摘要：目的:比较现有的DNA制备方法,建立一种从甲醛固定石蜡包埋组织(formalin-fixed paraf-fin-embedded tissues,FFPET)提取高质量基因组DNA的方法。方法:将传统基因组DNA提取方法与市场供应的DNA亲和层析柱结合在一起,以水浴脱腊法替代二甲苯脱腊法,设计一种改良的基因组DNA快速提取方法,从石蜡包埋宫颈癌组织标本提取基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳法和聚合酶链式反应法进行鉴定。结果:改良的基因组DNA提取法整合了水浴脱蜡与DNA亲和层析柱的优点,从石蜡包埋宫颈癌组织中获得了高质量的基因组DNA,特别是能以很高的效率回收大于20 kb的基因组DNA大片段。结论:改良的基因组DNA提取方法简单快捷,是一种从石蜡包埋组织中回收高质量基因组DNA的有效途径。

摘要：目的 调查2021年4—7月新疆维吾尔自治区某医学院大学生人群蠕形螨的感染状况和流行因素。方法 采用透明胶纸法检测受试人群皮肤样本统计蠕形螨感染率、寄生部位和种类分布等结果。设立阳性和阴性人群配伍,设计网络调查问卷调研大学生人群对蠕形螨知识的认知和检测意愿及与蠕形螨感染相关的洁肤美妆、饮食、睡眠等行为因素。皮肤电生理检测仪检测并统计该人群皮肤类型、水份、油份、弹性、仪器评分等生理指标。试纸条法化验化妆品混合样品中铅、汞、砷、镉浓度。结果 受试人群412人检出皮肤蠕形螨感染者40人,感染率9.71%(40/412)。男性感染率5.33%(12/225),女性感染率14.97%(28/187),性别差异有统计学意义(χ^(2)=10.830,P=0.001 0)。收集有效问卷517份,半数人群对皮肤蠕形螨感染无检测意愿。洁肤美妆因素中涂拭化妆品层数和是否使用睡眠面膜在蠕形螨感染阳性和阴性人群差异有统计学意义,蠕形螨感染阳性人群日常涂拭化妆品3层以上人数占40.00%(16/40),是阴性人群的4倍(χ^(2)=7.802,P=0.005 2),蠕形螨感染与使用过夜睡眠面膜呈负相关性,阴性人群使用睡眠面膜占63.33%(19/30),是阳性人群的3倍以上(χ^(2)=13.590,P=0.000 2)。蠕形螨感染阳性人群使用洁面皂、洗面奶等洁肤用品的占比高于阴性人群(χ^(2)=4.755,P=0.029 2),在化妆频次组间差异无统计学意义(χ^(2)=0.345,P=0.556 8)。其他行为因素中蠕形螨感染阳性人群有辛辣饮食习惯和枕巾换洗时间长于半月的人数占比,均接近阴性人群中该因素人数占比的2倍,组间比较差异有统计学意义(χ^(2)=4.880,P=0.027 2;χ^(2)=13.590,P=0.000 2)。蠕形螨感染阳性人群油性皮肤占27.50%(11/40),干性皮肤占17.50%(7/40);阴性人群油性皮肤占3.33%(1/30),干性皮肤占13.33%(4/30)。蠕形螨感染阳性人群皮肤弹性百分比平均值和仪器评分平均值均高于阴性人群(t弹性=4.091;t评分=3.372;P0.05)。阳性人群化妆品混合样本检测出铅、汞超标各1例,其中2种蠕形螨分别寄生2个部位感染者的化妆品样本检出铅超标。结论 中国各地区高校学生生源地及受试人群性别、族别分布的不均衡导致蠕形螨感染的南北方、性别和民族差异的结论不一致。除既往蠕形螨感染相关因素,学生群体蠕形螨感染还可能与睡眠面膜的使用及化妆品中铅、汞含量的蓄积相关。医学生对蠕形螨相关医学健康知识认知匮乏且渠道驳杂,皮肤蠕形螨检测意愿不高,需加强现代医学生对常见医学节肢动物知识的学习引导。

摘要：目的建立快速检测棘球绦虫感染犬粪便的DNA检测方法—环介导等温扩增技术(loop-mediated ***)。方法针对细粒棘球绦虫线粒体DNA Cox1基因6个位点特异性的设计4条LAMP引物,利用LAMP法和普通PCR方法同时检测棘球绦虫、肥胖带绦虫以及犬肠道内包括犬蛔虫和泡状带绦虫的DNA来验证LAMP方法的特异性;将转入Cox1基因片段的质粒作为标准阳性对照,并做系列10倍稀释同时用LAMP和PCR方法进行检测来比较两者的敏感性。此外,运用LAMP法检测13份犬粪DNA样本。LAMP扩增结果通过肉眼、电泳和酶切来鉴定。结果以棘球绦虫DNA为模板的反应体系出现LAMP扩增反应产物,其它寄生虫和肥胖带绦虫没有出现LAMP扩增反应产物。LAMP检测Cox1基因的敏感性比普通PCR高出10倍,用于8只人工感染的犬检测结果均为阳性,而5只健康犬为阴性。结论初步建立一种特异、敏感检测棘球绦虫感染犬的快速检测方法,不需要PCR仪、凝胶成像仪等昂贵的设备和电泳观察步骤,适于包虫病流行区和基层动物医院棘球绦虫感染犬的检测。

摘要：目的研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9(EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。方法根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测多肽抗体滴度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定多肽抗体免疫活性,免疫荧光实验分析EgAQP9的亚细胞定位,免疫组化实验分析EgAQP9组织定位。结果免疫新西兰兔成功制备出多肽抗体;间接ELISA检测其多肽抗体效价高达1∶256000;Western blot结果显示多肽抗体能够特异识别细粒棘球绦虫中36 kDa处的条带,与EgAQP9预测的相对分子量大小相符;免疫荧光实验结果显示EgAQP9分布于棘球蚴生发细胞的胞质、胞膜中;免疫组化实验显示该蛋白主要分布在原头蚴表面及棘球蚴囊泡生发层。结论本研究以制备的EgAQP9兔源多克隆抗体定位了AQP9在棘球蚴生发细胞、原头蚴及棘球蚴囊壁中的分布状况。

摘要：背景:骨形成蛋白2是骨基质中最重要骨生长因子,主要生物学作用是促进未分化的间充质细胞和骨系细胞的募集和分化,是骨生成的启动因子,可以作为骨修复基因治疗的理想目的基因。目的:使用前期已经构建成功的pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒转染兔骨髓间充质干细胞。设计、时间及地点:细胞学观察实验,于2007-12/2008-06在新疆医科大学自治区地方病分子生物学实验室完成。材料:良种新西兰大白兔由新疆医科大学动物试验中心提供,pIRES2-EGFP-BMP-2由本校分子生物学实验室构建、保存。方法:采用贴壁法及密度梯度离心法提取骨髓间充质干细胞。采用脂质体介导转染法将pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒转染兔骨髓间充质干细胞。主要观察指标:通过荧光显微镜、反转录聚合酶链式反应、免疫组织化学及Western免疫印迹检测其转录、表达活性。结果:转染的兔骨髓间充质干细胞细胞可见绿色荧光蛋白的持续表达,绿色荧光蛋白分布于整个细胞,呈胞浆分布,说明重组载体构建成功并能在体细胞中表达。转染pIRES2-EGFP-BMP-2的兔骨髓间充质干细胞经G418抗性筛选并传代、培养4周后,RT-PCR反应可扩增出112kb条带,大小与预期相符合。Western免疫印迹检测显示,经pIRES2-EGFP-BMP-2转染的兔骨髓间充质干细胞经在相对分子质量为30×103处显现单一特异性条带,表明为骨形成蛋白2基因表达产物。免疫组织化学显示,转染pIRES2-EGFP-BMP-2后经G418抗性筛选并传代、培养4周后的兔骨髓间充质干细胞细胞质中有棕黄色颗粒阳性信号。结论:用pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒成功转染兔骨髓间充质干细胞并获得表达。

摘要：目的:研究组织因子抑制物2(TFPI-2)基因在维吾尔族妇女宫颈病变组织中的甲基化水平,探讨其甲基化水平变化与宫颈病变的关系。方法:收集维吾尔族妇女慢性宫颈炎、宫颈内瘤变(CIN、cervical intraepithelial neoplasia)Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ和宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者的新鲜组织标本,提取高质量基因组DNA和RNA,设计TFPI-2基因启动子区CpG岛片段特异性PCR引物及RT-PCR引物,应用Sequenom MassARRAY甲基化DNA定量分析平台和半定量RT-PCR技术,对维吾尔族妇女宫颈组织DNA进行甲基化水平定量分析。结果:分析Sequenom MassArray质谱数据,TFPI-2基因启动子区CpG岛片段(目的片段)甲基化水平定量差异显著(P<0.05)。分别对TFPI-2的单点CpG位点甲基化水平差异进行分析,可见TFPI-2基因的目的片段的CpG-1、CpG-6、CpG-7、CpG-8、CpG-9和CpG-11等六个CpG位点甲基化率在肿瘤与正常对照之间均有统计学差异(P<0.05)并且两个CpG位点相关性很密切(r<0.5、P<0.01);半定量RT-PCR鉴定结果表明,TFPI-2 mRNA表达水平在宫颈炎组增高,在CINⅠ/Ⅱ/Ⅲ组降低,而在宫颈鳞癌组最低,宫颈炎组与宫颈癌组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),说明该基因转录表达水平下调伴随着宫颈病变进程。结论:维吾尔族宫颈癌细胞内的TFPI-2基因启动子区CpG岛高甲基化与该基因表达水平变化密切关联。在维吾尔族妇女宫颈病变进程中TFPI-2基因启动子高甲基化是其基因的转录水平(mRNA)下调的重要原因,可能是宫颈癌的早期预警指标,为该基因甲基化相关的表观遗传学研究提供了依据。

摘要：目的利用分子克隆技术构建36型腺病毒(Ad36)腺病毒基因早期转录区4可读框基因1(E4ORF1)重组原核表达质粒pET30a-E4ORF1,经诱导表达后,制备并纯化获得E4ORF1抗原,经免疫兔后获得多克隆抗体。方法根据NCBI数据库中人Ad36基因组全序列,设计引物、PCR扩增其中的E4ORF1基因全长并将其克隆至原核表达载体中、测序。将测序正确的原核表达质粒pET30a-E4ORF1转化至***21(DE3)菌株中,通过探索E4ORF1蛋白的最佳诱导条件后,对重组蛋白进行大量诱导表达和纯化。将纯化获得的重组蛋白免疫新西兰白兔,在5次免疫后分离血清,ELISA检测抗体效价。抗原亲和纯化出E4ORF1多克隆抗体,Western blot法检测抗体的特异性。结果成功扩增E4ORF1基因,经测序比对与GenBank序列一致,大小为408 bp,证明成功构建原核重组表达质粒。经鉴定重组蛋白的相对分子质量(M_(r))约14000,ELISA检测5次免疫后兔血清抗体效价达1∶320000。Western blot法证明该抗体具较高的特异性。结论成功表达E4ORF1蛋白,并制备了高特异性的兔抗E4ORF1多克隆抗体。

摘要：在医学微生物学实验教学中体现专业性设计，以学生为主体，提高学生实际动手和操作能力为目的，提高微生物学实验质量，培养不同专业高质量医学人才；同时使不同专业医学生毕业后能够运用所掌握的微生物学知识，在各自的行业领域很快找到结合点，更好地为社会服务。

摘要：基础医学专业学生旨在成为兼具教学、科研、基础与临床相结合的医学高级专门人才。医学免疫学是基础医学专业学生的必修课之一,有针对性的医学免疫学教学思考和设计显得尤为重要。医学免疫学教学应充分利用包括新冠肺炎在内的疾病、网络资源等促进课程改革,将传统教材内容与临床疾病相结合,同时结合疫情期间的感人故事等,培养基础医学专业学生们的使命感、辩证思维能力、全局意识等,全方位开展生物时代医学生的教育。

摘要：目的:探讨新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞癌组织C/EBPβ基因启动子500 bp和外显子区序列的单核苷酸多态性位点。方法:C/EBPβ基因启动子500 bp和外显子区域设计6对引物,使用聚合酶链反应结合DNA测序方法分析15例维吾尔族妇女子宫颈鳞癌组织和2例子宫颈正常组织C/EBPβ基因序列。结果:C/EBPβ基因上检测出6个已知SNP位点和3个新发现的或低频的多态性位点,有1例标本检测发现在2091-2092处插入GGCGGCAGC 9个碱基,而在维吾尔族正常子宫颈组织未发现新多态性位点。结论:C/EBPβ基因上新的多态性位点可能与维吾尔族子宫颈鳞癌发生相关。