摘要：目的通过构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,探讨慢病毒携带的shRNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶(HPA)基因表达的沉默作用。方法采用RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以乳腺癌HPA基因为靶基因,将构建5对shRNA重组慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western印迹检测HPA-shRNA对MDA-MB-231细胞HPA蛋白表达水平的影响;用CCK-8的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞的生长抑制作用及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌细胞的杀伤作用,运用transwell实验检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。进一步,运用流式分析的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞周期的影响。建立小鼠转移瘤模型,检测HPA-shRNA在体内对乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果成功构建HPA-shRNA重组慢病毒载体。在体外,实验组HPA-shRNA1组、HPA-shRNA3组、HPA-shRNA4组有效沉默了人乳腺癌MDA-MB-231细胞HPA的表达,HPA蛋白表达明显降低(P<0.05)。HPA-shRNA1对乳腺癌细胞的生长具有良好的抑制作用,HPA-shRNA1能够增加乳腺癌细胞对5-Fu的敏感性。此外,HPA-shRNA1能够诱导乳腺癌细胞在S期发生细胞周期阻滞。在体内,HPA-shRNA1组HPA基因mRNA相对表达量明显低于阴性对照组(P<0.05),HPA-shRNA1能够沉默乳腺癌移植瘤HPA mRNA表达。在体内HPA-shRNA1同样能够抑制乳腺癌细胞生长。结论 HPA-shRNA重组慢病毒载体可有效抑制乳腺癌HPA基因的表达,进而发挥良好的抗肿瘤作用。

摘要：目的探索乙酰肝素酶短发夹RNA(HPA-shRNA)对乳腺癌细胞的抗肿瘤作用。方法根据RNA干扰(interfering RNA,RNAi)序列设计原则,以乳腺癌HPA基因为靶基因,构建shRNA重组慢病毒表达载体,通过Western-blot检测HPA-shRNA的敲降作用;通过CCK8实验观察HPA-shRNA对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长增殖的影响;运用Transwell实验检测HPA-shRNA对乳腺癌MDA-MB-231侵袭能力的影响。结果经测序分析证实HPA-shRNA1重组慢病毒载体构建成功;在MDA-MB-231细胞内,HPA-shRNA1有效降低了HPA蛋白的表达水平(P<0.05);通过体外实验证明了HPA-shRNA1能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长增殖及侵袭能力。结论 HPA-shRNA1重组慢病毒载体可有效抑制HPA在乳腺癌细胞中的表达,并且证实HPA-shRNA对MDA-MB-231乳腺癌细胞具有良好的抗肿瘤作用。

摘要：目的:以乙酰肝素酶(HPA)基因为靶点,构建短发夹RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,研究慢病毒携带的sh RNA对乳腺癌HPA基因表达的抑制作用。方法:以乳腺癌HPA基因为靶基因,根据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,通过构建3对sh RNA重组慢病毒的表达载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,在体外采用蛋白质印迹(Western blot)法检测HPA基因蛋白表达水平;在体内构建乳腺癌模型,通过免疫组化检测HPA基因蛋白的表达。结果:在体外实验中,HPAsh RNA-1组和HPA-sh RNA-2组均有效抑制了人乳腺癌MDA-MB-231细胞HPA的表达。在体内实验中,HPA-sh RNA-2组HPA基因蛋白的表达明显低于阴性对照组及空白对照组,HPAsh RNA-2组阳性率与空白对照组比较,差异有统计学意义(x2=12.504,P<0.05)。表明在体内实验中HPA-sh RNA-2组可以下调HPA基因蛋白表达。结论:以HPA为靶点构建sh RNA重组慢病毒载体,体内外实验均能下调乳腺癌HPA基因的表达,可为乳腺癌靶向治疗提供新的靶点。