摘要：为有效鉴定高鼻羚羊(Saiga tatarica)源性成分,基于细胞色素c氧化酶亚型Ⅰ基因设计特异性引物对高鼻羚羊角、高鼻羚羊角粉,以及与其种属相近或形态学相似的动物角和动物组织的DNA进行PCR扩增,对扩增产物进行桑格测序和序列分析,并对高鼻羚羊的物种分类问题进行探讨。结果表明:所有对照样品均未见扩增条带,阳性样品与NCBI基因数据库参考序列的相似性均大于99.42%,说明桑格测序法能准确鉴定高鼻羚羊成分,但由于证据不足,无法明确该方法能否进一步区分高鼻羚羊与蒙古高鼻羚羊(***)。

摘要：目的建立重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)法快速、灵敏、特异检测食品中铜绿假单胞菌的分析方法。方法针对铜绿假单胞菌lasB基因的特异性保守区域,设计RAA特异性引物和exo探针,筛选出最优组合;对提取的目标基因组DNA进行检测,确定方法的特异性和灵敏度,并通过人工污染实验,比对不同检测方法对食品样品的检出限。结果建立的铜绿假单胞菌lasB基因RAA检测方法特异性良好,仅对铜绿假单胞菌有扩增曲线,对其他致病菌无交叉反应;方法对纯菌液的灵敏度为1.7 pg/μL。人工污染实验表明,方法对肉类样品中铜绿假单胞菌的检出限与传统方法一致,达1.0×103CFU/mL;RAA方法检测时间仅需20min。结论本研究建立的铜绿假单胞菌实时荧光RAA检测方法特异性强、灵敏度高、反应时间短,可用于食品中铜绿假单胞菌的快速检测。

摘要：为了建立一种特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(ASFV)快速检测方法,试验针对ASFV B646基因保守片段设计并合成特异性crRNA(crRNA1、crRNA2、crRNA3),并根据crRNA所在的基因序列区域设计重组酶聚合酶扩增(RPA)引物(RPA1-F/RPA1-R、RPA2F/RPA2-R),通过筛选最佳RPA引物-crRNA序列组合和crRNA浓度建立ASFV的RPA-CRISPR-Cas12a快速检测方法,在评估该方法的特异性和灵敏度后对ASFV阳性临床样本进行验证。结果表明:最佳RPA引物-crRNA序列组合为RPA2-crRNA3,最佳crRNA浓度为5μmol/L;该方法仅能检测出ASFV,不能检测出猪瘟病毒(CSFV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2),特异性良好;最低检测病毒浓度为5.8 copies/μL,灵敏度较高;应用该方法对20份ASFV阳性临床样本进行检测,结果均为阳性,符合率为100%。说明成功建立了ASFV的RPA-CRISPR-Cas12a快速检测方法,该方法特异性好、灵敏度高,可用于ASFV的现场快速检测。

摘要：降香为豆科黄檀属植物降香檀(Dalbergia odorifera,T. Chen)树干和根的干燥心材,具有极高的药用价值,市场需求大。但降香檀自然生长缓慢,资源十分短缺,导致药材市场混伪品不断出现。本文以降香及其7种常见混伪品为研究对象,依据其基因组序列的特点,设计出适用于降香检测的实时荧光PCR的特异性引物和探针,建立了中药降香的快速实时荧光PCR定性检测方法,并对建立的方法进行特异性和灵敏度验证。结果显示,特异性引物和探针仅对降香檀样品有特异性扩增,其他7种黄檀属近似种的样品均未扩增出荧光曲线,检测限度为0.001 ng/μL,最适检测浓度为0.01~100 ng/μL。结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、检测周期短,可用于降香药材及其产品的快速鉴定和分析。

摘要：猪流行性腹泻病是一种急性传染病,在我国各省均有发生,幼龄猪的发病率和死亡率较高。本研究拟建立一种能够快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光RT-LAMP方法,为早期诊断和治疗提供技术支持。根据GenBank公布的猪流行性腹泻病毒核蛋白基因设计一套特异性LAMP引物,使用荧光PCR仪对待检样品进行检测,根据扩增结果判断所检测样品是否含有猪流行性腹泻病毒。除已确诊为猪流行性腹泻病的病猪样品外,其余参考样品在本方法中均未出现特异性扩增曲线,检测下限为102拷贝的质粒模板,病猪小肠样品的阳性检出率为100%。本研究建立的方法特异性强、灵敏度高、检测速度快,可广泛应用于猪流行性腹泻的快速筛查及实验室检测。

摘要：南松大小蠹是我国重要的一种检疫性有害生物,我国在进口木材检疫中多次截获这种昆虫,但传统的形态学鉴定方法难以对部分虫态如卵、幼虫及残缺的成虫进行准确鉴定。为了对南松大小蠹进行快速准确地鉴定,本研究根据mtDNA COI基因序列设计了一组特异性引物和TaqMan-MGB探针,结合TaqMan实时荧光定量PCR技术,验证了其特异性引物对和探针组合的特异性。结果表明:以黄杉大小蠹、红脂大小蠹、红翅大小蠹、华山松大小蠹、黑脂大小蠹和钝贵小蠹作为对照,仅南松大小蠹存在特异性扩增曲线;同时灵敏度检测结果显示当DNA模板浓度≥0.0088 ng/μL时可产生南松大小蠹特异性荧光信号,成功实现了对南松大小蠹的快速、准确的分子鉴定。

摘要：为研究能够同时检测PEDV、TGEV、PoRV三种猪病毒性腹泻病原的方法,分别设计三套特异性的引物和探针,建立了基于Taqman探针的三重Real-Time RT-PCR检测方法,实验结果表明,该方法特异性好,灵敏度高,检测最低浓度为10 copies/μL数量级.应用该方法对广东11个地市的44份猪腹泻样品进行检测,其中PEDV阳性率为100%,TGEV、PoRV阳性率为0,证明PEDV是引起广东地区猪病毒性腹泻的重要病原.

摘要：目的建立一种基于数字微流控RT-qPCR芯片技术的上呼吸道易感病毒多靶标快速检测方法。方法根据新型冠状病毒(2019-nCOV)、甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、冠状病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的保守区域,设计特异性引物和检测探针,通过将引物和探针预存到数字微流控芯片中,建立检测上述5种上呼吸道病毒的数字微流控RT-qPCR芯片检测技术;评价预存了引物的数字微流控RT-qPCR芯片的检测下限和特异性;使用20例临床样本以PCR仪检测结果作为对照组评价数字微流控RT-qPCR芯片的检测性能。结果建立的2019-nCOV、FluA、FluB、SARS-CoV、MERS-CoV的数字微流控RT-qPCR芯片检测下限为12拷贝/反应,而未使用数字微流控的RT-qPCR法检测下限为15拷贝/反应,两个方法的检测下限基本一致。对于临床样本提取的核酸样品,数字微流控RT-qPCR芯片检测结果均是阴性无非特异性扩增。同时使用RT-qPCR法和数字微流控RT-qPCR芯片法对20例临床样本分别进行5个项目的临床对比测试,共100个测试,结果显示为数字微流控RT-qPCR芯片灵敏度达94%,特异性为100%。使用SPSS对两个方法进行一致性分析,结果显示为两个方法具有高度的一致性(Kappa=0.962,P<0.05)。结论基于数字微流控RT-qPCR芯片技术建立了上呼吸道易感病毒多靶标快速检测方法,为临床早期鉴别呼吸道病原体提供了新的检测手段。

摘要：如今人民生活质量提升,对食品的要求日益提高,食品安全问题得到我国各界人士的密切关注。高效液相色谱法是常用于食品安全检测的'快、狠、准'方法,在食品、医药、生物等学科领域功不可没。笔者将概述此方法在检测食品中的人工合成成分、农药残留、生物性有害物质以及食品中营养物质的应用优势,并指出该法的缺点,加深对高效液相色谱法的应用探究。