摘要：在单因素试验的基础上,利用响应曲面法对桑黄多糖提取工艺参数进行优化研究。响应曲面分析结果表明:提取温度、提取时间及水料比与响应值桑黄多糖得率存在显著的相关性。通过典型性分析得到优化桑黄多糖提取条件:提取温度为97.76℃,提取时间为2.62 h,水料比为32.3∶1,在此条件下桑黄多糖得率理论值达到12.35%,验证试验条件下实际最大桑黄多糖得率为(12.05±0.3)%,与理论值相差0.3%。

摘要：【目的】microRNA是一类长度为21~23 nt的非编码小分子RNA,对动植物的正常发育具有非常重要的调节作用。水稻Os-miR390的功能可能与生长素应答相关,拟采用转基因方法研究其生物学功能。【方法】根据水稻Os-miR390的前体RNA结构特点合理设计引物,从水稻基因组中克隆出其前体DNA片段,将其构建在玉米UbiI启动子驱动的表达载体中,并转入水稻。【结果】利用PCR成功地从水稻基因组中扩增出了Os-miR390前体基因,并将其构建在UbiI水稻组成型启动子下。经农杆菌介导,将其成功转入水稻愈伤,获得抗性幼苗,经过PCR检测,得到阳性转基因植株。【结论】T0代转基因植株表现叶片黄化的特征,待T1至T2代性状稳定后结合研究靶基因可深入研究其功能。

摘要：利用鹅Myostatin基因3个外显子设计4对引物,分析扬州鹅、皖西白鹅和五龙鹅3个品种鹅的Myostatin基因编码区的单核苷酸多态性。结果表明:鹅该基因编码区高度保守,仅第3外显子的第263 bp处检测到由A→C的单碱基"沉默"突变,该突变位点仅检测到AA、AB 2种基因型,且杂合子频率极低(2.5%),皖西白鹅群体未能检测到AB型个体。对五龙鹅群体的初步分析发现,AB型个体具有较高的产肉性能,但因所检测到的杂合子个体数较少,故该位点各基因型与生产性能间的关系有待于进一步研究证实。

摘要：根据鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌fliC基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约600bp的产物,用Hin6I对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌的生物型。利用该技术对6株鸡白痢沙门氏菌标准株及2株鸡伤寒沙门氏菌标准株进行分子鉴别,得到的结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行。在此基础上对我国不同地区、不同年代的191株鸡沙门氏菌进行分子鉴别,191株中有185株分离株符合鸡白痢沙门氏菌的RFLP模式,6株分离株符合鸡伤寒沙门氏菌的RFLP模式,其中有176株PCR-RFLP鉴定结果与生化特性符合率达100%,另有15株根据生化特性不能鉴别。

摘要：从60Co辐射诱变的Kitaake突变体库中筛选到一份心白胚乳突变体M30,其糙米的粒宽、粒厚和粒重显著降低;米粉中的总淀粉含量显著降低,但贮藏蛋白含量显著升高。与野生型相比,突变体淀粉的直链淀粉组分和热浆黏度、崩解值、最终黏度及糊化温度显著降低。突变体胚乳中央复粒淀粉明显减少,含有大量小的单粒淀粉,且淀粉粒之间间隙较大。利用M30/Dular的F2群体中不透明极端个体将突变基因定位到第10染色体的64.9 kb区间,该区间含有7个开放阅读框(ORF),其中ORF4编码水稻丙氨酸转氨酶1 (OsAlaAT1)。测序发现定位区间内突变体只有OsAlaAT1基因序列上缺失872 bp。在突变位点设计的InDel标记可与定位群体中的不透明极端个体发生共分离,而22个常规水稻品种中不含该突变位点。荧光定量PCR技术检测发育胚乳中淀粉合成相关基因的表达,结果显示突变体胚乳中AGPS1、AGPL2、GBSSI、SSI、SSIIa、SBEI、SBEIIa、ISA1和PUL的表达量显著低于野生型。

摘要：利用家鹅Myostatin基因第1外显子设计上游引物,第2外显子设计下游引物,两两配对形成4对引物,PCR法首次获得家鹅该基因内含子1全长2106bpDNA序列。该序列碱基组成中,A+T含量为61.21%,G+C为38.60%,另有4个碱基的序列未检出;比对发现其与家鸡的同源性高达82.7%。利用10个物种Myostatin内含子1构建的基因进化树表明,功能基因的非编码区能够为物种进化提供一定信息。

摘要：根据水稻数据库中过氧化氢酶基因编码序列设计引物,克隆水稻Os CATA基因全长序列,构建无自激活活性的p GBKT7-Os CATA诱导重组质粒,采用酵母双杂交系统筛选水稻2周龄叶片c DNA文库。结果表明,对84个阳性克隆测序,比对分析得到13种可能与Os CATA基因存在相互作用的蛋白质,这些蛋白与叶绿素合成前体、胁迫相应蛋白、核糖体蛋白、外膜蛋白、分泌蛋白、ATP酶和G蛋白β亚基等相关。不同时期过氧化氢酶基因表达分析显示,Os CATA基因在幼苗期和抽穗期表达较高,Os CATB基因在乳熟期和完熟期中表达较高,Os CATC基因在幼苗期和扬花期表达较高。

摘要：根据水稻数据库中乙醇酸氧化酶(GLO)基因的编码序列,设计引物,克隆了水稻OsGLO3基因的序列,该片段长1 104bp,编码367个氨基酸,含有11个外显子。荧光定量PCR结果表明:OsGLO4在不同水稻生育期中表达量差异较大,且OsGLO1和OsGLO4在生长发育后期表达量较高,OsGLO2和OsGLO5在生长发育前期表达量较高。

摘要：目的：制备苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒PK-1抗体，利用抗体分析PK-1在病毒感染过程中的亚细胞定位。方法：根据pk-1基因序列设计引物，扩增全长序列，将其克隆到原核表达载体pMal—c2x。利用原核表达目的蛋白质，将产物进行亲和层析，获得纯化蛋白。将纯化的融合蛋白免疫兔子制备抗血清，利用PK-1抗血清进行免疫荧光分析PK-1在病毒感染过程中的亚细胞定位。结果：成功原核表达并纯化PK-1融合蛋白，获得PK-1兔多克隆抗血清，并确定了PK-1在病毒的感染过程的亚细胞定位。结论：在杆状病毒感染后的16h，PK-1主要定位在细胞质中，随后扩散到细胞核中，在感染后24h分布在整个细胞中，到感染后48～72h，PK-1又重新定位在细胞质中，这些结果为进一步分析PK-1的功能奠定了基础。

摘要：根据GenBank公开序列自行设计一对引物,通过RT-PCR扩增出小鼠肝炎病毒的全长S1基因,并将其插入真核表达质粒pVAX1中,构建出重组真核表达质粒pVAX1-S1。将重组质粒转染COS-7细胞,采用间接免疫荧光检测出S1蛋白的体外表达。将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,构建出运送DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1)。分别以5×108CFU、1×109CFU、2×109CFU剂量的重组菌口服接种6周龄BALB/c小鼠,试验结果表明,重组菌对小鼠具有良好的安全性。以1×109CFU剂量的重组菌口服免疫小鼠,抗体检测结果显示,在二免后两周和三免后两周,重组菌免疫组的血清抗体水平与SL7207(pVAX1)空载体免疫组间分别存在显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01)。在三免后两周重组菌免疫组出现了较高水平的肠黏膜抗体。