摘要：本试验旨在探究榆荚仁黄酮对慢性睡眠剥夺小鼠的抗氧化作用。将42只4周龄无特定病原体(SPF)级雄性ICR小鼠按体质量随机分为7组,分别为空白对照组、模型对照组、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)对照组、阳性对照组以及榆荚仁黄酮高、中、低浓度组,每组6只,组间体质量差异不显著(P>0.05)。除空白对照组外,其他6组小鼠使用改良多水平台睡眠剥夺法构建慢性睡眠剥夺模型,造模成功后按照如下设计灌胃4周:榆荚仁黄酮低、中、高浓度组分别灌胃30、60和120 mg/(kg BW·d)的榆荚仁黄酮;空白对照组灌胃等量的生理盐水;阳性对照组灌胃300 mg/(kg BW·d)的褪黑素;模型对照组灌胃等量的生理盐水;CMC-Na对照组灌胃等量的0.5%CMC-Na溶液。采用相关试剂盒测定小鼠肝脏、大脑以及十二指肠中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性和总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量PCR法测定小鼠肝脏、大脑及十二指肠中抗氧化基因SOD-1、SOD-2、GPX-1、GPX-4的mRNA相对表达量。结果显示:高、中、低浓度的榆荚仁黄酮均可显著增强慢性睡眠剥夺小鼠大脑、肝脏、十二指肠中SOD、GPX活性和T-AOC(P<0.05),显著降低大脑、肝脏及十二指肠中MDA含量(P<0.05),显著提高大脑、肝脏及十二指肠中SOD-1、SOD-2、GPX-1、GPX-4的mRNA相对表达量(P<0.05)。综上所述,榆荚仁黄酮可显著提高慢性睡眠剥夺小鼠体内抗氧化酶的活性及相关基因表达,减轻慢性睡眠剥夺小鼠的氧化应激损伤。

摘要：植物硝酸盐转运蛋白(Nitrate transporter,NRT)可有效调节与转运NO-3,提升氮素利用效率。分析草地早熟禾硝酸盐转运蛋白NRT2.4基因在不同氮素浓度下的表达规律,旨在揭示硝酸盐转运蛋白NRT2.4基因在氮素调控中扮演的角色。以草地早熟禾为材料,首先设计特异引物,利用RT-PCR技术克隆得到草地早熟禾NRT2.4基因cDNA序列,其长度为1694 bp,包含一个1257 bp的CDS区,编码418个氨基酸序列,属于Nitrate/nitrite transporter NarK超级家族1,与二穗短柄草、节节麦NRT2.4基因高度同源。第6,7个跨膜区之间有一段MFS家族所特有的序列特征:G-X3-D-X2-G-X-R,第4个跨膜区有典型的NO-3/NO-2转运载体特征序列:A-G-W-G/A-N-M-G,第8个跨膜区之后含有保守的蛋白激酶C识别基序(S/T-X-R/K):SKR。利用qRT-PCR方法,测定草地早熟禾NRT2.4基因表达水平存在组织特异性,叶部表达量最多,硝态氮利于NRT2.4基因的表达,氮饥饿和高浓度NaNO3水培液处理均利于NRT2.4基因的表达。上述结果为草地早熟禾硝酸盐转运蛋白NRT2.4在草坪草抗逆基因工程中的应用提供理论依据。

摘要：目的:采用CRISPRi技术沉默人肺癌A549/DDP细胞MRP1基因表达,观察细胞对顺铂敏感性的变化。方法:采用生物信息学软件分析MRP1启动子序列,设计合成3对sgRNA干扰片段,定向克隆到pSPgRNA载体中,构建靶向MRP1的干扰表达载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞。实验共分为5组,分别为A549/DDP细胞组,Scrambled组,sgRNA-MRP1-1组,sgRNA-MRP1-2组和sgRNA-MRP1-3组,每组设置3个复孔,处理48 h后进行后续实验。通过qRT-PCR和Western blot检测MRP1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞对药物的敏感性,激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态变化。结果:成功构建了sgRNA-MRP1-1、sgRNA-MRP1-2和sgRNA-MRP1-33种干扰载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞后,均能显著降低细胞MRP1基因表达(P<0.01),其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好,MRP1 mRNA水平降低了72%,蛋白水平降低了53%。将sgRNA-MRP1-2转染细胞后,细胞对顺铂的敏感性显著增加,IC值由74.26±3.71降低至34.29±2.51,细胞形态由梭形变为椭圆形,染色质高度凝聚、边缘化,产生凋亡小体。结论:成功构建3种靶向MRP1的干扰表达载体,均能有效沉默A549/DDP细胞中MRP1基因表达,可增强细胞对顺铂的敏感性。

摘要：目的:探讨利用CRISPRi下调MDR1基因表达增强肺腺癌A549/DDP细胞对顺铂敏感性的作用。方法:利用生物信息学技术预测MDR1基因启动子上潜在的CRISPRi干扰位点,设计干扰片段并构建重组载体,采用qRT-PCR、Western blot方法检测各组细胞中MDR1基因mRNA以及蛋白表达水平,筛选干扰效率高的重组载体进行后续实验。将人肺癌A549/DDP细胞分为3组,分别为A549/DDP、Scrambed、sgRNA-MDR1-1,每组设置3个复孔。将各载体转染细胞48 h后,流式细胞术检测各组细胞外排情况,MTT法检测各组细胞的IC 50值,激光共聚焦显微镜下观察各组细胞经顺铂处理后的细胞形态。结果:经测序比对,成功构建两种干扰MDR1基因转录的CRISPRi重组载体。转染A549/DDP细胞后,各转染组细胞MDR1基因mRNA以及蛋白水平均显著降低(P<0.01),其中sgRNA-MDR1-1的干扰效率最高,mRNA和蛋白水平干扰效率分别达60%和51%。与Scrambed组相比,转染sgRNA-MDR1-1组细胞的细胞外排能力降低(P<0.01),细胞对顺铂的IC 50值显著降低(P<0.01),细胞内染色质聚集边缘化。结论:利用CRISPRi技术干扰MDR1基因表达能增强肺腺癌A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

摘要：为了研究猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白(M蛋白)亲和肽的病毒亲和性,建立快速有效的TGEV检测方法,设计了1条含有TGEV M蛋白亲和肽的串联基因,核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工基因合成获得了含有M蛋白亲和肽基因的重组质粒pUC57-MQHT。然后,根据合成基因的序列,设计合成了1条特异性引物,以pUC57-MQHT为模板,通过PCR获得了150 bp的TGEV M蛋白亲和肽基因。亲和肽基因通过Bam HⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1,获得重组质粒pET-32a-MQHT和pGEX-6p-MQHT。重组质粒经Bam HⅠ单酶切和Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-MQHT和GST-MQHT,分子质量分别为25,31 ku。切胶纯化后,重组蛋白TRX-MQHT和GST-MQHT分别经His标签单克隆抗体和GST标签单克隆抗体鉴定,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白。Western Blot分析表明,2种重组蛋白可与TGEV特异性结合。Dot-ELISA分析表明,在TGEV滴度为1×10 3,5×10 2,2.5×10 2 TCID50/mL时2种重组蛋白都可显示出阳性反应,而在1.25×10 2 TCID50/mL滴度时无可见斑点,具有良好的TGEV亲和性。阻断试验表明,1∶100或1∶200稀释的TGEV阳性血清可完全阻断TGEV H株(1×10 5 TCID50/mL)与2种重组蛋白的结合,特异性良好。为建立TGEV诊断方法奠定了一定的理论和物质基础。

摘要：为探讨ARCS即注意(attention)、切身性(relevance)、自信心(confidence)和满意度(satisfaction)动机设计模式在高中生物学课堂教学中实施的可行性和实用性,采用该模式进行教学干预,针对“细胞膜的结构和功能”教学内容,从ARCS动机设计模式4个要素进行教学设计,并对教学效果进行分析评价。研究结果显示,ARCS动机设计模式在激发学生学习动机、促进学生自主学习和科学探究能力、培养及提高学习成绩方面均表现出显著效果。

摘要：采用单因素变量和不同激素组合设计,观察不同激素配比对甘草(Glycurrihiza uralensis Fisch.)带芽茎段诱导丛生芽的影响。结果表明,诱导丛生芽的最佳激素组合为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT,其丛生芽的平均增值倍数达到(5.00±1.61)倍。适宜的激素配比有利于甘草带芽茎段诱导丛生芽,为甘草快速繁殖技术的应用提供理论和技术依据。

摘要：通过正交试验研究了不同浓度(0～0.5 mg/L) NAA、不同浓度(0.5～2.0 mg/L) 6-BA、不同鳞片层次(外层、中层、内层)及不同鳞片部位(上部、中部、基部)对香水百合试管鳞茎诱导的影响,并优化了诱导试管鳞茎的组织培养条件。结果表明:各因素对诱导试管鳞茎的影响大小为NAA>6-BA>鳞片层次>鳞片部位;试管鳞茎诱导的最佳组合条件是MS基本培养基+0.1 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+中层鳞片+鳞片中部部位,在此条件下诱导香水百合试管鳞茎,诱导率达到100%,平均分化数达到4.89。

摘要：利用CRISPRi技术构建靶向MRP1的干扰载体,采用生物信息学分析MRP1的启动子序列,设计并合成3对sgRNA干扰片段,构建3种靶向MRP1的干扰表达载体,分别转染A549和A549/DDP细胞后,通过qRT-PCR和Western blot方法检测MRP1 mRNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞对川楝素的敏感性,激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态学变化.结果表明,基因测序证实成功构建了3种干扰载体,分别转染干扰载体至A549/DDP细胞48 h后MRP1 RNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好;将sgRNA-MRP1-2转染并使用60 nmol/L川楝素处理后,细胞对川楝素的敏感性显著增加,IC50值显著降低(P<0.01),细胞形态由梭形变为椭圆形,染色质高度凝聚、边缘化.

摘要：实施乡村振兴战略,是我国解决“三农”问题的重要举措,是对现代农业的发展与创新的思考。观光农业是将农业特色与旅游资源整合发展形成的交叉产业。本文通过回顾观光农业的发展简史,分析了我国观光农业与国外观光农业发展历程的不同。通过观光农业园区规划布局的原则和思路、设计内容和园区类型,分析了不同地域的农业特色与旅游资源和文化现象的整合过程。旅游活动为观光农业提供了展示的平台和新的消费者;观光农业为旅游活动提供了新的亮点;此种交叉产业为社会提供了更多投资和就业的机会。观光农业带来经济效益的同时,也出现了较多问题,如观光农业园区重复资源利用率低、园区营销具有淡旺季和农业特色不突出等。进一步综述了观光农业园区规划的发展现状与对策,并提出了建议,以便促进乡村振兴战略下观光农业产业发展。