摘要：根据同源序列克隆原理设计一对引物,以绵羊脑组织总RNA的反转录产物为模板,利用RT-PCR扩增绵羊Noggin基因cDNA全长编码区,克隆到pMD-18T载体。测序验证后,提取pT-Noggin质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pET41a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。序列分析表明,绵羊Noggin基因的cDNA全长编码区(GenBank登录号为FJ751853)为699bp,编码232个氨基酸,与其他哺乳动物氨基酸序列同源性达到95%以上。SDS-PAGE结果显示,诱导表达的融合蛋白大小为60ku,与预期蛋白大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白为His融合蛋白。说明成功克隆了绵羊Noggin基因的编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。

摘要：为研究心房利钠肽(ANP)对阿勒泰大尾羊体脂代谢的短期效应,本试验选取8只1.5岁雌性阿勒泰大尾羊静脉滴注心房利钠肽,采用自身对照试验设计,对照期静脉滴注生理盐水,试验期按照1.125μg/kg体重的剂量静脉滴注合成绵羊ANP。连续滴注4d,在第4天分别于滴注前(即0min)和滴注开始后15、30、45、60、90和120min采集血液分离血浆用于测定脂代谢相关生化指标。结果表明,静脉滴注ANP对阿勒泰大尾羊血浆中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)无显著影响(P>0.05),甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、甘油含量均有不同程度的增加。在滴注ANP15min时,TG含量较对照期增加了21.11%(P<0.01),之后TG含量随滴注时间呈下降趋势。滴注ANP15min后,试验期血浆中FFA水平均高于对照期,但仅在120min时显著高于照期,血浆FFA水平提高了11.36%(P<0.05)。在滴注45min时,试验期血浆中甘油含量相对于对照期含量增加了36.06%(P<0.05),随后恢复正常水平。由此可见,ANP在一定程度上增加了阿勒泰大尾羊的脂肪分解。

摘要：本研究旨在分析颈静脉短期滴注化学合成心房利钠肽(ANP)和树眼镜蛇属利钠肽(DNP)嵌合肽AD-NP对绵羊血脂生化指标的影响。试验选取8只体重相近、健康状况良好的1.5岁左右阿勒泰大尾羊母羊为试验动物,采用自身对照试验设计,对照期静脉滴注生理盐水100 mL,试验期根据绵羊体重滴注1.125μg/kg AD-NP的生理盐水100 mL,滴注持续时间45 min。在第4天静脉滴注开始前、开始后15、30、45、60、90和120 min以及滴注结束第2天和第5天12:00采集空腹静脉血液样本以测定血脂生化指标。结果显示,滴注AD-NP对阿勒泰大尾母羊血液中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均无显著影响(P>0.05)。在滴注AD-NP 45 min时血液中甘油三脂(TG)含量较对照期降低26.58%(P<0.05),在滴注30 min时非酯化脂肪酸(NEFA)水平升高47.62%(P<0.05)。在滴注开始和45、120 min时,试验期血液中甘油含量较对照期提高25.04%、36.67%和25.86%(P<0.05)。由此可见,以1.125μg/kg的剂量静脉滴注AD-NP 3 d后在促进绵羊释放TG、甘油和NEFA方面具有一定作用。

摘要：Objective] This study aimed to clone ovine activin receptor type llB （Ac-tRIIB） gene, construct the prokaryotic expression vector and express the target gene in vitro, thus providing basis for further function verification. [Method] The template cDNA which was reversely transcribed from total RNA of sheep liver tissue, was subjected to polymerase chain reaction （PCR） using specific primers of ActRIIB. The ful-length cDNA of ovine ActRIIB was obtained by pMD18-T cloning and sequencing for bioinformatics analysis. Ovine ActRIIB encoding sequence was subcloned into prokaryotic expression vector pET41a with restriction sites BamHl/Notl, and then transformed into BL21 （DE3）. The induced products by lPTG were analyzed with SDS-PAGE and Western Blot. [Result] The amplified ful-length cDNA of ovine Ac-tRllB gene was 1 564 bp in length （Genbank accession number： JX422071.1） with an open reading frame of 1 539 bp, encoding 512 amino acides. Ovine ActRllB shared the highest homology （99.6%） with bovine ActRllB. ActRllB had highly ho-mologous C-terminal domains and belonged to the TGFβ family. After prokaryotic expression, an approximately 92 kD His-tagged ActRllB recombinant protein was obtained, which was consistent with the excepted result. [Conclusion] Cloning and successful expression of ovine ActRIIB laid solid foundation for further investigation of its biological function.

摘要：根据同源序列克隆原理设计一对引物，以绵羊脑组织总RNA的反转录产物为模板，利用RT—PCR扩增绵羊Noggin基因eDNA全长编码区，克隆到pMD-18T载体。测序验证后，提取pT—Noggin质粒经BamHI和XhoI双酶切回收目的条带，亚克隆到pET41a原核表达载体，转化BL21（DE3）菌，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。