摘要：为探究大豆卵磷脂(SL)对湖羊精液4℃保存效果的影响,在湖羊精液基础稀释液中添加不同浓度(0、0.1%、0.2%、0.3%和0.4%)的SL进行4℃低温保存试验,通过在不同保存时间(0~6 d)对精子活率、活力、直线速率、曲线速率、路径速率、质膜完整率和顶体完整率进行测定,确定湖羊精液低温保存稀释液中SL的最佳添加浓度。结果表明:保存2、5、6 d,0.1%SL组的精子活率、活力均显著高于其他组(P<0.05);保存3 d,0.1%SL组的精子直线速率显著高于其他组(P<0.05);保存4 d,SL各组的精子曲线速率和路径速率显著高于对照组(P<0.05);保存1、5 d,0.1%SL组的精子质膜完整率显著高于其他组(P<0.05);保存2、6 d,0.1%SL组的精子顶体完整率显著高于其他组(P<0.05)。结论:在低温保存条件下,添加0.1%SL可以有效地延长湖羊精子的存活时间,提高精液质量。

摘要：α-硫辛酸(ALA)是一种高效的生物抗氧化剂,为探究4℃保存条件下在精液稀释液中添加ALA对湖羊精液品质的影响及可能的作用机理,本实验采集3只健康湖羊精液样本,在精液稀释液中分别添加0、0.025、0.05、0.1、0.5mmol/L的ALA,其中0mmol/L ALA组为对照组,检测精子活力、运动性能、结构完整性、活性氧(ROS)以及丙二醛(MDA)含量指标,确定最佳的添加浓度。结果表明:与对照组相比,外源添加适宜浓度的ALA能够显著提高精子活力、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、路径速率(VAP)和质膜完整率等指标。随着ALA添加量的增加,精子活力、运动性能和质膜完整率呈现先上升后下降的趋势,当添加浓度为0.1 mmol/L ALA,效果最好。相对于其他添加浓度,0.1 mmol/L ALA处理组的ROS和MDA含量显著降低,减少精液低温保存过程中氧化应激带来的损伤,对精子具有较好的保护作用。本实验结果表明在湖羊低温保存精液稀释液中添加ALA通过降低氧化损伤来改善精液品质,其最适宜的添加浓度为0.1 mmol/L。

摘要：旨在研究15℃条件下保存绵羊精液的最适宜稀释比例,获得较好的精液保存效果。试验分别将精液按照1:1、1:4、1:9、1:14、1:19和1:24进行稀释保存,在保存过程中检测精子的活率、活力、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、路径速率(VAP)、侧摆幅度(ALH)、移动角度(MAD)、质膜完整率和顶体完整率。结果显示,保存3~6 d,1:9稀释后的精子活率显著高于其他稀释比例(P0.05)。因此,在本试验条件下,15℃保存绵羊精液最合适的稀释比例是1:9,过高和过低的稀释比例均不利于绵羊精液保存。

摘要：试验旨在研究降温方式及平衡时间对湖羊精液冷冻保存的影响。设计毛巾包裹(1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5h)和37℃水浴(50、100、150、200、250mL)2种降温方式并探究最佳试验条件,在此基础上各自添加冷冻II液后平衡0、0.5、1.5、2.5、3.5 h,并确定最优平衡时间,最后比较2种最优方式下湖羊冷冻精液的精子活率、活力、运动参数、质膜完整率、顶体完整率和活性氧(ROS)含量。结果表明:毛巾包裹降温2.5 h后继续平衡2.5 h组解冻的精子活力高于其他各组(P<0.05);添加200 mL水浴降温至4℃后继续平衡2.5 h组解冻的精子活力高于其他各组(P<0.05);毛巾包裹降温2.5 h后继续平衡2.5 h处理与200 mL水浴降温至4℃后继续平衡2.5 h处理的精子活率、活力、质膜完整率和顶体完整率均不存在显著差异,但毛巾包裹降温处理的精子ROS含低于水浴降温处理(P<0.05)。由此可见,毛巾包裹降温2.5 h后添加冷冻II液继续平衡2.5 h是湖羊精液冷冻保存较适宜的处理方式,湖羊精液冷冻保存效果显著提高。

摘要：为探究安石榴甙对湖羊精液低温保存效果的影响,本实验采集3只1~2岁健康成年湖羊精液,混匀后取5份等量精液,按1:9的比例加入不同安石榴甙浓度(0、5、15、30、45μmol/L安石榴甙)的稀释液,4℃保存7 d。检测精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性等指标。结果显示:保存4~7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子活率、活力显著高于其他各组;保存2~7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子质膜完整率、顶体完整率显著高于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子的MMP显著高于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组精子ROS含量显著低于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液MDA含量显著低于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液CAT活性显著高于其他各组。本研究结果表明,在稀释液中添加30μmol/L安石榴甙可以显著提高精液保存质量。

摘要：为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。将重组载体转染DF-1细胞系,观察其启动活性。利用在线预测网站预测gga-miR-31-5p启动子区域的转录因子结合位点。结果显示,成功克隆出gga-miR-31-5p启动子片段,并成功构建其pEGFP重组载体。体外转染结果表明,该区域具有启动活性,并发现鸡gga-miR-31-5p启动子区域存在RARα、ER、c-Jun、GR等重要转录因子结合位点。研究初步确定了鸡gga-miR-31-5p启动子区域,同时发现该区域存在重要转录因子结合位点,该结果为后续探讨进一步研究gga-miR-31-5p启动子的生物学功能奠定基础。

摘要：研究旨在构建TBX6的过表达和干扰载体,为后续研究TXB6在精原干细胞(Sper⁃matogonial stem cells,SSCs)形成过程中的功能奠定基础。通过qRT-PCR检测TBX6在胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)和SSCs的表达水平,根据NCBI上提供的TBX6 CDS区的序列,设计引物扩增目的片段,将其连接到经线性化的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copG⁃FP-T2A-Puro上,构建TBX6的过表达载体;同时,根据TBX6 CDS区设计三个干扰靶点,在退火后将其连接到经线性化的干扰载体pLVX-shRNA2-puro上,并且进一步将三个干扰载体转染鸡成纤维细胞系(DF-1),观察荧光表达情况并通过qRT-PCR检测其干扰效率。结果显示,TBX6在SSCs上的表达量显著高于ESCs(P<0.05),测序和双酶切验证显示成功构建TBX6过表达及干扰载体;干扰载体转染DF-1细胞后均能稳定表达EGFP荧光蛋白,且shRNA2-TBX6的干扰效果最好。结果表明,TBX6过表达及干扰载体构建成功,且经定量检测后确定shRNA2-TBX6的干扰效果最好。

摘要：为探究褪黑素(melatonin)对铅中毒小鼠卵母细胞质量的的影响,以6~8周龄体况相近的ICR雌鼠卵母细胞为研究对象,将其分为5组,分别为生理盐水对照组及4个铅中毒组,并在铅中毒组的卵母细胞体外成熟培养液中分别添加浓度为0、10^(-5)、10^(-7)、10-9mol·L^(-1)的褪黑素,根据第1极体排出率作为体外成熟的标志,筛选出最佳的褪黑素浓度,再检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、三磷酸腺苷(ATP)水平,最后通过细胞凋亡试验分析褪黑素对铅中毒卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:体外添加1×10^(-7)mol·L^(-1)的褪黑素能显著降低铅中毒小鼠的ROS水平和早期细胞凋亡率,显著提高第1极体排出率及GSH、ATP含量。综上,在培养液中添加1×10^(-7)mol·L^(-1)的褪黑素能在体外成熟过程中显著改善铅中毒雌鼠卵母细胞的质量。

摘要：为研究低温环境下不同稀释液对湖羊精液保存效果的影响,本实验采用假阴道法采集精液样本,经品质检查筛选出合格精液,分别用A、B、C、D、E 5种低温保存稀释液按1:10的比例进行稀释,保存在4℃环境条件下,每隔12 h检测分析精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)和路径速率(VAP)等指标。结果表明:精液经稀释液C(果糖-柠檬酸钠-卵黄)低温保存后的各项指标下降最为缓慢;自保存12 h开始,稀释液C的精子质膜完整率高于其他各组(P<0.05);在保存24~36 h时,稀释液B、C、D的VCL和VAP均高于其他2组(P<0.05);保存60~72 h时,稀释液B、C和D的顶体完整率高于其他2组(P<0.05);随着时间的推移,C组稀释液的优势逐渐明显,当保存60~120 h时,稀释液C的精子活率和精子活力高于其他4种稀释液(P<0.05)。因此,稀释液C对湖羊精液的4℃低温保存效果较好。

摘要：为探究稀释倍数对湖羊精液4℃保存的影响,本实验使用3只1~2岁体况良好的公羊,将采集的精液稀释2、5、10、15、20、25倍后,检测4℃保存过程中精子活率、活力、运动速率以及质膜完整性和顶体完整性。结果表明:保存3~5 d,10倍稀释保存的精子活率和活力显著高于其他各组;保存1~4 d,25倍高倍稀释的精子活力下降最快,且显著低于其他组;保存1~3 d,10倍稀释保存的精子曲线速率(VCL)和路径速率(VAP)显著高于20和25倍稀释组;保存期间,10倍稀释保存的精子质膜完整性最高,且在第4天显著高于其他组;保存3~5 d,5和10倍稀释保存的精子顶体完整性显著高于15~25倍稀释组。因此,在本实验条件下,5~10倍为湖羊精液4℃保存的最适宜稀释倍数,过低或者过高的稀释倍数都不利于湖羊精液4℃保存。