摘要：试验旨在探究精原干细胞(SSCs)形成过程中的关键miR-302d行使功能的分子机制。试验克隆mi R-302d前体序列并连入PGMLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green1-T2A-Puro构建mi R-302d过表达载体(mi R-302d mimics);合成mi R-302d的干扰靶点并连入PGMLV-SC5载体构建mi R-302d干扰载体(mi R-302d inhibitor)。通过生物信息预测获得mi R-302d靶基因并构建其3′UTR的野生型(WT)和突变型载体(MT);将mi R-302d过表达载体分别与WT和MT载体共转染DF-1和293T细胞,检测靶基因3′UTR的活性。同时检测在DF-1细胞中过表达或干扰mi R-302d后靶基因的表达变化。结果显示:成功构建mi R-302d的过表达和干扰载体;预测结果显示Tle4为mi R-302d的潜在靶基因,且该基因为ESCs分化为SSCs过程的重要基因;双荧光素酶活性检测结果显示不论是在DF-1还是293T细胞中,与转染WT+mi R-NC组相比,转染WT+mi R-302d组的双荧光素酶活性显著下降(P0.05),且过表达mi R-302d后下调Tle4的表达,而干扰mi R-302d后上调Tle4的表达。结果表明,miR-302d可直接调节靶基因Tle4的表达。

摘要：研究旨在探究miR-1458与TBX6的靶向调控关系。试验基于前期建立视黄酸(Retinoic acid,RA)体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向精原干细胞(SSCs)的分化模型,通过RNA-seq测序结果发现ESCs向SSCs分化过程中差异表达的miR-1458,采用miRNA定量检测miR-1458在ESCs/SSCs中的表达量,miR-1458靶基因富集通路分析筛选出富集通路,分析其与生殖细胞发育的相关性。基于前期联合分析RA诱导ESCs的mRNA-seq数据中|log2(fold change)|>8筛选出的与miR-1458互作的差异性mRNA,依据靶基因预测软件数据库在线预测该基因与miR-1458是否存在结合位点,利用qRT-PCR验证两者的关系,同时利用同源重组法将靶基因的3′UTR及点突变序列插入pMIR-REPORT^(TM)双荧光素酶报告载体中,共转染DF-1细胞,通过双荧光素酶报告载体确定miR-1458与TBX6的靶向调控关系。结果显示:ESCs向SSCs分化过程中差异表达miR-1458,miR-1458在生殖细胞分化过程中发挥重要作用;miR-1458与TBX63′UTR存在结合位点;miR-1458和TBX6分别在ESCs和SSCs中呈现此消彼长的表达趋势;miR-1458能够抑制TBX6的表达;miR-1458可靶向TBX63′UTR区调节TBX6的表达。研究表明miR-1458在鸡的ESCs和SSCs中呈现差异性高表达,并且miR-1458能够直接靶向调控TBX63′UTR区从而调节TBX6的表达,为后续研究miR-1458在SSCs形成过程中的机制探究奠定基础。

摘要：环状RNA(circ RNA)由于其广泛性、稳定性、保守性等特点具有较高研究价值,已成为生物研究领域热点之一。为研究circ RNA在鸡脂肪细胞分化中作用,选择与前期发现在鸭脂肪细胞分化中具有重要作用的鸭circ_PLXNA1具有高度同源性的鸡circ_PLXNA1作验证分析。鸡circ_PLXNA1是一个稳定的环状转录本,核质分离试验发现鸡circ_PLXNA1主要定位在细胞质中。此外,circ_PLXNA1主要在鸡心脏和肝脏中表达。生物信息学分析结果表明,鸡circ_PLXNA1和预测的靶基因富集于Erb B、MAPK和Hedgehog等信号通路,表明鸡circ_PLXNA1可能通过调控靶基因间接参与脂肪细胞分化。

摘要：为建立同时检测猫细小病毒(FPV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的双重荧光定量PCR方法,针对FPV的VP2基因、FHV-1的UL21基因设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了双重荧光定量PCR方法,并绘制了标准曲线,其相关系数(R2)均为0.999,具有良好的线性关系。结果显示,FPV、FHV-1最低检测限分别为4.87和2.21 copies/μL;对猫的常见病毒及细菌均无非特异反应;批内、批间试验的变异系数均小于2%。证明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好。用建立的方法对178份样本进行检测,结果,FPV和FHV-1的阳性检出率分别为73.65%和16.85%,二者混感阳性率为15.73%,与临床确诊结果一致。上述结果表明,本研究建立的方法可用于FPV、FHV-1感染的早期诊断、定量检测和流行病学调查等。

摘要：为建立可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守区和类NADC30毒株的双重TaqMan探针荧光定量PCR方法,分别针对保守的N蛋白基因和Nsp2基因设计特异性引物和探针,通过优化反应体系及反应条件对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估。结果显示,双重标准曲线的相关系数(R^(2))均大于0.990,具有良好的线性关系;最低检测限分别为5.27 copies/μL和3.00 copies/μL,具有较高的灵敏度;不与其他常见猪病病原发生非特异反应,且重复性良好,批内批间变异系数均小于3%。对168份临床样本的检测结果显示,PRRSV总阳性检出率为68.45%(115/168),其中类NADC30检出率为32.14%,混合感染率为20.24%,与临床诊断结果相一致。结果表明,本方法可用于检测PRRSV和鉴别类NADC30毒株以及猪繁殖与呼吸系统综合征的流行病学调查。

摘要：为研究不同水平N-羟甲基蛋氨酸钙(n-Hydroxymethyl methionine calcium,N-HMM-Ca)对泌乳期荷斯坦奶牛生产性能、乳品质及瘤胃发酵的影响。选用胎次、产奶量、泌乳天数相近的30头健康荷斯坦奶牛,采用完全随机区组设计,分为5组,每组6头,分别在日粮中以干物质基础添加0、0.15%、0.30%、0.75%、1.50%N-HMM-Ca。预试期14 d,正试期42 d。结果表明:1)日粮中添加0.15%N-HMM-Ca能显著提高奶牛产奶量(P0.05);5)0.15%组能够提高产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes、***)、白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus、***)和黄色瘤胃球菌(***、***)的相对表达量(P<0.05)。综上所述,泌乳奶牛日粮中添加0.15%N-HMM-Ca能有效提高生产性能以及乳品质,提高饲料的消化利用率。因此,建议在泌乳奶牛日粮中添加N-HMM-Ca的适宜剂量为0.15%。

摘要：为替代奶牛动物源脂肪营养源,寻求制备植物源棕榈油脂肪酸钙的方法和优化工艺,研究棕榈油脂肪酸钙的皂化和复分解反应条件。在单因素研究的基础上,采用三因素二次回归旋转组合设计,对棕榈油脂肪酸钙制备工艺进行了复分解参数优化研究,建立了产品得率与复分解反应温度、用水量、超盐量之间关系的数学模型。结果表明:采用棕榈油制备脂肪酸钙的优化工艺:当复分解反应温度为64.59℃、用水量为油重的7.58倍、超盐量为12.73%时,得率最大值为96.34%。验证试验结果与模型值相符。

摘要：采用3×3拉丁方试验设计,研究以燕麦(Avena sativa)或苜蓿(Medicago sativa)干草等比例替代羊草(Leymus chinensis)后,对饲草中硝酸盐动态消失率及湖羊瘤胃发酵参数的影响。晨饲后0、1、2、3、4、5和6h通过瘤胃瘘管采集湖羊瘤胃液,测定瘤胃pH值以及硝酸盐(NO_3^-)、亚硝酸盐(NO_2^-)、氨态氮(NH_3-N)的浓度;同时,晨饲后2h经颈静脉采血测定血清高铁血红蛋白含量。结果表明,1)3组瘤胃液NO_3^-和NO_2^-浓度分别在喂后1和2h达到最大值,之后迅速降低;2)pH值、NO_3^-、NO_2^-浓度各组间均无显著差异(P>0.05);NH_3-N仅在饲喂3h后全羊草组(A组)显著低于其它两组(P=0.018);3)高铁血红蛋白含量均较低,且无显著差异(P>0.05)。本研究选用的牧草组合对湖羊瘤胃还原硝酸盐过程没有显著影响。

摘要：为构建pCEP4-CaBP-D28k真核表达载体,根据GenBank已发表钙结合蛋白D28k(calbindin-D28 k,CaBP-D28 k)设计1对引物,利用RT-PCR方法获得新扬州鸡CaBP-D28 k基因序列,克隆入真核表达载体pCEP4,经PEI介导转入非洲绿猴转化肾细胞(COS-1)中,并以间接免疫荧光试验(IFA)检测CaBP-D28 k表达状况.结果表明,CaBP-D28 k基因核苷酸长度为789 bp,编码261个氨基酸,与GenBank上已发表序列比较,核苷酸同源性为99.9%,在第760位处存在G→T的错义突变.该序列与蟾蜍、鼠、人CaBP-D28k氨基酸同源性分别为79.7%、78.2%、78.6%;酶切和测序鉴定证实pCEP4-CaBP-D28k含有目的片段,且连接构建正确;在COS-1细胞中检测到CaBP-D28 k表达.这为进一步研究pCEP4-CaBP-D28k在动物体中的表达,调控机体钙代谢奠定了基础.

摘要：为研究不同复合氨基酸铁、锌络合物的添加量对肉仔鸡生产性能的影响。选取360只体重相近的1日龄AA商品代雏鸡,采用单因子试验设计,随机分成6组,每组3个重复,每个重复20只鸡;对照组(CON组)饲喂基础饲粮,铁、锌来源为七水硫酸亚铁和无水硫酸锌,添加量都为100 mg/kg;其他5组设为试验组,铁、锌来自复合氨基酸络合物,铁和锌的添加量为25(Ⅰ组)、50(Ⅱ组)、75(Ⅲ组)、100(Ⅳ组)、125(Ⅴ组)mg/kg。在21和42日龄时进行采血和屠宰,测定生产性能、屠宰性能和不同组织中铁、锌的浓度。结果表明:1)21日龄试验Ⅱ组平均体重显著高于CON组(P0.05)。3)21日龄试验Ⅱ组胸肌率显著高于对照组(P0.05)。4)试验Ⅲ组和Ⅴ组肝脏中的铁、锌浓度显著高于对照组(P<0.05)。因此,在基础饲粮中添加氨基酸铁、锌络合物可以提高肉仔鸡的生产性能,增加对铁、锌的有效利用,间接减少对环境的污染;并且试验中添加50和125 mg/kg的2组效果较好,但考虑低能减排问题还是以50 mg/kg的添加量最佳。