摘要：为探究甘油对湖羊精液常温保存效果的影响,在基础稀释液中添加0 (对照组)、2%、4%、6%和8%甘油,检测16℃保存过程中湖羊精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和直线速率等运动性能指标。结果表明:与对照组相比,保存48~120 h时, 2%甘油组精子活率(P>0.05)、质膜完整率(P0.05)提高;保存144~168 h时, 2%和4%甘油组精子活率(P>0.05)、质膜完整率(P0.05)提高;保存192 h时,各甘油组精子活率(P<0.05)提高。随着甘油浓度的增加,直线速率、曲线速率、平均路径速率和侧摆幅度也表现为先升高后降低的趋势。在试验条件下,保存24 h内各甘油组均降低精液品质,保存48~120 h时2%甘油组精液品质提高,保存144~168 h时2%和4%甘油组精液品质提高,保存192 h时各甘油组精液品质均提高。

摘要：本研究旨在寻找甲状腺激素应答蛋白Spot14α(thyroid hormone responsive Spot14α,THRSPα)基因的多态位点,并分析其对京海黄鸡屠体和腹脂性状产生的影响。针对THRSPα基因外显子区,利用PCR-SSCP结合测序技术对379只140日龄京海黄鸡进行SNP检测,结果发现,该基因第1外显子区存在9bp插入缺失多态位点,形成3种基因型:AA、AB和BB,2种等位基因:A、B,基因频率分别为0.4485、0.5515。相关分析结果表明,该位点对京海黄鸡140日龄活重、屠体性状(包括屠体重、头重、脚重、翅重、胸肌重、腿肌重、全净膛重、半净膛重)和腹脂性状均没有显著影响(P>0.05)。因此推断该多态位点在京海黄鸡分子辅助标记育种中不能作为屠体和腹脂性状筛选的候选分子辅助标记。

摘要：为探究常温保存稀释液中添加卵黄对湖羊精液保存效果的影响,本实验在基础稀释液中添加0(对照组)、5%、10%、15%和20%卵黄,检测16℃保存过程中湖羊精子活率、活力和直线速率等运动性能指标。结果表明:与对照组相比,保存0~72 h,5%和10%卵黄添加组精子活率增强(P>0.05),15%和20%卵黄添加组精子活率降低(P>0.05);与对照组相比,保存96 h,5%、10%和15%卵黄添加组精子活率增强(P>0.05),20%卵黄添加组精子活率降低(P>0.05);与对照组相比,保存120~240 h,各卵黄添加组的精子活率、活力、直线速率、曲线速率、路径速率和侧摆幅度较对照组均有显著提高。因此,在本实验条件下,不同浓度卵黄在常温保存条件下保存不同时间对湖羊精液的保存效果不同,保存144 h内,添加5%卵黄的保存效果最好;保存144~216 h,添加15%卵黄量的保存效果最好;保存216 h后,添加20%卵黄的保存效果最好。

摘要：本研究旨在克隆新西兰白兔白细胞介素10(IL-10)基因的cDNA,并探讨其生物信息学功能,进一步通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。实验采用RT-PCR方法克隆兔IL-10基因的cDNA,初步进行生物信息学分析,构建含有EGFP报告基因的融合表达载体pEGFP-IL-10。脂质体(LTX)介导基因转染NIH-3T3细胞,48 h后在荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。结果表明:实验成功克隆出兔IL-10基因537 bp长的完整编码区(CDS),共编码178个氨基酸,GenBank登录号为NM_001082045;IL-10蛋白的分子量为20.15 ku,理论等电点为8.20;信号肽区域预测结果显示,IL-10蛋白含有一小段信号肽序列,属于分泌型蛋白,并且信号肽酶的切割位置在第21和第22个氨基酸之间;荧光倒置显微镜观察结果发现,融合蛋白在细胞质中表达,而转染pEGFP-C1后荧光蛋白均匀分布于整个细胞;RT-PCR检测mRNA表达明显。结果显示,融合表达载体pEGFP-IL-10构建成功,并在细胞中明显表达,为进一步研究IL-10的生物学功能奠定基础。

摘要：利用PCR-SSCP技术对4个家兔群体IL-10基因启动子序列进行遗传多样性研究,并探讨其与部分血清免疫指标的相关性。根据克隆的IL-10基因启动子序列设计2对特异性引物,采用PCR-SSCP技术对新西兰白兔(NZW)、福建黄兔(F-Y)、新西兰白兔(♂)×福建黄兔(♀)(简称新黄兔,N-F)、福建黄兔(♂)×新西兰白兔(♀)(简称黄新兔,F-N)这4个家兔群体IL-10基因的启动子序列进行多态性检测。结果表明:在IL-10基因启动子序列上检测到3对等位基因,5种基因型,存在3个SNP位点;4个家兔群体在IL-10基因启动子序列内存在遗传多样性,不同家兔群体在遗传基础上存在一定差异。4个家兔群体除了福建黄兔外,其他均处于哈代温伯平衡。经研究发现,福建黄兔作为父本的杂交后代更能够遗传优势性状。

摘要：试验分别探讨了睾酮和FSH诱导鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)向雄性生殖细胞分化的作用效果。首先筛选睾酮和卵泡刺激素(FSH)的适宜诱导浓度,在RA和支持细胞的诱导基础上分别添加适宜浓度的睾酮和FSH对传至2代的ESCs进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。结果显示:睾酮和FSH的适宜诱导浓度分别为15 ng/m L和25 ng/m L,单独使用睾酮和FSH诱导均未出现类SSCs样细胞;二者联合支持细胞和RA诱导,诱导2 d出现类胚体,随后类胚体体积逐渐变大,诱导12 d类胚体解体出现类SSC样细胞;实时荧光定量PCR结果显示,睾酮和FSH分别与支持细胞和RA共同诱导组中,Stra8表达量持续上调,integrinβ1、Dazl表达量显著上调,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下降趋势;睾酮的多因素诱导组中,Dazl的表达量明显高于RA和支持细胞诱导组;而FSH的多因素诱导组中Stra8的表达量相对于RA和支持细胞诱导组也显著升高。结果表明睾酮和FSH单独诱导不能引起ESCs向雄性生殖细胞分化,但可以促进支持细胞和RA诱导ESCs向雄性生殖细胞分化的作用效果,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。

摘要：为探讨牛皮毛蛋白粉替代豆粕的可行性,试验选用1日龄健康AA肉雏鸡300只,采用单因素随机试验设计分为5组,在基础日粮中使用不同量(0、3%、6%)的牛皮毛蛋白粉替代豆粕,试验期为6周,试验结束时每组随机选取4只屠宰,测定屠宰性能和肉品质。结果表明:日粮中使用6%皮蛋白粉和3%毛蛋白粉代替豆粕,肉鸡半净膛率显著升高(P<0.05),添加3%皮蛋白粉和6%毛蛋白粉均可显著提高胸肌24hpH值(P<0.05),对肌肉嫩度和系水力影响不显著。

摘要：根据鸡和鸭Apo VLDL Ⅱ基因序列设计3对特异性引物,对金定鸭外显子1、2和4编码区进行扩增,利用PCR-SSCP方法检测单核苷酸多态及其对体重、体尺、屠宰性能、肉品质、总蛋白、血清三酰甘油和总胆固醇的遗传效应。结果表明:外显子1和2未检测到多态;外显子4检测到3种基因型,即AA、AB和BB,AA为优势基因型,A为优势等位基因,序列比对发现在内含子3内发生G47A和G136A突变,外显子4编码区内发生C228T突变,为无义突变;该基因座的遗传杂合度为0.28,属中等遗传杂合度,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡;AA基因型个体的胸肌水分显著高于BB基因型,AB基因型个体的肌肉剪切力值显著高于BB基因型,而其他指标在各基因型间差异均不显著,推测该片段的多态位点可能对肉品质有一定的影响。

摘要：旨在根据GenBank上公布的原鸡GnRHR基因序列设计2对引物,采用RT-PCR方法,从京海黄鸡肌肉组织中克隆GnRHR基因的编码区序列,并使用多种生物软件和在线工具对目的序列进行生物信息学分析,分析GnRHR基因与其他物种的同源性、蛋白质的理化性质、蛋白质序列的跨膜区、亚细胞定位、亲水性、潜在的磷酸化位点、保守结构域及该基因编码蛋白的二级结构、三级结构等。同时为GnRHR基因和β-actin基因各设计1对引物,采用RT-qPCR的方法研究GnRHR基因在京海黄鸡12个组织和器官中的表达情况。最终成功克隆了京海黄鸡GnRHR基因完整的编码区序列和部分侧翼序列,Blast结果显示,京海黄鸡GnRHR基因与原鸡、番鸭、藏羚羊、野猪、马、小鼠、大鼠、家兔、绵羊、人、牛、黑猩猩和斑马鱼的同源性分别为99.7%,86.7%,55.7%,54.6%,52%,51.6%,50.8%,50%,49.9%,49.6%,49.4%,47.4%和39.3%,并成功构建系统发育树。蛋白质结构分析显示,GnRHR蛋白分子量为45.432 kDa,理论等电点为9.55,包含20种氨基酸,其中,亮氨酸含量最高,占13.8%,赖氨酸含量最低,占0.7%;不稳定系数为65.35,显示该蛋白不稳定;脂溶指数为95.54,总平均疏水指数为0.312,为非水溶性蛋白;该蛋白不属于分泌型蛋白,主要存在于胞膜上,没有信号肽结构,存在16个潜在磷酸化位点和11个糖基化位点;保守结构域分析显示存在2个低复杂度序列和7段跨膜结构,跨膜分析显示该蛋白为7次跨膜蛋白,二级结构预测结果显示,在GnRHR二级结构中,α-螺旋占29.83%,β-折叠占17.18%,无规则卷曲占52.98%,GnRHR蛋白三级结构为复杂的7次跨膜螺旋结构,且为单链蛋白。组织表达分析显示,GnRHR基因主要在垂体中高表达,表达量显著高于其他组织,在其他11个组织和器官中表达量较低。

摘要：甜菜碱含量的测定方法有很多种,包括酸碱滴定法、紫外分光光度法、高氯酸非水滴定法、离子色谱法等。各种方法均有其优缺点,综合考虑,离子色谱法与非水滴定法的测定结果较好。为比较这两种方法哪种更准确、更方便,设计如下实验。选取5种含量不同的甜菜碱产品,分别用非水滴方法和离子色谱法测定5种产品的甜菜碱含量。实验结果表明,离子色谱法测定的甜菜碱含量与真实值较接近,非水滴定法测定的甜菜碱含量比真实值偏高。