摘要：以桃花为原料,采用响应面法优化超声波辅助提取桃花中多酚类物质的提取工艺。在单因素实验的基础上,选择提取温度、超声时间和液料比为提取因子,进行3因素3水平的中心组合(Box-Behnken)实验设计,采用响应面法分析各因素对桃花多酚得率的影响,并且考察了桃花多酚对·OH、DPPH自由基的清除作用。结果表明,桃花多酚的最佳提取工艺条件为:提取温度54℃、超声时间35min、液料比为42:1(mL/g),在此条件下桃花多酚的实际得率为29.394mg/g,与响应面拟合所得方程的预测值29.429mg/g符合良好;桃花多酚对·OH、DPPH自由基有良好的清除能力。

摘要：中国仓鼠卵巢(Chinese hamsters ovary,CHO)细胞是目前重组蛋白质生产的首选宿主细胞。利用CHO细胞生产重组蛋白质,启动子是启动转基因转录的关键。核心启动子是RNA聚合酶与转录起始复合物集合的部位,分为集中型和分散型两种类型。目前,CHO细胞常用的启动子为病毒启动子、异源启动子、内源性和诱导性启动子等。也可以利用合成生物学及相关的数据库,人工设计合成启动子及鉴定新型启动子。本文综述了CHO细胞常用的启动子以及人工设计的合成启动子在CHO细胞中重组蛋白质表达方面的进展,为哺乳动物细胞选择合适的启动子,保证蛋白质表达量最大化,并确保长时间表达稳定性提供参考。

摘要：根据克隆的杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因.经原核表达、Ni2+亲和层析法纯化,免疫动物制备抗体.抗体蛋白质印迹分析检测结果表明抗体能特异结合盐藻细胞分子量为29 kD的多肽.

摘要：以PCR扩增克隆survivin启动子为例,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增克隆survivin启动子。通过软件在线分析扩增的survivin启动子酶切位点,将扩增与预期的片段大小一致的DNA片段进行酶切,再进行测序。结果表明,采取酶切鉴定PCR产物的方法,可以初步对PCR产物是否正确做出判断。

摘要：1引言纳米技术是指在0.1～100 nm空间尺度上操纵原子和分子对材料进行加工,制造具有特定功能的产品或对物质及其结构进行研究的一门综合性的高新技术学科.纳米技术始创于20世纪80年代,在90年代获得了突破性的进展.纳米技术与医学的结合形成了新兴边缘学科--纳米医学,即在分子水平上利用分子工具和人体的知识,从事疾病的诊断、治疗、预防和保健等.在认识生命的分子基础上,人们可以设计制造大量的具有奇特功效的纳米装置,这些装置能够发挥类似于组织和器官的功能;这些装置可以在人体的各处畅游甚至出入细胞,在人体的微观世界里完成畸变的基因修复、扼杀刚刚萌芽的癌细胞、捕捉侵入人体的细菌和病毒、探测机体内化学或生物化学成分的变化、适时地释放药物和人体所需的微量物质、及时改善人的健康状况等特殊使命.纳米技术在医学领域中的普遍应用将使21世纪的医学产生一个质的飞跃.

摘要：报道了一种简便的制备分子量大小为100-1000bp DNA marker的方法,其原理是以一段特异的DNA片段为模板,设计PCR引物,采用多重PCR的方法一次扩增100-1000bp系列条带,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,即可得到条带清晰的DNA marker。

摘要：目的探讨一种结合DNA片段回收扩增目的片段的方法。方法以PCR扩增克隆β-珠蛋白MAR和survivin启动子为例,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增克隆β-珠蛋白MAR和survivin启动子。结果 PCR产物有非特异DNA片段、根据DNA片段大小采取凝胶DNA回收与预期片段相符的DNA片段,送公司测序。测序结果表明所扩增的序列和Gen-Bank报道的序列一致。结论用该方法可以成功克隆出目的DNA片段。

摘要：背景:核基质附着区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列,不仅可影响邻近内源基因的表达,还能克服转基因沉默,提高外源基因的转录与表达。目的:探讨在CHO细胞中β-干扰素核基质附着区对氯霉素乙酰转移酶转基因表达的影响。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-04在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。材料:CHO细胞株由中国典型培养物保藏中心提供。含氯霉素乙酰转移酶报告基因及G418筛选标记的质粒pCATG载体由本实验室构建。方法:将PCR扩增得到的人β-干扰素核基质附着区分别用SacI/KpnI及BamHI/SalI酶切,连接至用相应内切酶酶切的pCATG载体上,转化***109,提取质粒行酶切电泳,将构建好的载体命名为pCAT-MAR,该载体含氯霉素乙酰转移酶报告基因表达盒及两侧的β-干扰素核基质附着区。分别用载体pCATG及pCAT-MAR转化CHO细胞,提取具有G418抗性的细胞株基因组DNA,PCR扩增氯霉素乙酰转移酶基因。主要观察指标:ELISA法分析氯霉素乙酰转移酶报告基因的表达。PCR法检测pCAT-MAR载体是否稳定整合在宿主基因组上。结果:①pCATG转化的CHO细胞共筛选出16个阳性细胞株,pCAT-MAR转化的CHO细胞筛选出17个阳性细胞株。β-干扰素核基质附着区可使氯霉素乙酰转移酶报告基因表达水平提高2.8倍,pCATG转化CHO细胞的变异系数为2.0650,pCAT-MAR转化CHO细胞的变异系数仅为0.8131。②稳定转化的细胞株基因组DNA均扩增出437bp目的片段,证明pCAT-MAR载体已经稳定整合到基因组上。结论:β-干扰素核基质附着区能提高转基因在CHO细胞的表达水平,并且可降低不同转化细胞株之间转基因表达的差异性。

摘要：根据GenBank登录的序列号,使用primer5.0进行引物设计,提取人的外周血基因组DNA为模板,PCR方法扩增出人β-珠蛋白MAR序列,将MAR序列插入到逆转录病毒表达载体pLXSN,构建MAR序列介导的逆转录病毒载体。酶切和测序鉴定后,阳离子聚合物转染PA317细胞,G418筛选出阳性细胞克隆,提取病毒液上清,测定逆转录病毒颗粒滴度,逆转录病毒颗粒的最高滴度为1.6×106CFU/mL,成功建立了MAR介导的逆转录病毒包装细胞系。

摘要：通过分析目前药学分析化学教学中存在的问题,提出了传统教学与基于PBL模式的项目化教学相结合的教学方法。项目设计以解决药物分析实际问题为线索,综合了传统教学、项目化教学和PBL教学的各自特点,既保证了学生基本知识和基本理论教学的系统化,又有利于学生自主学习能力和创新能力的培养和提升,达到了较满意的教学效果。