摘要：目的研究细菌耐药基因水平转移的控制技术。方法以卡那霉素耐药基因Kan为靶基因设计3组靶向sgrna．分别退火后插入到pCas9质粒中，重组菌用氯化钙法制成感受态，将含有Kan耐药基因的质粒pET-30a向其转化，转化菌液分别涂布含氯霉素和含氯霉素／卡那霉素平板，比较各组转化效率。将携带Kan特异性sgrna的重组质粒分别转化含pET-30a的大肠埃希菌，PCR检测Kan耐药基因的降解．并绘制转化子在氯霉素平板上的生长曲线以分析特异性sgrna对受体菌生长的影响。结果所设计的3组sgrna中有2组可以介导CRISPR／Cas9系统对Kan耐药基因水平转移的完全抑制．其余1组也可使转移效率降低88．08％。抑制机制为特异性CRISPR／Cas9系统降解了Kan耐药基因。未发现3组sgrna对受体菌生长有明显影响。结论特异性CRISPR／Cas9系统可抑制细菌Kan耐药基因的水平转移。

摘要：目的利用链特异性逆转录聚合酶链式反应(strand-specific reverse transcriptase-polymerase chain reaction,strand-specific RT-PCR)方法,检测超保守rna uc.12+A及其宿主基因SFPQ在小鼠B淋巴瘤细胞(38B9、myc3)中的表达水平,并与普通RT-PCR方法相比较。方法根据uc.12+A的序列设计链特异性逆转录引物,以小鼠B淋巴瘤细胞的rna为模板进行反转录获得c DNA。随后通过实时荧光定量PCR技术,检测uc.12+A在小鼠B淋巴瘤细胞中的表达水平,并与普通RT-PCR的表达结果进行对比。在同样的淋巴瘤细胞株中通过RT-PCR与western blot检测宿主基因SFPQ的表达。结果在小鼠B淋巴瘤细胞株中,sfrand-specific RT-PCR检测到的uc.12+A表达较普通RT-PCR检测到的水平低,2种方法检测的uc.12+A在小鼠B淋巴瘤细胞中表达均显著高于小鼠正常B细胞中的水平。SFPQ在B淋巴瘤细胞中的表达亦显著高于正常B细胞。结论 uc.12+A与宿主基因SFPQ在小鼠B淋巴瘤细胞中的表达显著增高。