屠宰率、全净膛率都分别在87.10%、67.94%以上;肌肉肉色(OD值)为0.58～1.68,且胸肌肉色均较腿肌浅;嫩度在性别间差异不显著,但腿肌的嫩度比胸肌好;K×B群体公鹅胸肌粗脂肪、S×A群体及A×A群体母鹅胸肌的水分含量均显著高于腿肌(P<0.05),A×A群体母鹅胸肌蛋白含量极显著小于腿肌(P<0.01),S×A群体公鹅腿肌的粗脂肪含量在性别间差异显著(P<0.05),其他群体的常规化学成分含量在部位和性别间差异均不显著;除C×A群体母鹅胸肌中的肌苷酸含量显著大于腿肌外,其他群体肌苷酸和硫胺素含量在部位间差异均不显著。

摘要：试验旨在探究视黄酸介导的Stra8信号在生殖细胞发生过程中的作用和调控机制。以如皋黄鸡睾丸cDNA为模板扩增Stra8基因CDS区,并与pET-28a载体相连获得原核重组表达载体pET-28a-Stra8,然后转染大肠杆菌BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导外源基因表达,离心收集菌液,并用超声波破碎等方法收集表达的蛋白,用纯化的蛋白作为抗原制备兔源抗体,产生带有免疫抗体的兔血;取全血,经血凝离心等步骤后获取血清,通过SDS-PAGE检测抗体的纯度,将获得的含有多克隆抗体的血清进行ELISA检测效价。结果显示:成功构建pET-28a-Stra8重组载体,IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE分析后显示,STRA8蛋白大小约为55 ku;ELISA检测显示在血清稀释比为1∶256000时P/N=3.3>2.1,达到阳性血清合格标准;Western blotting结果显示制备的多克隆抗体血清可结合STRA8蛋白,该结果为进一步研究Stra8在生殖细胞发生过程中的作用和调控机制提供了基础。

摘要：为探究甘油对湖羊精液常温保存效果的影响,在基础稀释液中添加0 (对照组)、2%、4%、6%和8%甘油,检测16℃保存过程中湖羊精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和直线速率等运动性能指标。结果表明:与对照组相比,保存48~120 h时, 2%甘油组精子活率(P>0.05)、质膜完整率(P0.05)提高;保存144~168 h时, 2%和4%甘油组精子活率(P>0.05)、质膜完整率(P0.05)提高;保存192 h时,各甘油组精子活率(P<0.05)提高。随着甘油浓度的增加,直线速率、曲线速率、平均路径速率和侧摆幅度也表现为先升高后降低的趋势。在试验条件下,保存24 h内各甘油组均降低精液品质,保存48~120 h时2%甘油组精液品质提高,保存144~168 h时2%和4%甘油组精液品质提高,保存192 h时各甘油组精液品质均提高。

摘要：为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,本研究以10~12月龄ICR雌鼠的卵母细胞为研究对象,在体外成熟培养液中添加不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol/L),以第一极体排出率作为卵母细胞成熟的评判依据筛选出褪黑素最佳添加浓度,并通过活性氧(ROS)水平检测、谷胱甘肽(GSH)水平检测、三磷酸腺苷(ATP)含量检测以及纺锤体组装来分析褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的作用。结果,1×10^(-6) mol/L的褪黑素能够降低细胞内ROS水平,提高GSH水平,减弱高龄小鼠卵母细胞的氧化应激,同时还可以通过维持细胞内正常的能量(ATP)供应来保证纺锤体的正常形态,促进卵母细胞体外成熟。结论认为,在体外成熟培养体系中添加1×10^(-6) mol/L的褪黑素可以通过改善卵母细胞的质量,促进高龄小鼠卵母细胞的体外成熟。

摘要：本研究旨在克隆新西兰白兔白细胞介素10(IL-10)基因的cDNA,并探讨其生物信息学功能,进一步通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。实验采用RT-PCR方法克隆兔IL-10基因的cDNA,初步进行生物信息学分析,构建含有EGFP报告基因的融合表达载体pEGFP-IL-10。脂质体(LTX)介导基因转染NIH-3T3细胞,48 h后在荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。结果表明:实验成功克隆出兔IL-10基因537 bp长的完整编码区(CDS),共编码178个氨基酸,GenBank登录号为NM_001082045;IL-10蛋白的分子量为20.15 ku,理论等电点为8.20;信号肽区域预测结果显示,IL-10蛋白含有一小段信号肽序列,属于分泌型蛋白,并且信号肽酶的切割位置在第21和第22个氨基酸之间;荧光倒置显微镜观察结果发现,融合蛋白在细胞质中表达,而转染pEGFP-C1后荧光蛋白均匀分布于整个细胞;RT-PCR检测mRNA表达明显。结果显示,融合表达载体pEGFP-IL-10构建成功,并在细胞中明显表达,为进一步研究IL-10的生物学功能奠定基础。

摘要：本研究旨在寻找甲状腺激素应答蛋白Spot14α(thyroid hormone responsive Spot14α,THRSPα)基因的多态位点,并分析其对京海黄鸡屠体和腹脂性状产生的影响。针对THRSPα基因外显子区,利用PCR-SSCP结合测序技术对379只140日龄京海黄鸡进行SNP检测,结果发现,该基因第1外显子区存在9bp插入缺失多态位点,形成3种基因型:AA、AB和BB,2种等位基因:A、B,基因频率分别为0.4485、0.5515。相关分析结果表明,该位点对京海黄鸡140日龄活重、屠体性状(包括屠体重、头重、脚重、翅重、胸肌重、腿肌重、全净膛重、半净膛重)和腹脂性状均没有显著影响(P>0.05)。因此推断该多态位点在京海黄鸡分子辅助标记育种中不能作为屠体和腹脂性状筛选的候选分子辅助标记。

摘要：为了了解鸡促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因的密码子特性,以便于为GnRHR基因的表达选择合适的外源表达系统,本研究使用在线工具CUSP、CHIPS及CodonW软件对鸡GnRHR基因的密码子特性进行分析,并与鸡、模式动物基因组和其他动物GnRHR基因密码子特性进行比较。结果显示,京海黄鸡GnRHR基因的ENc值较小,具有较强的密码子偏好性,且偏好以G/C结尾的密码子,GnRHR基因CDS序列中,GC含量大于AT含量;CodonW软件计算结果表明,京海黄鸡GnRHR基因密码子中,密码子GCC、ATC、CTC、CTG、CGC、CGG、AGC、TCC和GTG(RSCU>2)偏好性较强,且均以G/C结尾。对31条鸡基因分析表明鸡偏好密码子中有12种G/C结尾的密码子。与大肠杆菌、酵母菌和小鼠基因组密码子使用频率比较显示,京海黄鸡GnRHR基因密码子偏好性与3种生物相差很大,不适合进行外源表达。与其他动物GnRHR基因密码子偏好性比较显示,禽类GnRHR基因偏好含有或以G/C结尾的密码子,而其他物种的GnRHR基因无强烈的偏好性。聚类分析结果表明,亲缘关系近的物种之间倾向于拥有相同的密码子偏好性。