摘要：目的克隆新塔花Ziziphora bungena黄酮类化合物生物合成途径中关键酶查耳酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因,对其进行组织表达特异性分析,构建原核表达载体并进行重组蛋白诱导表达。方法结合新塔花转录组数据设计特异性引物,通过RT-PCR克隆新塔花查耳酮合成酶zbCHS基因,对其进行生物信息学分析,通过RT-PCR进一步分析其组织表达特异性,构建原核表达载体pET28a-chs,并转化至BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达。结果zbCHS基因长1226 bp,包含一个长度为1176 bp的开放阅读框,编码319个氨基酸,其理论相对分子质量为42848.37。该编码蛋白定位于细胞质中,不存在跨膜区及信号肽,为非分泌蛋白,有1个糖基化位点和31个磷酸化位点。α-螺旋是该蛋白多肽链中大量的结构元件,散布于整个肽链之中。系统进化树分析表明,新塔花zbCHS基因与丹参、藿香、紫苏等亲缘关系最为接近。RT-PCR结果显示zbCHS基因在各组织中均有所表达,在叶中表达量较高,花相对表达量次之,根、茎中表达量相对较低。原核表达载体pET28a-chs在BL21(DE3)感受态细胞表达系统中,经IPTG诱导后,有明显的重组蛋白表达,其相对分子质量为42800,与预测相符合。结论通过对zbCHS基因的全长cDNA克隆、组织表达特异性分析和原核表达载体的构建,为进一步研究zbCHS基因在新塔花黄酮类化合物生物合成与基因调控提供依据,最终为该药材品质的提升奠定基础。

摘要：对维药新塔花(Ziziphora bungena)萜类化合物生物合成途径中,关键酶1-羟基-2甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸合成酶HDS基因克隆,进行组织表达特异性分析,为研究新塔花萜类化合物生物合成途径与基因调控提供基础。结合新塔花转录组数据库,根据编码区序列设计引物,通过RT-PCR方法对Z. bungena基因HDS (zbHDS)的编码区cDNA进行克隆,对其进行相关生物信息学分析,通过Real-Time进一步分析其组织表达特异性。RT-PCR扩增了一个长2 465 bp的zbHDS (登录号:MG065856)基因片段,含一个2 229 bp的开放阅读框,编码742个氨基酸。进化树分析结果显示,与丹参(Salvia miltiorrhiza)具有较近的亲缘关系。Real-Time PCR结果显示zbHDS基因在各器官中均有表达,在茎和叶中表达量较高,根和花中表达量相对较低。本研究首次从新塔花中克隆HDS基因并获得其编码区序列,zbHDS基因具有组织表达特异性,为进一步研究新塔花中萜类化合物生物合成途径提供数据支持。

摘要：目的建立维吾尔药毛菊苣及其易混品菊苣的位点特异性PCR鉴别方法。方法采集不同地理区域的毛菊苣及其易混品,提取样品基因组总DNA。通过对其叶绿体rbcL基因片段进行扩增、测序,进行多重序列比对后根据其变异位点设计位点特异性鉴别引物,对其反应条件进行优化,确定检出限,建立位点特异性PCR鉴别方法。结果建立的位点特异性PCR鉴别体系优化结果为30μL反应体系包含Taq酶0.25 U、10×buffer 2.5μL、d NTP 2.0μL、正、反向引物各0.5μL、总DNA 2μL、dd H_2O 22.25μL。适宜的扩增条件为94℃预变性3 min;94℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸1 min,32个循坏;最后72℃延伸7 min。对20份毛菊苣与菊苣药材进行扩增,其中毛菊苣能够扩增出约230 bp目的片段条带,而菊苣样品则不能扩增出明显的目的条带。结论建立并优化了毛菊苣及其易混品菊苣位点特异性PCR鉴别技术,能够准确而可靠的达到2种药材的有效鉴别。

摘要：目的:制备小茴香挥发油β-环糊精包合物并对其进行结构表征及稳定性研究。方法:以小茴香挥发油包合率、包合产率、包合物中反式茴香脑的含量建立综合评分指标,探究小茴香挥发油与β-环糊精比例、包合温度、包合时间对其的影响,设计正交试验优化制备工艺。通过扫描电镜(SEM)法、薄层色谱(TLC)法、傅立叶红外光谱(IR)法、差示扫描量热(DSC)法进行表征。最后采用光照、高温、高湿试验考察包合物稳定性。结果:由饱和水溶液法得到最佳条件为挥发油与β-环糊精比例1∶8(mL/g),包合温度40℃,包合时间60 min,该条件下小茴香挥发油包合物的包合率为96.90%,包合产率为93.61%,反式茴香脑含量为6.81%,综合评分为99.68;所得包合物为白色粉末,质地疏松,包合效果较好。经扫描电镜法、薄层色谱法、傅立叶红外光谱法、差示扫描量热法表征发现,包合物已经形成。其在光照(4000 lx)5 d内稳定性良好,高温(60℃)下包合物中挥发性成分容易流失,在相对湿度大于75%时会潮解结块,在光照时间较长,高温高湿的条件下,包合率和反式茴香脑含量明显降低。结论:最佳包合工艺的包合率、包合产率较高,工艺稳定。贮藏在常温干燥密封的环境下,小茴香挥发油β-环糊精包合物较小茴香挥发油稳定性良好。

摘要：目的:优选维吾尔药刺山柑果总酚酸的提取工艺。方法:采用乙醇回流提取法,通过单因素试验确定提取次数,以乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间为自变量,总酚酸提取量为因变量,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,利用响应面法优选刺山柑果总酚酸的提取工艺并进行预测分析。结果:最佳提取工艺为加15倍量70%乙醇提取2次,每次1 h;总酚酸提取量7.29 mg·g-1,与模型预测值(7.34 mg·g-1)的相对标准偏差0.68%。结论:星点设计-响应面法优选的刺山柑果总酚酸提取工艺简单、精密度高、可预测性好。

摘要：目的:优化维吾尔药刺山柑果总生物碱的提取工艺。方法:以乙醇体积分数、加醇倍量、提取时间为自变量,以刺山柑果中总生物碱(以甜菜碱为对照)含量为因变量,应用Design-Exepert 8.0.5软件,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用响应面法优化出最佳提取工艺,同时进行预测值与实测值比较分析。结果:二项式拟合复相关系数R2=0.955 8,回归方程代表性较好;确定最佳提取工艺为10倍量90%的乙醇提取2次,每次1.5 h;经5次验证试验,最佳工艺提取的刺山柑果总生物碱含量为77.99 mg/g(RSD=0.95%,n=5),与预测值78.33 mg/g比较偏离率小于2%。结论:星点设计-响应面法优化刺山柑果总生物碱的提取工艺方法简单,精密度高,模型可靠,可预测性趋势良好。

摘要：对药用植物刺山柑遗传多样性研究分析,建立了刺山柑ISSR-PCR稳定的反应体系,利用植物基因组试剂盒提取刺山柑药材DNA;根据此引物采用正交实验设计考察影响PCR扩增的4个主要因素,筛选出最佳反应条件:25μL ISSR-PCR的最佳浓度为10×buffer 2.5μL、引物0.2μmol/L、模板40 ng/μL、dNTPs 0.4 mmol/L、Taq/DNA聚合酶0.5 U,利用梯度筛选获得U 808引物最佳退火温度。为利用这一分子标记对药用植物刺山柑进行遗传多样性分析奠定了基础。

摘要：目的:筛选出新塔花在不同组织(根、茎、叶、花)及脱落酸(ABA)处理不同时间的叶片中表达相对稳定的内参基因。方法:从新塔花转录组数据中搜索到5个看家基因ZbIF3G1、ZbGAPDH1、ZbEF1γ、ZbUBC9、ZbTUBα,将其作为新塔花相对实时定量PCR候选内参基因,并设计内参引物。利用实时荧光定量PCR获得5个候选内参基因的Ct值,通过3种基于不同算法的软件(GeNorm、NormFinder和BestKeeper)对内参基因稳定性进行分析。结果:ZbGAPDH1、ZbEF1γ的表达相对更为稳定,适合作为新塔花不同组织及ABA处理的基因表达研究的内参基因,并用新塔花ZbFLS、ZbCHI基因的表达分析实验进一步验证了上述预测。结论:确定ZbGAPDH1与ZbEF1γ为适合用于新塔花定量分析的内参基因,该研究为新塔花后续相关基因表达研究奠定了基础。

摘要：目的优化复方刺山柑胶囊的最佳水提取工艺。方法以甘草酸铵提取率、没食子酸提取率、浸膏得率为综合评价指标,以提取次数A(1、2、3次)、提取时间B(1.0、1.5、2.0小时)和提取溶剂用量C(8、10、12倍药材量)为考察因素,采用单因素试验和L9(34)正交试验设计法优化复方刺山柑胶囊中甘草、金钱草、诃子和黄芪的最佳水提取工艺。结果方差分析结果显示,A因素对考察指标的综合影响具有显著性(P0.05)。优选的最佳水提取工艺条件为A3B1C1,即加入8倍药材重量的水,提取3次,每次提取1小时。结论优选的工艺合理可行。

摘要：目的优选芪术平喘止汗胶囊的提取工艺,为其进一步开发提供参考。方法以总多糖、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量和出膏率为评价指标,采用层次分析(AHP)法、基于指标相关性的权重赋权系数(CRITIC)法以及AHP-CRITIC混合加权法来确定处方中各指标的权重系数,结合正交试验结果优选出芪术平喘止汗胶囊的提取工艺参数。结果最终优选出的芪术平喘止汗胶囊的提取工艺条件为:加8倍量水加热回流提取3次,每次1.0 h。结论AHP-CRITIC混合加权法确定的权重系数客观且真实,可以更全面地反映处方的配伍信息,优选得到的提取工艺稳定可行,重复性良好,可为其后续研究与开发提供参考。