摘要：11α,17α-二羟基黄体酮(11α,17α-dihydroxy progesterone)作为甾体激素类药物的重要中间体,其生物合成主要以17α-羟基黄体酮作为底物转化生成。为探究不同微生物对17α-羟基黄体酮的转化能力,以11株具有甾体羟化能力的菌株为研究对象,通过全细胞生物转化实验,筛选得到了一株转化能力最强的菌株亚麻刺盘孢SF-307。通过单因素实验和正交设计进行菌株发酵培养基组分优化,确定了最适发酵培养基:15 g/L可溶性淀粉、1.8 g/L氯化铵、0.6 g/L氯化镁、3 g/L玉米浆。优化培养基后的亚麻刺盘孢SF-307转化产物唯一,当底物投料量为0.5 g/L,添加1%(V/V)乙醇进行助溶,转化56 h时,底物转化率为93.2%,11α,17α-二羟基黄体酮的最高浓度为224.1 mg/L,较优化前提高61.1%。上述结果表明:亚麻刺盘孢SF-307作为一株全新的17α-羟基黄体酮羟化菌株,发酵优化可显著增强17α-羟基黄体酮转化产物的选择性,缩短转化周期,对11α,17α-二羟基黄体酮的工业生产意义重大。

摘要：针对生物脱硫污泥中单质硫回收困难的问题,以生物脱硫系统产生的污泥为实验对象,研究了生物硫污泥的特性。经过测定得到了如下结果:生物脱硫污泥中单质硫的含量为51.2%,蛋白质5%、Na^+8.32%、Ka^+7.47%、Mg^(2+)4.82%、SO_4^(2-)10.5%、Cl^-4.45%和灰分8.24%,单质硫被带电聚合物所包裹。根据污泥的特性,设计了一套高温溶解-低温析出的单质硫回收工艺。生物硫污泥和萃取剂(甲苯/四氯乙烯=5/95)在80℃下萃取30 min,萃取剂的用量为20 m L/g生物硫污泥,萃取完成后高温过滤,滤液在4℃下过夜保存,再次过滤析出的单质硫晶体。单质硫的回收率为91.2%,析出的单质硫纯度可达98%,可以直接用于其他工业。萃取剂重复使用5次后单质硫的回收率仍可达到79.6%。结果表明,高温溶解-低温析出法可有效从含硫化合物产生的生物硫污泥中提取单质硫。

摘要：采用合成生物学与代谢工程技术设计与构建微生物细胞工厂是实现化学品绿色生物制造的重要方法。微生物发酵过程中低产细胞亚群和非生产细胞亚群由于代谢负担轻,更加具有生长优势,会降低产物合成的综合效率。目前,基于响应产物浓度的生物传感器,偶联产物合成与生长的细胞亚群调控系统有助于解决这个问题。综述了细胞亚群调控系统设计和构建的常用方法,重点讨论了目前细胞亚群调控系统存在的问题及其解决策略。

摘要：以SLCTBASE数据库中包含二硫键的 2 15条多肽链作为研究对象 ,统计分析了二硫键的分布特征 .结果表明 ,二硫键的分布很不均匀 ,主要在序列距离较近的 2个半胱氨酸之间形成 ,大部分二硫键是在序列距离小于 70个氨基酸的地方形成 ,并且对某些序列距离有着强烈的偏好 .这一结果对蛋白质工程中引入人工二硫键、进行分子生物学实验设计具有一定参考意义 .

摘要：设计并优化了植物乳杆菌发酵制备高纯度诊断用乳酸脱氢酶的技术路线.从培育的厌氧型植物乳杆菌中粗提乳酸脱氢酶制备液,经过DEAE Sepharose F.F.离子交换层析、PhenylSepharose 6 F.F.疏水层析及Sephadex G-25 Fine凝胶过滤等方法进行分离纯化,比酶活达1 096.8 U/mg,纯度达88%,纯化倍数达到21.4倍,酶活力回收率为53.9%;高效液相色谱和SDS—PAGE电泳结果显示制得乳酸脱氢酶相对分子质量约为80 000,含有两个亚基,每个亚基分子量约为39 000.

摘要：在单因素优化基础上,运用正交试验设计理论,优化氨基甲酸乙酯降解酶产生菌*** JN-A525的产酶条件。优化发酵培养基配方为:葡萄糖20 g/L,牛肉膏10 g/L,KH2PO45g/L、NaCl 1 g/L、KCl 5 g/L;发酵条件为:初始pH 6.0、培养温度32℃、接种体积分数3%、250 mL摇瓶装量70 mL、摇床转速100 r/min,在此优化条件下酶活比优化前提高了3.47倍。对经超声破碎、(Na)2SO4盐析、Superdex G-75凝胶过滤层析步骤初步纯化的酶之底物特异性的研究表明,在模拟黄酒体系下,该酶对尿素和氨基甲酸乙酯有相对强的降解作用,对一些酯类和氨基酸没有降解作用。

摘要：通过正交设计等实验方法,详细的研究了培养基成分、酶系组成、菌龄、渗透压缓冲剂、pH、酶解温度、时间和再生培养方式等多种因素对Fusarium maire原生质体制备和再生的影响。实验结果表明:将Fusarium maire通过先静止2 d再以180 r/min震摇2 d后,以0.6 mol/L的KCl配制的pH为5的复合酶(3 mg/dL溶壁酶、2.5 mg/dL蜗牛酶1、mg/dL溶菌酶和0.5 mg/dL纤维素酶)中,32℃恒温酶解4 h,原生质体制备产量达3.2×107个/mL;纯化后的原生质体在25℃,以0.6 mol/L的蔗糖配制的YCM再生培养基上单层培养,其再生率达8.9%。为今后的通过原生质体融合和诱变研究,构建紫杉醇工程菌奠定了基础。

摘要：通过逐级传代驯化的方式,逐步提高菌体的耐高温性能。经过多次驯化,获得一株耐高温菌株,并且在发酵过程中最大菌浓、产酸率、糖酸转化率均有提高。在此基础上,又对该菌的发酵条件进行了初步优化。首先对发酵温度进行了优化,发现最适发酵温度为36℃。然后又采用Plackett-Burman实验,找出影响发酵最大的三个因素:玉米浆、葡萄糖和磷酸氢二钾。最后又进行了三因素三水平的响应面实验,得到三个重要影响因素的最佳浓度为葡萄糖161.98g/L,玉米浆3.64g/L,磷酸氢二钾1.51g/L。在此培养条件下,用7L罐发酵,最终产酸达114.2g/L,糖酸转化率达61.4%。

摘要：乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶是嗜热厌氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus乙醇代谢途径中的关键酶。根据高同源性的NADP(H)依赖型Ⅱ型乙醇脱氢酶(S-ADH)的序列设计引物,从***200基因组中PCR扩增出编码S-ADH的基因,插入带组氨酸标签的pET-20(b),测序获得基因大小为1 059 bp,并在大肠杆菌JM109(DE3)中表达。表达产物经Ni亲和柱提纯达电泳纯。带组氨酸标签的重组NADP(H)依赖型乙醇脱氢酶具乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶双活性,能将乙酰辅酶A转化成乙醇.带组氨酸标签的重组酶酶学性质为乙醛脱氢酶活性最适值为pH 8.4,最适温度70℃;乙醇脱氢酶活性正、逆反应分别最适pH 8.0,最适T 55℃;最适pH8.9,最适为T 60℃。以乙酰辅酶A(Aceyl-CoA)为底物,该酶的Km为3.32 mmol/L,Vmax为12.5μmol/(***)。***200中双活性S-ADH的首次发现,建立了该菌乙醇代谢途径中从乙酰辅酶A到的乙醇的另一条通路。

摘要：角蛋白酶KerZ1在其最适反应温度60℃下能够有效地催化水解羽毛角蛋白废物,但热稳定性较差。以KerZ1为研究对象,利用蛋白的理性设计来提高其热稳定性。首先,通过分子动力学模拟软件AMBER16以及HotSpot Wizard服务器的B-factor分析预测出KerZ1中对热敏感的柔性环区域;然后,结合β-转角残基的统计分析将引入位置的原有残基替换为保守性较高的氨基酸。结果表明,突变体酶A128D的失活半衰期(t_(1/2))和半失活温度(T_(50))较KerZ1提高了12.32 min和5.8℃。同时,突变体的动力学参数(k_(cat)/K_(m))表征结果显示,其催化效率未受到显著影响。另外,分析突变位点以及周围氨基酸残基的分布,结果表明突变体酶A128D的表面亲水性增加可能是提高其热稳定性的主要原因。该研究通过理性设计柔性环区域提高了角蛋白酶的热稳定性,为推动角蛋白酶的工业化应用奠定了基础。