摘要：目的建立分子信标荧光定量PCR检测结核分技杆菌的最佳反应体系，探讨影响分子信标荧光定量PCR扩增结果的多个因素。方法利用单因素法和正交实验法，从MgCl2，引物，分子信标探针，dNTP，Taq DNA聚合酶5种因素对分子信标荧光定量PCR反应体系进行优化，并对这两种方法所得的最优体系进行比较。结果单因素法得到的最优反应体系（25μl）为：4mmol／L MgCl2，上、下游引物各0．3μmol／L，分子信标探针0．1μmol／L，200μmol／L dNTP，2U Taq DNA；正交法得到的最优反应体系（25μl）为：6mmol／L MgCl2，上、下游引物各0．2μmol／L，分子信标探针0．1μmol／L，100μmol／L dNTP，3U Taq DNA聚合酶，正交法得到的最优反应体系的荧光定量PCR扩增曲线形状更好，Q值较小，△Rn较大。结论采用正交法得到的荧光定量PCR反应体系优于单因素法，进行实时荧光定量PCR反应体系优化时，正交实验设计是一条科学、可靠、高效、快捷的途径。