摘要：促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)作为调节家禽卵泡发育重要的候选基因,但FSH在生物体内的半衰期非常短,本试验将具有延长基因半衰期作用的CTP序列添加到鹅FSH基因各亚基的C末端进行基因融合,以期获得pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ-CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α重组蛋白。设计去除目的基因信号肽和含有酶切位点的特异性引物,经融合PCR扩增获得了目的基因FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α,通过构建原核表达载体pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ-CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,蛋白纯化。结果显示,3个融合蛋白FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α的IPTG最佳诱导时间分别为4、5和5h,最佳诱导浓度分别为0.2、0.8和1.5mmol/L,且都是以包涵体形式存在,相对分子质量分别为32 000、35 000和46 000,与预期大小一致。结果表明,本试验成功构建了鹅pET-32a-FSHα-CTP、pET-32a-FSHβ-CTP和pET-32a-FSHβ-CTP-α的原核表达载体,并对它们的重组蛋白进行了纯化,为开展鹅FSH的基因免疫研究和鹅rFSH生物制剂研发奠定基础。

摘要：为了构建人乳铁蛋白基因（hLF）的乳腺表达载体并验证其在乳腺细胞中的表达情况,本载体以山羊β-casein基因上游包括启动子、外显子1、内含子1、部分外显子2作为5′端调控序列,下游包括部分外显子7、内含子7、外显子8、内含子8、外显子9及3′部分基因组片段作为3′端调控序列,长度分别为6.2 kb和7.1 kb,将hLF基因（目的基因）和Neo基因（筛选标记）分别插入到5′端调控序列和3′端调控序列的下游,构建成pBC1-hLF-Neo载体,其全长为25.348 kb。为了检测该载体的生物学功能,用脂质体介导法将其分别导入到山羊乳腺上皮细胞GMC和小鼠乳腺癌细胞株C127中进行表达验证,经G418抗性筛选8~10 d,得到了药物抗性细胞克隆,经催乳素、胰岛素及氢化可的松诱导培养,通过RT-PCR、Western blotting以及重组hLF抑菌圈试验表明,山羊β-casein基因启动子驱动的hLF基因能够在C127和GMC乳腺上皮细胞中转录翻译,且重组hLF具有抑制大肠杆菌生长的生物活性,这为下一步建立稳定整合hLF基因奶山羊胎儿成纤维细胞系奠定了基础。

摘要：试验选用4头中国荷斯坦泌乳奶牛采用4×4拉丁方试验设计研究了TMR中添加不同水平(0、300、600、900 g/d.头)的陈皮对奶牛乳风味的影响,并采用GC-MS分析了陈皮中的主要挥发性活性物质及添加陈皮后乳中风味物质种类及含量。结果表明:在奶牛TMR中添加陈皮对奶牛的采食量及乳成分无影响(P>0.05),在添加量为300、600 g时的产奶量显著高于对照(P<0.05),在添加量为600 g时,牛奶的色泽、异味感和甜味与对照相比均有显著改善(P<0.05);陈皮挥发油中的主要化合物是柠檬烯、γ-松油烯、β-月桂烯、α-蒎烯、β-蒎烯等;添加陈皮的牛奶中能检测出陈皮中所特有的一些芳香性化合物,如柠檬烯、γ-榄香烯、乙基亚麻酸、油酸、油醇等,且这些化合物在牛奶中的含量随着日粮中陈皮添加水平的增加而增加。结果提示,饲料中添加600 g(/d.头)陈皮能提高奶产量及改善奶风味。

摘要：以3头装有瘤胃瘘管的干奶牛作为瘤胃液供体,用体外培养法研究不同日粮蛋白和中性洗涤纤维(NDF)水平对瘤胃发酵、消化和微生物蛋白合成的影响。采用2×3双因子完全随机设计,粗蛋白水平14%、16%和18%,NDF水平为32%和36%。体外发酵后2、4、6、12、24 h取瘤胃液测定pH、NH3-N浓度和微生物蛋白含量,发酵结束后测定饲料中干物质(DM)、NDF和酸性洗涤纤维(ADF)消化率。结果表明:随着蛋白水平升高,瘤胃发酵pH有增加趋势(P=0.079),显著提高NDF和ADF消化率和细菌蛋白合成量(P0.05);日粮中NDF水平显著影响瘤胃pH、NH3-N浓度和ADF消化率(P0.05)。本试验条件下,日粮中16%CP和32%NDF组可在一定程度上促进瘤胃发酵,提高纤维消化率以及微生物蛋白的合成量。

摘要：[目的]本试验旨在研究构树作为粗饲料来源对黄淮白山羊瘤胃发酵特性、消化代谢、生产性能及肉品质的影响。[方法]选择40只健康、体质量接近、5月龄的黄淮白山羊,设计构树占粗饲料的质量分数分别为25%(BP25)、50%(BP50)、75%(BP75)以及0(BP0),共4组,每组设5个重复,试验期60d。[结果]添加构树各组瘤胃pH值与BP0组均无显著差异(P>0.05),而NH3-N浓度均显著高于BP0组(P0.05),BP25组各养分表观消化率均高于BP50、BP75组,其中干物质表观消化率与BP75组间差异显著(P0.05)。添加构树各组进食氮、可消化氮、沉积氮含量均显著高于BP0组(P<0.05),BP25组的氮利用率最高,且与其他各处理组差异显著(P<0.05)。BP25、BP50组试验羊平均日增重(ADG)、胴体质量及屠宰率均显著高于对BP0(P<0.05)。随着构树添加量增加试验羊的肌肉嫩度和系水力显著提高(P<0.05),BP50组的熟肉率最高且与其他处理组间差异显著(P<0.05);BP50组试验山羊后腿肌肉肉色a*值和背最长肌亮度L*值均显著高于其他组(P<0.05)。[结论]当构树与青贮玉米的搭配占比为25%~50%时,更有利于促进黄淮白山羊瘤胃发酵和提高氮利用率,从而提高生产性能和改善羊肉品质。

摘要：根据马立克氏病病毒 (MDV)强毒株GA的基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以特超强毒 6 48株基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白gI基因阅读框 (ORF)中 ,除去其N_端编码疏水区的 16 5个碱基对 (bp)以外的其余部分 ;将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体pGEX_6P_1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游 ;将重组质粒转化进大肠杆菌BL2 1株 ,在 1.0mMIPTG浓度和 30℃的条件下诱导 ,gI_GST基因融合蛋白获得了理想的表达 ;经聚丙烯酰胺凝脉电泳 ,West ern_blot试验 ,验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的 6 3kD。将表达产物回收后免疫小鼠 ,所得抗血清可与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在免疫荧光试验 (FA)中呈细胞膜阳性染色。试验结果表明 ,在大肠杆菌中表达的 6

摘要：文章旨在研究玉米粉碎粒度对休止角、滑角和堆积密度的影响,在此基础上确定料仓卸料口尺寸和最小下料倾角。以玉米为试验材料,经微粉碎成20目、30目、40目三个样品,试验设3个处理组,每个处理组进行5次重复试验。结果表明:随着玉米粉碎粒度由20目减小至40目,其休止角、滑角、堆积密度均呈逐渐增大的趋势,且粉碎粒度与休止角、滑角和堆积密度之间差异极显著(P<0.01)。对三种粒度的玉米粉料,圆锥形料仓卸料口直径分别取1.09、1.03、0.93 m,最小下料倾角为68°、70°、75°时料仓不容易结拱。原料粉碎粒度对其流变学特性有显著影响,因此,在料仓设计时应根据储存物料的粒度选择适宜的结构参数。

摘要：设计5对引物,采用PCR-SSCP技术检测催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因外显子10及部分3′非翻译区在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)和低繁殖力山羊品种(辽宁绒山羊、波尔山羊和安哥拉山羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果表明:首次拼接出的山羊PRLR基因外显子10及部分3′非翻译区的核苷酸序列长度为1,118bp,与已公布的绵羊、牛、人PRLR基因mRNA相应序列的同源性分别为98.33%、93.92%、74.52%,与已公布的羊驼PRLR基因部分序列的同源性为78.29%。引物P1、P2与P4扩增片段具有多态性,其余2对引物的扩增片段不存在多态性。对于P1扩增片段,在济宁青山羊和辽宁绒山羊中检测到AA型和AB型,在安哥拉山羊中检测到AA型和AC型,在波尔山羊中只检测到AA型;克隆测序表明AB型与AA型相比有两处突变(186G→A和220T→C),分别导致氨基酸由天冬氨酸变为天冬酰胺、亮氨酸变为脯氨酸;AC型与AA型相比有1处突变(140A→G),该突变没有导致氨基酸变化;济宁青山羊AA和AB基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05)。对于P2扩增片段,在济宁青山羊、辽宁绒山羊和波尔山羊中都检测到DD型和DE型,而在安哥拉山羊中只检测到DD型;克隆测序表明DE型和DD型相比有两处突变(52G→A和122G→A),其中122bp处的突变导致氨基酸由精氨酸变为甘氨酸;济宁青山羊DD和DE基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05)。对于P4扩增片段,在济宁青山羊中检测到FF型和FG型,在辽宁绒山羊中检测到FF型和GG型,在波尔山羊中只检测到FF型,在安哥拉山羊中检测到FF型、FG型和GG型;克隆测序表明GG型和FF型相比在扩增片段的143bp处发生1处碱基突变(A→G),并导致氨基酸由蛋氨酸变为缬氨酸;FG基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比FF基因型的多0.76只(P<0.05)。研究结果初步表明:PRLR基因可能是控制济宁青山羊多胎性能的一个主效基因或是与之存在紧密遗传连锁的一个标记。

摘要：试验选择4头体况良好且安装有永久性瘤胃瘘管和十二指肠瘘管的徐淮白山羊,采用4×3不完全拉丁方设计,配制蛋白水平相同但牧草蛋白来源不同的4组日粮,分别为A(苜蓿、羊草和稻草)、B(羊草和苜蓿)、C(羊草)、D(苜蓿和稻草),旨在研究不同蛋白组成日粮对山羊胃肠道氨基酸和肽的影响。结果表明,D组日粮蛋白质消化率和蛋白质沉积量最高。各处理组瘤胃内游离氨基酸、肽氨基酸浓度分别为25.58、26.64、26.03、26.86 mg/100 mL和22.82、24.25、23.53、25.73mg/100 mL;十二指肠食糜中游离氨基酸、肽氨基酸浓度分别为32.52、33.52、33.37、33.93 mg/100 mL和22.39、23.53、23.02、24.21 mg/100 mL。瘤胃液和十二指肠中游离氨基酸和肽氨基酸浓度的日变化趋势,均是在采食2 h后降低,4 h后达到峰值。从蛋白质的消化率和进入十二指肠的氨基酸组成来看,苜蓿和稻草组合的D组瘤胃降解率最高,饲喂山羊效果最好。

摘要：根据马立克氏病病毒 ( MDV)强毒株 GA的基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,以强毒株 G2基因组DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白 g I基因阅读框 ( ORF)中 ,除去其 N-端编码疏水区 1 6 5个碱基对 ( bps)以外的部分 ;将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体 p GEX-6 P-1中谷胱甘肽转移酶( GST)基因的下游 ;将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1 株 ,在 1 .0 mmol/L IPTG浓度和 30℃的条件下诱导 ,g I-GST基因融合蛋白获了理想的表达 ;经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western-blotting试验 ,验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的 6 30 0 0。将表达产物回收后免疫小鼠 ,所得抗血清可与 MDV感染的鸡胚成纤维细胞 ( CEF)在免疫荧光试验 ( FA)中 ,呈细胞膜阳性染色。试验结果表明 ,在大肠杆菌中表达的 G2株 MDV g