摘要：体外实验是中药药理学研究不可或缺的方法,但由于中药来源广泛、成分多样、理化性质不稳定等因素阻碍了其体外实验的开展。因此,寻找更为科学、合理的体外药理学研究方法已成为亟待解决的问题。目前中药药理学体外实验常用的方法有直接给药法和间接给药法,间接给药法又包括含药血清/浆法、含药肠吸收液法、含药肝孵育液法等。随着计算机技术和系统生物学的发展,将高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)、组学、网络药理学、计算机/人工智能辅助药物设计等技术与中药体外实验方法相结合,不仅大大降低了科研实验成本,还明显提高了中药药理作用探索、有效成分筛选及药物研发的效率,已逐渐被认可并广泛应用。该文就目前常用的中药药理学体外实验方法及其进展做一梳理,以期为选择合理的研究方法提供帮助。

摘要：《平脉略例》一书在敦煌出土文献中凡三见,即S.5614、P.2115、S.6245,其中以S.5614的文字较为完整。《玄感脉经》一卷,在敦煌出土文献中编号P.3477。此文对《平脉略例》与《玄感脉经》记载的"诊法常以平旦"、持脉轻重、"平人一日一夜一万三千五百息"等三个医学问题进行了考论,梳理了其源流、辨析了其正误、论述了其中医学术价值。

摘要：目的采用皮肤渗透性参数计算、复杂网络分析、分子对接、分子动力学模拟等计算机辅助药物设计结合化学分析、体外生物试验的“干湿”结合策略探究敦煌消痹止痛酊治疗骨关节炎(osteoarthritis,OA)的物质基础。方法选择被实验证实的中药来源的可透皮化合物,利用Schr?dinger软件Qikprop模块进行皮肤渗透性参数计算,建立透皮参数范围标准,并筛选敦煌消痹止痛酊中满足条件的化合物。对敦煌消痹止痛酊进行功效分组,通过靶点反向预测-复杂网络分析-KEGG通路富集分析探讨不同功效组治疗OA的潜在靶点及KEGG通路。采用分子对接的方法对方中符合皮肤渗透性参数范围的成分进行虚拟筛选,挑选化合物进行酶活性测定、ADMET计算、皮肤渗透性测定、细胞试验、外植体试验研究。结果全方得到潜在透皮成分为69个,复杂网络分析结果显示活血组治疗OA的特有靶点主要为VEGFA、IGF1R及HIF-1α等,主要KEGG通路为Ras、RAP1等。清热组治疗OA的特有靶点主要为TLR9、IL-6及ADAMTS5等,主要KEGG通路涉及TNF、NF-κB等信号通路;分子对接-酶活性-细胞试验结果显示,升麻素、欧前胡素和香草酸对COX-2具有抑制活性,可以抑制软骨细胞PGE2的合成。在软骨外植体模型中,升麻素可以有效缓解软骨损伤;体外透皮试验显示,升麻素12 h内皮肤累积渗透量达到128.1μg·cm-2,透皮吸收百分率为28.2%。分子动力学模拟结果显示,升麻素与COX-2的氨基酸残基TYR 355、LEU 384、SER 530形成较为稳定的氢键作用,与PHE 518形成较为稳定的疏水相互作用。结论本研究采用计算机辅助药物设计联合多种化学生物实验技术的“干湿”结合策略初步阐明了敦煌消痹止痛酊治疗OA的物质基础,为外用中药的研究提供参考。

摘要：基于计算机辅助药物设计结合复杂网络分析的研究体系,分析敦煌大补脾汤防治胃癌的潜在作用机制,并通过功效分组探讨其组方规律的科学内涵。通过细胞实验研究大补脾汤冻干粉溶液对胃癌细胞增殖活性的影响;利用TCMSP、TCMID数据库收集大补脾汤化合物成分,Swiss Target Prediction预测化合物潜在作用靶标,DrugBank、GeneCards、TTD、DisGeNET收集胃癌的潜在作用靶标,通过STRING数据库分析潜在作用靶点的蛋白互作。DAVID数据库进行KEGG富集分析;根据功效特点将大补脾汤分为温中组(干姜)、益气组(人参、甘草、白术)、养阴组(麦冬、五味子)和降逆组(旋覆花)4个功效配伍组,利用Cytoscape分别构建“药味-潜在活性成分-关键靶点”网络,分析功效分组配伍规律的科学内涵;采用Schr?dinger软件进行核心成分和核心靶点的分子对接验证,并通过结合模式分析和结合自由能计算挖掘大补脾汤发挥防治胃癌作用的物质基础,通过分子动力学模拟从动力学角度分析核心成药性靶点与代表潜在化合物的相互结合模式。细胞实验证实大补脾汤冻干粉溶液能够下调AGS胃癌细胞线粒体膜电位,使细胞周期被阻滞在G_(0)/G_(1)期(P<0.05),抑制其增殖(P<0.05)。大补脾汤所含4个功效组富集的通路主要分布于机体能量代谢、炎症-免疫系统调节和周期-凋亡功能3个模块,各模块间通过共有靶标基因联结又各有侧重。分子对接结果显示,化合物甘草素、槲皮素、山柰酚、异鼠李素、麦冬高异黄酮A等可能是大补脾汤起效的多靶点成分;雌激素受体1、雄激素受体、ATP结合盒转运蛋白亚家族G2、表皮生长因子受体、糖原合酶激酶3β等靶点与各个潜在活性化合物之间的亲和力较好,可能是大补脾汤防治胃癌的潜在作用靶点,其中山柰酚与成药性靶点EGFR有较好结合能力,具有较好的结合稳定性。本研究基于计算机辅助药物设计结合复杂网络分析策略初步揭示了大补脾汤辅助防治胃癌的物质基础和分子机制,并探讨了大补脾汤不同功效组协同防治胃癌的科学内涵,为其临床应用提供化学生物信息学依据。

摘要：探讨了敦煌医学的文化内涵,提出其特色主要表现在地域性、开放性、多样性、文学性与艺术性,旨在为敦煌医学及其文化的研究提供思路。

摘要：目的:研究景芪愈溃胶囊对脾胃虚寒型胃溃疡大鼠的影响并探讨其机制。方法:将70只SPF级Wistar大鼠按完全随机设计分为空白组和造模组,造模组采用大黄苦寒泻下法+饥饱失常喂养法+改良Okabe法综合因素构建脾胃虚寒型胃溃疡大鼠模型,造模成功后按随机数字表法分为模型组,景芪愈溃胶囊高、中、低剂量组,中药阳性对照(安胃疡胶囊)组,以及西药阳性对照(雷贝拉唑钠肠溶胶囊)组。空白组和模型组给予2 mL/d蒸馏水灌胃,其余各药物干预组分别给予对应剂量的胶囊内容物混悬液2 mL/d灌胃,持续干预14 d。使用游标卡尺测量胃溃疡最大长径并计算溃疡指数(UI);采用HE染色观察大鼠胃组织形态学变化;采用ELISA法检测大鼠胃组织中白细胞介素1(IL-1)、IL-4、IL-6和IL-13的含量;采用RT-qPCR法检测大鼠胃组织中血管细胞黏附因子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的mRNA表达水平,并采用Western blot法检测大鼠胃组织中上述指标的蛋白相对表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜可见明显溃疡面,光镜下观察可见黏膜组织缺失和坏死,胃组织IL-1和IL-6含量明显升高,IL-4和IL-13含量明显降低,VCAM-1和ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,景芪愈溃胶囊高剂量组大鼠的UI显著降低,光镜下观察胃溃疡的恢复情况最接近空白组,胃组织IL-1和IL-6含量显著降低,IL-4和IL-13含量显著升高,VCAM-1和ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:景芪愈溃胶囊可有效促进胃溃疡的愈合,其机制可能与抑制细胞黏附分子VCAM-1和ICAM-1表达进而减少促炎因子IL-1和IL-6含量,增加抗炎因子IL-4和IL-13含量,从而调节促炎因子与抗炎因子的平衡有关。

摘要：目的 利用化学生物信息学探究敦煌大泻脾汤治疗胃癌的潜在作用机制及物质基础。方法 CCK-8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况。TCMSP数据库下载大泻脾汤中药化合物,Swiss Target Prediction预测化合物潜在靶点。Drugbank、Genecards、TTD及DisGeNET数据库检索胃癌靶点。STRING数据库分析蛋白互作并利用Clusters模块进行靶点聚类。CytoHubba插件筛选大泻脾汤治疗胃癌的核心靶点,ClueGO插件进行核心靶点KEGG富集分析。分子对接评估靶点-化合物亲和力,分子动力学模拟探究动态分子机制。结果 细胞实验结果显示,大泻脾汤冻干粉能够促进胃癌细胞凋亡,可使其细胞周期被阻滞在G0-G1期(P<0.05),抑制其增殖(P<0.05)。网络药理学分析得到大泻脾汤与胃癌的共有靶点188个,通过Clusters模块聚类得到参与炎症反应、血管生成及细胞生长分化的3类靶点,主要涉及TNF signaling pathway、PD-L1 expression and PD-1 checkpoint pathway in cancer及p53 signaling pathway等信号通路。分子对接结果显示,TNF、EGFR及AKT1与核心成分的亲和力最好;粗毛甘草素B、甘草异黄烷酮、5-异戊二烯基紫铆花素等与各潜在关键靶点的亲和力均较好。通过50 ns的分子动力学模拟发现潜在活性分子与其靶蛋白形成了稳定的分子间作用。结论 本研究对敦煌医方大泻脾汤潜在起效的物质基础和分子机制进行了挖掘,为其通过“寒热并用、调和阴阳”治疗胃癌的研究和临床应用提供化学生物信息学参考。

摘要：目的运用析因设计结合响应面法优化当归补血有效部位的渗漉提取工艺。方法采用单因素试验、析因设计试验结合中心组合设计-响应面法,以阿魏酸得率及浸膏得率的权重和为考察指标,对当归补血有效部位的渗漉提取工艺进行优化。结果最佳提取工艺为:13倍70%的乙醇浸泡20小时,料液比为1∶13。结论该方法准确、简便,对渗漉提取当归补血有效部位的预测性良好,对当归的工业化生产有一定指导意义。

摘要：当归具有良好的活血作用,但目前对其发挥“活血”功效的现代科学原理缺乏系统研究,限制了其现代化开发。该研究采用基于结构相似性的靶点反向预测、复杂网络分析、分子对接、结合自由能计算、聚类分析、ADMET计算等计算机辅助药物设计方法结合体外酶活性测定实验系统探讨了当归发挥活血作用的成分及作用机制。靶点反向预测以及复杂网络分析结果显示当归抗凝血的潜在作用靶点有40个。GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析表明预测靶点可能通过作用于补体与凝血级联信号通路发挥抗凝血作用。其中,凝血级联反应和血栓形成中的关键酶THR(thrombin)和FXa(coagulation factor Xa)是治疗血栓栓塞性疾病的药物靶点。全成分分子对接以及聚类分析显示当归针对FXa具有更好的选择性。结合自由能打分值筛选出8个潜在活性成分进行体外酶活实验,结果显示8个化合物分别对THR和FXa具有不同程度的抑制作用,且对FXa活性的抑制作用比对THR更强。对8个活性化合物进行药效团模型构建,得到药效特征AAHH,其中A为氢键受体,H为疏水中心。ADMET计算表明8个活性化合物都具有良好的药动学性质,且安全性较高。该研究以靶点反向预测、复杂网络分析、分子对接及结合自由能计算、体外抗凝活性、分子与靶点的空间结合构象、药效团模型构建及ADMET参数计算为依据,从大数据层面初步阐明了当归活血作用的物质基础及分子机制,并对活性成分进行了药理、毒理计算,首次从全成分计算结合酶活实验揭示了当归对不同凝血蛋白具有明显的选择性和针对性,反映出不同中药的独特功效具有其生物学基础。该研究可为当归的精准用药及其活血成分的现代化开发提供线索。

摘要：目的通过对清肺排毒汤功效和新型冠状病毒肺炎(COVID-19)病机的分析,基于计算机辅助药物设计(CADD)从多靶点结构出发系统探索清肺排毒汤排毒、抑制炎症风暴、利水渗湿3个方面的物质基础和分子机制。方法 TCMSP下载清肺排毒汤成分,基于血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)、白细胞介素-6受体(IL-6R)和水通道蛋白(AQP)分别进行分子对接虚拟筛选并对其结合模式进行分析。对利水药白术、茯苓、猪苓、泽泻进行反向靶点预测和GO分析和KEGG通路富集分析,预测其作用机制。结果阻断病毒作用最突出的前3位中药为甘草、麻黄、枳实,抑制炎症作用最突出的前3位中药是甘草、柴胡、紫菀;清肺排毒汤4个子方中,小柴胡汤阻断病毒、抑制炎症风暴的潜在活性化合物数均排第1。槲皮素及其衍生物对ACE2和IL-6R2个靶点均具有较强结合能力,是潜在的双靶点活性化合物。ACE2的Lys353残基是化合物与ACE2结合的关键位点。白术、茯苓、猪苓、泽泻缺乏阻断病毒、抑制炎症风暴的化合物,分子对接结果显示,这4味药材中含有的东莨菪内酯、去氢齿孔酸、α-D-半乳糖、环氧泽泻烯具有与水通道蛋白4(AQP4)的潜在结合能力。结论清肺排毒汤可通过多种化合物分别与ACE2、IL-6R、AQP4结合,发挥排毒、抑制炎症风暴、利水渗湿的作用;各组成子医方配伍合理,通过多点协同、优势互补发挥防治作用;得到了中药阻断新型冠状病毒(SARS-Co V-2)成分关键的结合位点Lys353,为清肺排毒汤药效机制的多角度挖掘和单体成分的现代化开发提供线索。