摘要：目的 对2个携带单一杂合致病突变的苯丙酮尿症(PKU)家系进行全外显子组测序,探讨PAH基因突变情况,并进行产前诊断。方法 2023年3月郑州大学第一附属医院行基因检测与产前诊断的2个PKU家系。家系1先证者,男,7岁,出生后发育迟缓,新生儿期严重黄疸,脑部CT检查示脑白质脱髓鞘,血清苯丙氨酸水平增高,外院基因检测发现PAH基因c.1068C>A(p.Y356X)单杂合突变。家系2先证者,女,8岁,出生后新生儿筛查为PKU,外院基因检测发现PAH基因c.611A>G(p.Y204C)单杂合突变。采集2个家系先证者及其父母外周静脉血,母亲再次妊娠后于18周行羊膜腔穿刺术抽取羊水,提取DNA行全外显子组测序。在PubMed数据库检索相关文献,将新发现的致病突变位点区域纳入目标区域,采用叠瓦式多层探针设计方案进行探针设计和捕获测序。选择人类基因组参考序列GRCh37,对全外显子组测序结果注释分析,筛选得到候选致病突变位点。利用dbSNP数据库检索候选位点突变的数据库收录和致病性,通过基因组整合数据库gnomAD查询该突变的人群频率。依据美国医学遗传学与基因组学学会遗传突变分类标准与指南,对突变进行致病性分级和判定。采用PCR扩增和Sanger测序方法验证先证者父母候选突变位点携带情况,并对胎儿进行产前诊断。结果 (1)家系1先证者为PAH基因c.1068C>A(p.Y356X)和c.1065+241C>A复合杂合突变,家系2先证者为PAH基因c.611A>G(p.Y204C)和c.1065+241C>A复合杂合突变。(2)PAH基因c.611A>G(p.Y204C)和c.1068C>A(p.Y356X)均是PKU的致病热点突变。PAH基因c.1065+241C>A位点在dbSNP数据库中无记录,不属于多态性位点,人群发生频率极低,gnomAD数据库未查询到该突变在人群中的发生频率。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传突变分类标准与指南,PAH基因c.1065+241C>A判定为致病性突变(Pathogenic, PM3_Very Strong, PP4_Moderate, PM2_Supporting)。(3)2个家系先证者Sanger验证结果与全外显子组测序结果一致,其父母均为相关致病突变基因的携带者;家系1胎儿为PAH基因c.1065+241C>A杂合突变携带者,家系2胎儿为PAH基因c.611A>G(p.Y204C)杂合突变携带者。结论 针对目标区域进行多层探针设计,根据文献及时更新全外显子组测序的目的区域,有助于全外显子组测序检出PAH基因深度内含子区致病突变。